基于表面增强拉曼光谱的致病菌检测方法研究进展 被引量：4

1

作者 邱训 伏秋月 +2 位作者 王鹏 李绍新 李英 《激光与光电子学进展》 CSCD 北大核心 2022年第18期25-32,共8页

近年来,细菌感染性疾病不断发生,抗生素的频繁使用使得耐药细菌的数量显著增多,耐药现象愈发严峻。迫切需要一种高效、准确的检测技术来对致病菌作出判断。不同种属细菌其分子组成和结构不同,表面增强拉曼光谱(SERS)主要由于其能反映细... 近年来,细菌感染性疾病不断发生,抗生素的频繁使用使得耐药细菌的数量显著增多,耐药现象愈发严峻。迫切需要一种高效、准确的检测技术来对致病菌作出判断。不同种属细菌其分子组成和结构不同,表面增强拉曼光谱(SERS)主要由于其能反映细菌特有的光谱指纹而被用于区分和反映细胞状态。SERS对致病菌的检测受到多个因素的影响,本文从三个方面回顾了SERS对致病菌的检测并做一简要综述:首先,从基底的设计方面,总结了不同结构和大小的SERS基底对致病菌的检测;其次,回顾了致病菌的共培养、原位还原和静电结合的非标记检测方式以及标记检测包括外标记和内标记方法对致病菌的SERS检测;最后,结合致病菌拉曼光谱分析方法即传统的多变量统计分析方法和先进的机器学习算法对致病菌加以鉴定并对SERS用于致病菌检测进行了总结和展望。 展开更多

关键词 光谱学 表面增强拉曼光谱 致病菌 标记法 非标记法

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中药活性成分直接作用靶点鉴定研究方法及应用 被引量：4

2

作者 魏君楠 戴建业 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2021年第17期5378-5388,共11页

中药因其确切的临床疗效受到越来越多的关注。随着对中药活性成分的深入研究,现已发现很多具有独特活性和药效的潜在创新药物。然而,如何进一步对其药效机制进行挖掘、发现全新的机制和靶点,成为创新中药研究的关键。中药活性成分靶点... 中药因其确切的临床疗效受到越来越多的关注。随着对中药活性成分的深入研究,现已发现很多具有独特活性和药效的潜在创新药物。然而,如何进一步对其药效机制进行挖掘、发现全新的机制和靶点,成为创新中药研究的关键。中药活性成分靶点鉴定一直是研究者们所探寻的重要课题。随着化学生物学技术尤其是化学蛋白组学技术的发展,越来越多的方法被建立并用于中药活性成分的靶点鉴定。简单来说,这些方法大致可被分为标记法和非标记法。标记法是通过将中药活性成分改造为活性探针,进而探寻它们的作用靶标蛋白;而非标记法主要是基于中药活性成分和靶标蛋白结合后会影响靶标蛋白的热稳定性等生物物理性质从而识别可能的作用靶点。主要针对这2大类靶点鉴定方法进行归纳整理,从方法原理、大致操作流程、应用、优缺点等方面进行阐述,为中药活性成分靶点鉴定提供一定的参考,以期助力中药创新研究。 展开更多

关键词 中药活性成分 靶点鉴定 标记法 非标记法 活性探针

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运用交流阻抗技术直接监测DNA杂交 被引量：3

3

作者 徐颖 杨琳 +2 位作者 叶晓燕 何品刚 方禹之 《华东师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期39-48,共10页

介绍了基于交流阻抗技术构建非标记型脱氧核糖核酸(DNA)杂交传感器的方法．以24个碱基长度的寡聚DNA作为实验对象,将5′端巯基化的单链寡聚DNA(SH-ssDNA)探针与巯基乙酸(RSH)同时自组装到金电极表面,形成杂交识别层,利用交流阻抗技术测... 介绍了基于交流阻抗技术构建非标记型脱氧核糖核酸(DNA)杂交传感器的方法．以24个碱基长度的寡聚DNA作为实验对象,将5′端巯基化的单链寡聚DNA(SH-ssDNA)探针与巯基乙酸(RSH)同时自组装到金电极表面,形成杂交识别层,利用交流阻抗技术测量出杂交前后金电极表面电子传递电阻R_(et)的增量作为杂交信号．实验中对DNA探针的自组装时间、杂交温度、杂交时间和阻抗测量液等实验条件进行了观察和优化；通过选择自组装液中SH-ssDNA探针和RSH的浓度,减少DNA在金电极表面的非特异性吸附,同时保证金电极表面自组装的SH-ssDNA探针有合适的疏密度,提高了杂交效率．在各优化条件下,无需扩增杂交信号,此非标记型DNA杂交传感器的检测下限为3．0×10^(-14)mol/L；和完全互补序列相比,一个和三个碱基错配序列分别产生55．6％和1．3％的杂交信号． 展开更多

关键词 DNA杂交传感器 交流阻抗 非标记法

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G蛋白偶联受体配体结合分析技术 被引量：2

4

作者 张君 金亚 +1 位作者 叶燕锐 谭文 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期1-7,共7页

G蛋白偶联受体(G-protein-coupled receptors,GPCRs)是迄今发现的最大的多药物靶点的受体超家族,其激动剂或拮抗剂常被用于治疗各种疾病,在药物研发中扮演重要角色。测定配体与受体亲和力的结合实验是药物评价、研发和作用机理研究中不... G蛋白偶联受体(G-protein-coupled receptors,GPCRs)是迄今发现的最大的多药物靶点的受体超家族,其激动剂或拮抗剂常被用于治疗各种疾病,在药物研发中扮演重要角色。测定配体与受体亲和力的结合实验是药物评价、研发和作用机理研究中不可缺少的部分。用于研究GPCRs与其配体结合的分析技术,可以按照标记方式的异同分为三类:同位素标记法、非同位素标记法和非标记法。非同位素标记法多采用荧光配体标记,利用竞争法或荧光共振能量转移直接获知结合情况;非标记法中利用各种生物传感器,通过检测配体结合受体后胞内分子运动引起的电信号或光信号的变化来表征结合情况。此外,质谱也已被用于受体-配体平衡解离常数的测定,显示了其在非标记结合分析及受体功能研究中的潜力。本文归纳了目前用于GPCRs结合分析的主要技术,对其原理及优缺点进行了综述,并对受体-配体结合分析中新方法的应用进行了展望。 展开更多

关键词 G蛋白偶联受体 受体-配体结合分析 多药物靶点 同位素标记法 非标记法 生物传感器 质谱

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基于T碱基错配非标记荧光法检测Hg2+的新方法

5

作者 陆文涛 王蓉 +1 位作者 侯少龙 张红鸽 《宝鸡文理学院学报（自然科学版）》 CAS 2020年第2期25-31,共7页

目的建立一种高选择性的、非标记、操作简单的检测Hg2+的荧光分析方法。方法利用紫外可见吸收光谱法,在260 nm波长下测吸光度,对DNA进行定量分析,准确测定实验所用DNA片段的浓度;利用荧光光谱法,在激发波长为445 nm,扫描范围为455~650 n... 目的建立一种高选择性的、非标记、操作简单的检测Hg2+的荧光分析方法。方法利用紫外可见吸收光谱法,在260 nm波长下测吸光度,对DNA进行定量分析,准确测定实验所用DNA片段的浓度;利用荧光光谱法,在激发波长为445 nm,扫描范围为455~650 nm下,检测单碱基T/T错配的双链DNA探针加入核黄素和Hg2+前后,核黄素的荧光信号的变化。结果单碱基错配的双链DNA能有效检测10~200 nM Hg2+。该体系的荧光比率(F/F0)与Hg2+浓度具有良好的线性关系,其线性方程为F/F0=0.0009C(nmol/L)+0.0049,相关系数r2=0.9930,检出限为3.3 nM(S/N=3)。相对标准偏差(RSD)小于1.37%;样品回收率为100.8%~103.3%。结论该方法可用于环境水样中Hg2+的测定。 展开更多

关键词 非标记法 T/T碱基错配 荧光分析法 Hg2+

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基于生物质谱的蛋白质组学绝对定量方法研究进展 被引量：12

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作者 曹冬 张养军 钱小红 《质谱学报》 EI CAS CSCD 2008年第3期185-191,共7页

蛋白质组学定量方法包括相对定量和绝对定量两部分。相对定量蛋白质组学(也称比较蛋白质组学)是指对不同生理病理状态下细胞、组织或体液蛋白质表达量的相对变化进行比较分析;绝对定量蛋白质组学是测定细胞、组织或体液蛋白质组中每种... 蛋白质组学定量方法包括相对定量和绝对定量两部分。相对定量蛋白质组学(也称比较蛋白质组学)是指对不同生理病理状态下细胞、组织或体液蛋白质表达量的相对变化进行比较分析;绝对定量蛋白质组学是测定细胞、组织或体液蛋白质组中每种蛋白质的绝对量或浓度。目前蛋白质组学的绝对定量方法主要有基于内标法的蛋白质组学绝对定量方法和基于质谱数据统计分析的非标记方法。蛋白质组学定量的信息可以帮助了解蛋白质在相互作用网络中所起的作用;通过对临床生物标记物绝对量的分析,可以帮助直观地判断疾病的发生和发展过程,这对于临床诊断和疾病治疗都具有现实的指导意义。 展开更多

关键词 定量蛋白质组 绝对定量 同位素标记法 非标记定量法 生物质谱

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HRM-非标记探针法检测IL-15基因SNPs方法的建立 被引量：3

7

作者 王玥 郑启城 +3 位作者 姚秀云 邓兵 宪莹 于洁 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第34期3577-3579,共3页

目的建立用于检测白细胞介素-15(IL-15)基因单核苷酸多态性(SNP)位点的高分辨率熔解曲线(HRM)-非标记探针的方法。方法采用HRM-非标记探针法及小片段扩增法对80名健康儿童IL-15基因4个SNPs位点进行基因分型,采用基因测序法进行验证并同... 目的建立用于检测白细胞介素-15(IL-15)基因单核苷酸多态性(SNP)位点的高分辨率熔解曲线(HRM)-非标记探针的方法。方法采用HRM-非标记探针法及小片段扩增法对80名健康儿童IL-15基因4个SNPs位点进行基因分型,采用基因测序法进行验证并同时与小片段扩增法分型结果进行比较。结果 HRM-非标记探针法与基因测序分型结果一致,准确率为100%;未加入温度内标的小片段扩增法不能区分野生纯合子和突变纯和子。结论 HRM-非标记探针法是对已知SNP位点突变研究的一种廉价、简便、准确的基因分型技术,适合于对已知的SNP位点或基因突变进行分型和检测。 展开更多

关键词 白细胞介素15 多态性 单核苷酸 高分辨率熔解曲线分析 非标记探针法

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化学蛋白质组学在天然产物分子靶标鉴定中的应用 被引量：1

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作者 周璐祺 崔婷茹 +3 位作者 郝楠 赵雨薇 赵斌 刘颖超 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期12-26,共15页

绿色新农药的开发和利用有利于农业的可持续发展,基于天然产物进行活性先导发现及作用机制研究是重要的新农药创制策略,然而其作用靶标和作用机制难以确定,阻碍了其在新农药中的应用。因此发现化合物新靶点对于新农药创制来说是一项既... 绿色新农药的开发和利用有利于农业的可持续发展,基于天然产物进行活性先导发现及作用机制研究是重要的新农药创制策略,然而其作用靶标和作用机制难以确定,阻碍了其在新农药中的应用。因此发现化合物新靶点对于新农药创制来说是一项既重要又艰巨的任务。化学蛋白质组学作为后基因组时代的新技术,目前已经成为研究药物靶点的重要手段之一。本文对基于化学蛋白组学的化合物作用分子靶点发现方法和典型案例进行探析,介绍这些技术的主要原理、应用以及各自的优点和局限性,旨在阐述基于化学蛋白质组学发现药物作用靶标的最新方法,并为天然产物靶点及新农药创制研究提供参考。 展开更多

关键词 化学蛋白组学 药物靶点鉴定 化学标记法 非化学标记法 天然产物

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Lnc RNA TUC338影响人类宫颈癌细胞的蛋白组学分析

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作者 蒋漪桦 朱宇 +5 位作者 杜洪灵 秦锦龙 刘晔 宋君雅 蔡骁垚 金姝 《医学信息》 2022年第13期18-27,共10页

目的探究长链非编码RNA TUC338影响人类宫颈癌细胞的分子机制。方法将人类宫颈癌细胞Hela细胞分为实验组(TUC338组)与对照组(rLV组),分别感染rLV-hTUC338-ZsGreen-Puro慢病毒及rLV-ZsGreen-Puro慢病毒,RT-PCR检测两组细胞Lnc RNA TUC33... 目的探究长链非编码RNA TUC338影响人类宫颈癌细胞的分子机制。方法将人类宫颈癌细胞Hela细胞分为实验组(TUC338组)与对照组(rLV组),分别感染rLV-hTUC338-ZsGreen-Puro慢病毒及rLV-ZsGreen-Puro慢病毒,RT-PCR检测两组细胞Lnc RNA TUC338表达量,并对两组细胞进行蛋白质谱分析。结果感染慢病毒后所有细胞均有绿色荧光显示,RT-PCR结果显示TUC338组Lnc RNA TUC338表达量较rLV组增加,两组均显示较多的蛋白条带;非标记定量法蛋白测序共检测到4323个蛋白。蛋白差异分析显示:与rLV组比较,在TUC338组中下调的蛋白有194个,上调的蛋白有225个。其中,重要的下调蛋白有:LAMB1、HNRNPH3、COX2等,上调蛋白有:EPPK1、ITPR1、AKR1C2等。最显著的下调GO为磷酸化修饰功能,上调GO为细胞骨架功能,最显著的下调KEGG通路为半乳糖代谢通路,上调KEGG通路为肌动蛋白细胞骨架调节通路。共检测到含WD40 repeat结构域(WD40 repeat)等20个蛋白结构域。rLV组和rLV-TUC338组中有显著差异的结构域包括Haem peroxidase,animal等。主要亚细胞成分及主要差异亚细胞成分均为核蛋白,分别占34.23%、24.22%。rLV组和rLVTUC338组中下调的互作网主要包括:prot1(P37268)-prot2(O95864)、prot1(Q6FGH9)-prot2(Q13363)等。上调的互作网主要包括:prot1(P60520)-prot2(A0A024RBQ5)、prot1(P60520)-prot2(Q06330)等。结论Lnc RNA TUC338影响了人类宫颈癌细胞的蛋白组学,是宫颈癌的抑癌基因,并通过糖代谢、磷酸化、细胞骨架这3个通路抑制肿瘤发展。 展开更多

关键词 宫颈癌 长链非编码RNA TUC338 非标记定量法 蛋白组学

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基于质谱技术对结直肠腺癌组织表达蛋白质的分析

10

作者 史文杰 张春泽 李西川 《标记免疫分析与临床》 CAS 2022年第4期541-544,564,共5页

目的分析结直肠腺癌蛋白质组学图谱,评价蛋白质分子作为潜在结直肠腺癌的肿瘤标志物的诊断价值。方法本研究纳入26例结直肠腺癌患者,分别采集患者的结直肠腺癌组织和其癌旁正常组织,我们使用非标定量法(label free)对26个结直肠腺癌组织... 目的分析结直肠腺癌蛋白质组学图谱,评价蛋白质分子作为潜在结直肠腺癌的肿瘤标志物的诊断价值。方法本研究纳入26例结直肠腺癌患者,分别采集患者的结直肠腺癌组织和其癌旁正常组织,我们使用非标定量法(label free)对26个结直肠腺癌组织和26个匹配的正常组织进行了大规模的蛋白质组学检测,分析结直肠腺癌蛋白质组学图谱。用ROC曲线对候选肿瘤标志物进行诊断效能分析。结果主成分分析(PCA)结果表明,肿瘤组织和正常组织的蛋白质组之间有明显的区别。我们共鉴定了3674个蛋白,具有统计学意义的差异蛋白419个,其中包括226个上调蛋白和193个下调蛋白;筛选出2个具有诊断价值的结直肠腺癌候选标志物,RNA结合基序蛋白3(RBM3)的曲线下面积为0.793,灵敏度为80.0%,特异性为71.4%;中性粒细胞胞质因子1(NCF1)的ROC曲线下面积为0.802,灵敏度为85.7%,特异性为72.7%。结论结直肠腺癌发生时,机体发生明显的蛋白质分子水平的变化,NCF1和RBM3可作为辅助诊断的潜在肿瘤标志物。 展开更多

关键词 结直肠腺癌 蛋白质组学 非标记定量法 肿瘤标志物

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核酸探针技术 被引量：1

11

作者 陈勇 李元宗 +1 位作者 常文保 慈云祥 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1995年第4期474-479,共6页

本文对核酸探针技术进行了较全面的综述,介绍了核酸探针的制备及非放射性标记方法.并对核酸的Southern转印杂交,Northern转印杂交,In Situ转印杂交及斑点杂交法的原理及应用进行了简明的评述.

关键词 核酸探针 基因诊断 评述 非放射性标记法

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三种非放射性标记法的原理及其在分子生物学中的应用 被引量：2

12

作者 叶昌荣 戴陆园 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 1998年第3期100-105,共6页

本文结合笔者利用非放射性标记法进行限制性酶切片断长度多态性（ＲＦＬＰ）研究的实践经验，综述了近年来逐渐被广泛应用的三种非放射性标记法的产生、发展、原理和应用。

关键词 非放射性标记法 分子生物学 应用

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一种新型的非放射性标记方法检测马铃薯纺锤块茎类病毒—digoxigenin…

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《内蒙古大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1997年第2期258-260,共3页

关键词 马铃薯病毒 纺锤块茎类病毒 非放射性标记法

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地高辛标记核酸探针的应用

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作者 刘剑凯 洪敏 +1 位作者 董丽雅 陈文华 《白求恩医科大学学报》 CSCD 1995年第4期432-433,共2页

本工作中以肿瘤多药耐受基因ＭＤＲ－１的ｃＤＮＡ的限制片段（５Ａ）为模板ＤＮＡ，把模板ＤＮＡ用随机引物法标记上地高辛标记的脱氧尿苷三磷酸ＤＩＧ－ｄＵＴＰ。将此地高辛标记的核酸探针与变性的同源质粒及部分头颈肿瘤组织ＲＮＡ... 本工作中以肿瘤多药耐受基因ＭＤＲ－１的ｃＤＮＡ的限制片段（５Ａ）为模板ＤＮＡ，把模板ＤＮＡ用随机引物法标记上地高辛标记的脱氧尿苷三磷酸ＤＩＧ－ｄＵＴＰ。将此地高辛标记的核酸探针与变性的同源质粒及部分头颈肿瘤组织ＲＮＡ进行点杂交后，用抗地高辛－碱性磷酸酶及其底物进行酶联免疫分析，探讨了应用这种非放射性地高辛标记的ＤＮＡ探针及其检测系统的敏感性以及应用价值。 展开更多

关键词 非同位素标记法 核酸探针 地高辛 肿瘤 基因表达

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非同位素标记双向杂交法筛选差减文库

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作者 罗敏捷 来茂德 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 2001年第6期493-494,共2页

关键词 差减文库 非同位素标记双向杂交法DIG法 PCR

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