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非同位素mRNA差异显示方法的建立及应用 被引量:6
1
作者 苏青 罗敏 +3 位作者 刘红标 陆志强 陈源 陈家伦 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2000年第5期405-407,共3页
目的建立非同位素mRNA差异显示技术 ,并用以分析鼠脑甲状腺激素的反应基因。 方法用 9-1 0bp的随机但序列确定的引物扩增甲减和正常大鼠脑cDNA ,用PAGE分析PCR产物 ,EB染色 ,切取差异条带 ,再扩增、测序并作同源性分析。 结果得到两个... 目的建立非同位素mRNA差异显示技术 ,并用以分析鼠脑甲状腺激素的反应基因。 方法用 9-1 0bp的随机但序列确定的引物扩增甲减和正常大鼠脑cDNA ,用PAGE分析PCR产物 ,EB染色 ,切取差异条带 ,再扩增、测序并作同源性分析。 结果得到两个 (2 2 6、2 79bp)受甲状腺激素上调、一个 (2 78bp)受甲状腺激素下调的片段 ,前二者与任何已知基因的同源性都低于 80 % ,提示为两个尚未报道的新基因 ,后者即大鼠G蛋白Go的α亚单位基因。 结论非同位素mRNA差异显示技术是一种快速、简便。 展开更多
关键词 差异显示 聚合酶链反应 甲状腺激 同位素
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一种非同位素5α-还原酶抑制剂体外筛选模型的建立和应用 被引量:9
2
作者 况刚 邹文俊 高小平 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期61-64,共4页
目的建立一种非同位素5α-还原酶抑制剂体外筛选模型。方法从大鼠前列腺组织中提取物5α-还原酶,与底物睾酮(T)以及供氢体NADPH共同组成了一种微量反应体系。反应产物二氢睾酮(DHT)用酶免技术(EIA)测定,以产物生成量确定酶活性;对反应... 目的建立一种非同位素5α-还原酶抑制剂体外筛选模型。方法从大鼠前列腺组织中提取物5α-还原酶,与底物睾酮(T)以及供氢体NADPH共同组成了一种微量反应体系。反应产物二氢睾酮(DHT)用酶免技术(EIA)测定,以产物生成量确定酶活性;对反应底物、NADPH、酶浓度以及反应最佳温度和时间进行了优化。结果当底物、NADPH、酶提取物浓度分别为0.25μM、1mM和0.3mg,37℃反应60分钟可获最大酶活性。特异性5α-还原酶抑制剂非那雄胺显著降低5α-还原酶催化产物DHT的生成。进一步对24种中药进行筛选,姜黄、夏枯草等中药提取物具有5α-还原酶抑制剂作用。结论本文建立的非同位素方法有效、可行,可作为一种体外模型筛选和研究5α-还原酶抑制剂。 展开更多
关键词 5α-还原酶活性 筛选 那雄胺 特异性5α-还原酶抑制剂 体外筛选模型 同位素 NADPH 反应产物 中药提取物 二氢睾酮 酶提取物 前列腺组织
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非同位素标记DNA探针初步研究 被引量:7
3
作者 倪锦堂 叶健 +3 位作者 刘健 郑秀芬 李伯龄 丁焰 《中国法医学杂志》 CSCD 1991年第3期129-131,194,共4页
本文报导了将辣根过氧化物酶直接标记在单链 DNA 探针上,制备出非同位素的 DNA 探针,采用化学光增强法检测杂交结果,所得图谱清晰,容易判读。所制备出的 DNA 探针可用于人类性别鉴定和个体识别,为 DNA 检验技术推广应用开辟了新的领域。
关键词 DNA 探针 个体识别 同位素 辣根过氧化物酶
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非同位素反向Northern筛选法 被引量:4
4
作者 张宇伟 来茂德 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期353-355,共3页
此文介绍了一种非同位素简单快速的反向Northern筛选方法。采用非同位素法标记探针,操作简便,不涉及污染环境。在杂交过程中采用三次校正,结果可靠,重复性好。该方法能有效地,高通量地验证差异表达基因。
关键词 同位素 反向 NORTHERN 抑制性差减杂交(SSH)
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非同位素PCR-SSCP方法的初步临床应用 被引量:2
5
作者 毛新 黄明生 +3 位作者 牟庶华 杨光华 曾仲 赵坡 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 1995年第4期4-7,共4页
单链构象多态性检测法(PCR-SSCP)是近年发展起来的一项检测人类基因组突变的新技术。然而,在该技术中需要使用放射性同位素标记的核苷酸或引物,从而限制了其广泛临床研究及诊断方面的应用。本文报告一种改进的PCR-SS... 单链构象多态性检测法(PCR-SSCP)是近年发展起来的一项检测人类基因组突变的新技术。然而,在该技术中需要使用放射性同位素标记的核苷酸或引物,从而限制了其广泛临床研究及诊断方面的应用。本文报告一种改进的PCR-SSCP方法,该方法不用同位素标记引物,而直接在溴乙啶染色的聚丙烯酰胺凝胶上显示SSCP。用该方法对55例平滑肌肉瘤p53基因第7外显子突变的检测表明,38%的瘤组织DNA存在异常的SSCP。其中10例有HaeⅢ和MspI酶切位点的突变(18%),19例有突变型p53蛋白的过度表达(9例同时有异常SSCP改变)。而p53质粒DNA,平滑肌瘤及Alzheimer病患者基因组DNA无p53基因第7外显子扩增片段的异常SSCP改变。同时,还使用该方法对临床诊断的20例Alzheimer病患者和8例健康对照进行了β-淀粉样蛋白前体基因第16和17外显子的扩增及分析,均未发现有异常SSCP改变及EcoRI,BclI酶切位点的突变。本研究结果提示,该非同位素PCR-SSCP方法可靠、敏感、简便、快速,具有潜在的推广价值。 展开更多
关键词 同位素 PCR-SSCP 临床应用 实验室诊断
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核酸的非同位素化学发光分析系统 被引量:4
6
作者 王瑛 《生物工程进展》 CSCD 1995年第3期18-24,6,共8页
核酸的非同位素化学发光分析系统王瑛(中国科学院动物研究所;北京100080)近些年由于在核酸杂交检测中引人化学发光物质代替了传统所用的显色反应,大大改善了系统的灵敏度,从而将核酸的非同位素标记与检测技术提高到一个崭新... 核酸的非同位素化学发光分析系统王瑛(中国科学院动物研究所;北京100080)近些年由于在核酸杂交检测中引人化学发光物质代替了传统所用的显色反应,大大改善了系统的灵敏度,从而将核酸的非同位素标记与检测技术提高到一个崭新的水平,被愈来愈多的实验室采用。化... 展开更多
关键词 核酸 化学发光系统 同位素
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磁分离酶联免疫技术检测血清甲状腺激素的临床应用 被引量:1
7
作者 韩少华 常连刚 《江西医学检验》 2005年第3期275-276,共2页
关键词 磁分离酶联免疫技术 血清甲状腺激 临床应用 技术检测 甲状腺疾病 免疫检测 同位素 高灵敏度 高特异性
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表皮生长因子受体体外测活的非同位素方法
8
作者 葛高翔 吴静 林其谁 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2000年第22期2409-2412,共4页
建立了一种表皮生长因子受体体外测活的非同位素方法.通过克隆表皮生长因子受体主要磷酸化位点 Tyr1173周围 20肽的基因片段与谷胱甘肽 S-转移酶(GST)的融合蛋白作为底物,用抗磷酸化酪氨酸的单克隆抗体PY99来检... 建立了一种表皮生长因子受体体外测活的非同位素方法.通过克隆表皮生长因子受体主要磷酸化位点 Tyr1173周围 20肽的基因片段与谷胱甘肽 S-转移酶(GST)的融合蛋白作为底物,用抗磷酸化酪氨酸的单克隆抗体PY99来检测其磷酸化的程度.此方法在专一性及灵敏度上都比已有方法有显著提高.融合蛋白的Km值(10mol/L)比合成多肽底物的Km值(110mol/L)要低一个数量级.此方法还可用于测定 c-erb B2(Neu/HER2)的酪氨酸激酶活力. 展开更多
关键词 表皮生长因子受体 同位素 融合蛋白 体外测活
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Hydrologic implications of the isotopic kinetic fractionation of open-water evaporation 被引量:1
9
作者 Wei XIAO Yufei QIAN +10 位作者 Xuhui LEE Wei WANG Mi ZHANG Xuefa WEN Shoudong LIU Yongbo HU Chengyu XIE Zhen ZHANG Xuesong ZHANG Xiaoyan ZHAO Fucun ZHANG 《Science China Earth Sciences》 SCIE EI CAS CSCD 2018年第10期1523-1532,共10页
The kinetic fractionation of open-water evaporation against the stable water isotope H_2 ^(18)O is an important mechanism underlying many hydrologic studies that use ^(18)O as an isotopic tracer. A recent in-situ meas... The kinetic fractionation of open-water evaporation against the stable water isotope H_2 ^(18)O is an important mechanism underlying many hydrologic studies that use ^(18)O as an isotopic tracer. A recent in-situ measurement of the isotopic water vapor flux over a lake indicates that the kinetic effect is much weaker(kinetic factor 6.2‰) than assumed previously(kinetic factor14.2‰) by lake isotopic budget studies. This study investigates the implications of the weak kinetic effect for studies of deuterium excess-humidity relationships, regional moisture recycling, and global evapotranspiration partitioning. The results indicate that the low kinetic factor is consistent with the deuterium excess-humidity relationships observed over open oceans.The moisture recycling rate in the Great Lakes region derived from the isotopic tracer method with the low kinetic factor is a much better agreement with those from atmospheric modeling studies than if the default kinetic factor of 14.2‰ is used. The ratio of transpiration to evapotranspiration at global scale decreases from 84±9%(with the default kinetic factor) to 76±19%(with the low kinetic factor), the latter of which is in slightly better agreement with other non-isotopic partitioning results. 展开更多
关键词 Kinetic fractionation factor Craig-Gordon model Moisture recycling Evapotranspiration partitioning Deuteriumexcess
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原位杂交组织化学的进展及其应用
10
作者 李锦新 何清华 《广州医学院学报》 1996年第5期89-93,共5页
原位杂交组织化学(in situ hybridization histochemistry,ISHH)是将分子杂交与组织化学相结合的一项技术,此技术的基本原理是通过已知碱基顺序并带有标记物的核酸探针(probe),如双链或单链DNA探针、RNA探针、合成寡核苷酸探针,与组织... 原位杂交组织化学(in situ hybridization histochemistry,ISHH)是将分子杂交与组织化学相结合的一项技术,此技术的基本原理是通过已知碱基顺序并带有标记物的核酸探针(probe),如双链或单链DNA探针、RNA探针、合成寡核苷酸探针,与组织细胞中待测的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合,形成杂交体,然后再应用与标记物相应的检测系统(如放射自显影、组织化学或免疫组织化学)在核酸原有的位置上把它显示出来,进而探测组织细胞内标记探针及其转录产物(mRNA)的定位。自1969年。 展开更多
关键词 原位杂交 组织化学 标记物 双重标记 神经系统疾病 神经解剖学 癌基因 同位素 基因表达 放射性同位素
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电子显微镜水平非同位素原位杂交技术的现状与问题
11
作者 易静 《电子显微学报》 CAS CSCD 1996年第2期307-313,共7页
本文介绍原位杂交(非同位素方法)这一由分子生物学与组织学技术结合而成的新技术在电子显微镜水平的发展历史、目前的研究状况和存在的问题。本文结合作者应用电镜原位杂交技术探测肾脏内胶原mRNA分子的工作,报道了自己对包埋后电镜原... 本文介绍原位杂交(非同位素方法)这一由分子生物学与组织学技术结合而成的新技术在电子显微镜水平的发展历史、目前的研究状况和存在的问题。本文结合作者应用电镜原位杂交技术探测肾脏内胶原mRNA分子的工作,报道了自己对包埋后电镜原位杂交技术的改良所作的探索,并阐述了对这一技术的灵敏度、"嗓音"干扰和分辨率等所存在问题的见解。 展开更多
关键词 原位杂交 电子显微镜 同位素 包埋后
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SMT非同位素标记探针的制备
12
作者 魏平华 王建忠 +4 位作者 邱伦和 彭国良 陈清轩 曹颉 宋德秀 《畜牧兽医科技》 1992年第2期19-20,共2页
本试验以一种核苷酸类似物Digoxigenin-11-dUTP(地高辛与dUTP的联接结构,地高辛只天然存在于毛地黄中,是理想的半抗原),用随机引物法掺入绵羊MT启动子(SMT),检测目的基因时再加入抗体一酶连接物(Anti-digoxigeninalkalinephosphatase)... 本试验以一种核苷酸类似物Digoxigenin-11-dUTP(地高辛与dUTP的联接结构,地高辛只天然存在于毛地黄中,是理想的半抗原),用随机引物法掺入绵羊MT启动子(SMT),检测目的基因时再加入抗体一酶连接物(Anti-digoxigeninalkalinephosphatase)与地高辛发生免疫反应。 展开更多
关键词 SMT 同位素 标记 探针
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磷脂酰肌醇激酶的非同位素酶解测定法
13
作者 张泽林 刘霞 马兰 《华西医科大学学报》 CSCD 1991年第1期70-73,共4页
用磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C水解磷脂酰肌醇激酶催化产生的磷脂酰肌醇-4-磷酸,产物1,4-二磷酸肌醇再经碱性磷酸酶水解后,测定磷的含量,建立了磷脂酰肌醇激酶的非同位素酶解测定法。该法回收率可达91%,CV=6.5%。
关键词 肌醇激酶 PIK 同位素 酶解测定
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原位杂交非同位素法检测肝组织中丙型肝炎病毒RNA基因组
14
作者 孟昭鹏 《传染病信息》 1994年第2期48-49,共2页
本文作者介绍了利用原位杂交非同位素快速检测肝组织切片中的丙型肝炎病毒RNA。由10例丙型肝炎病毒抗体和丙型肝炎病毒RNA阳性的患者中。
关键词 丙型肝炎病毒抗体 原位杂交 同位素 快速检测 肝细胞 组织切片 基因组 肝组织 患者 阳性率
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非放射性标记ZF_3,ZF_4特异性探针对奶牛DNA杂交判断奶牛性别
15
作者 徐亚欧 龚荣慈 《西南民族学院学报(自然科学版)》 1994年第4期400-403,共4页
在测定了奶牛ZFX和ZFY基因的部分序列基础上,设计出两条分别特异于ZFX及ZFY的探针(ZF_4)及(ZF_3),同时也是两条引物。采用非同位素方法(DIGOligonucleotide3'endlabelingk... 在测定了奶牛ZFX和ZFY基因的部分序列基础上,设计出两条分别特异于ZFX及ZFY的探针(ZF_4)及(ZF_3),同时也是两条引物。采用非同位素方法(DIGOligonucleotide3'endlabelingkit)标记两条探针,并对ZFX,ZFY两个克隆子进行杂交,对以雄性奶牛和雌性奶牛的杂色体基因组DNA为模板以ZF_1和ZF_2 ̄[1]为引物的PCR产物进行杂支,结果表明ZF_3特异于ZFY,ZF_4特异于ZFX基因。并以该两条探针对不同浓度梯度的DNA模板的PCR产物进行点杂交,结果表明ZF_3和ZF_4对PCR的产物的杂交来判断奶牛性别其灵敏度可达到8pgDNA量的水平。 展开更多
关键词 性别鉴定 同位素 杂交 乳牛 探针DNA
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基于生物荧光纳米颗粒的新型荧光标记方法及其在细胞识别中的应用 被引量:52
16
作者 何晓晓 王柯敏 +3 位作者 谭蔚泓 肖丹 李军 羊小海 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2001年第16期1353-1356,T001,共5页
以荧光染料(联吡啶钌配合物)为核, 二氧化硅为外壳制备了大小均匀的荧光纳米颗粒. 结合纳米技术、生物技术与荧光标记技术, 建立了一种基于生物荧光纳米颗粒的新型荧光标记方法. 与传统的荧光标记方法比较, 该方法在稳定性、灵敏度、应... 以荧光染料(联吡啶钌配合物)为核, 二氧化硅为外壳制备了大小均匀的荧光纳米颗粒. 结合纳米技术、生物技术与荧光标记技术, 建立了一种基于生物荧光纳米颗粒的新型荧光标记方法. 与传统的荧光标记方法比较, 该方法在稳定性、灵敏度、应用范围等方面都有重要突破. 应用这一新型荧光标记方法成功地识别了人外周血中SmIgG+B淋巴细胞. 展开更多
关键词 生物荧光纳米颗粒 荧光标记 细胞识别 同位素检测 生物医学 荧光分析光
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非同位素PCR及Southern印迹杂交分析检测脆性X综合征FMR-1基因突变 被引量:8
17
作者 李红 肖丽娟 韩冰 《中国优生与遗传杂志》 2005年第4期16-18,共3页
目的 建立一种非同位素的检测脆性X综合征智力缺陷基因(FMR - 1)突变的方法。方法 采用PCR技术结合Southern印迹杂交技术对FMR - 1基因进行分析,进而确定其突变类型。结果 共对190例样本进行了检测,其中2例为女性前突变携带者,1例为... 目的 建立一种非同位素的检测脆性X综合征智力缺陷基因(FMR - 1)突变的方法。方法 采用PCR技术结合Southern印迹杂交技术对FMR - 1基因进行分析,进而确定其突变类型。结果 共对190例样本进行了检测,其中2例为女性前突变携带者,1例为女性全突变患者。结论 非同位素PCR方法可以简便、安全、可靠地检测FMR - 1基因中(CGG)n重复拷贝数,可作为临床上对脆性X综合征的筛查的首选方法;而非同位素Southern印迹杂交可对结果不确定者进一步进行检测。 展开更多
关键词 同位素PCR Southern印迹杂交分析 检测 脆性X综合征 FMR-1基因 突变
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非同位素标记法检测人染色体端粒长度 被引量:2
18
作者 许丽艳 李恩民 +2 位作者 沈忠英 蔡唯佳 沈健 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2001年第1期1-4,共4页
目的 :建立一种非同位素标记测定端粒长度的方法。方法 :以地高辛标记寡核苷酸 (CCCTAA) 3 为探针 ,对基因组DNA进行Southern杂交 ,NBT/BCIP显色后与DNA标准分子量比较 ,图象分析系统测定端粒长度。结果 :通过严格控制探针的工作浓度 (1... 目的 :建立一种非同位素标记测定端粒长度的方法。方法 :以地高辛标记寡核苷酸 (CCCTAA) 3 为探针 ,对基因组DNA进行Southern杂交 ,NBT/BCIP显色后与DNA标准分子量比较 ,图象分析系统测定端粒长度。结果 :通过严格控制探针的工作浓度 (1:12 80稀释 )、DNA上样量 (>2 0 μg)、杂交温度 (4 7± 2℃ )等主要影响因素 ,获得了比较好的杂交条带。结论 :建立了一种稳定、可靠、低背景的地高辛标记检测端粒长度的方法。 展开更多
关键词 端粒 端粒长度 同位素标记 癌变细胞
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用改良的非同位素凝胶电泳迁移实验鉴定核酸适配体与靶蛋白的结合 被引量:3
19
作者 葛兴枫 李慧 +6 位作者 李少华 丁红梅 黄皑雪 白琛俊 刘雪梅 李洁 邵宁生 《生物技术通讯》 CAS 2015年第2期249-251,共3页
目的:在核酸适配体与靶蛋白特异结合的凝胶电泳迁移实验(EMSA)测定方法中,探索使用非同位素标记取代同位素标记。方法:取一定量的生物素标记的核酸适配体与靶蛋白(或无关蛋白)于室温孵育,聚丙烯酰胺非变性凝胶电泳后将核酸适配体湿转至... 目的:在核酸适配体与靶蛋白特异结合的凝胶电泳迁移实验(EMSA)测定方法中,探索使用非同位素标记取代同位素标记。方法:取一定量的生物素标记的核酸适配体与靶蛋白(或无关蛋白)于室温孵育,聚丙烯酰胺非变性凝胶电泳后将核酸适配体湿转至带正电荷的尼龙膜上,紫外交联,经蛋白酶K消化后,用化学发光法检测。结果:与未使用蛋白酶K消化组相比,经蛋白酶K消化后,可明显呈现核酸适配体与靶蛋白特异结合后产生的阻滞条带,其灵敏度不次于同位素标记的检测方法。结论:经蛋白酶K消化步骤优化的生物素标记的EMSA方法,可以替代放射性同位素标记的EMSA方法,用于核酸适配体与靶蛋白结合情况的鉴定。 展开更多
关键词 凝胶电泳迁移实验 适配体 凝胶电泳 同位素标记
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非同位素标记脆弱类杆菌DNA探针的研究 被引量:2
20
作者 汪冰 黄安华 +4 位作者 冯萍 范昕建 朱淑媛 曾维华 曹钟梁 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期9-11,共3页
为探索应用分子生物学技术检测厌氧菌的方法,选择脆弱类杆菌抽提其染色体DNA,用生物素和地高辛配基标记制备DNA探针,检测厌氧和需氧菌94株,临床标本45份,并和32P标记探针及培养生化鉴定比较。该探针可检出临床上常见... 为探索应用分子生物学技术检测厌氧菌的方法,选择脆弱类杆菌抽提其染色体DNA,用生物素和地高辛配基标记制备DNA探针,检测厌氧和需氧菌94株,临床标本45份,并和32P标记探针及培养生化鉴定比较。该探针可检出临床上常见的类杆菌属细菌,与其它细菌无交叉反应。结果:地高辛配基标记探针的灵敏度(10pgDNA和103CFU/ml)接近32P标记探针的灵敏度(1pgDNA和103CFU/ml)。地高辛配基和生物素化的敏感性为89.5%和53.6%,特异性分别为92.3%和84.6%。结果表明脆弱类杆菌染色体DNA探针可检测临床上常见的类杆菌属厌氧菌,敏感性和特异性较高。 展开更多
关键词 同位素标记 脆弱类杆菌 DNA探针
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