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变性高效液相色谱检测霍乱弧菌 被引量：8
1
作者 曹际娟 闫平平 +5 位作者 于珂 于兵 麻丽丹 高世光 黄晓蓉 谢明杰 《辽宁师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2008年第3期347-352,共6页
变性高效液相色谱(DHPLC)是近几年刚发展起来的一种快速检测PCR扩增产物的新技术.应用该技术快速检测O1、O139、非O1、非O139群霍乱弧菌的外膜蛋白基因(ompW).根据霍乱弧菌外膜蛋白基因的特异性引物,PCR扩增的产物经DHPLC进行快速检测.... 变性高效液相色谱(DHPLC)是近几年刚发展起来的一种快速检测PCR扩增产物的新技术.应用该技术快速检测O1、O139、非O1、非O139群霍乱弧菌的外膜蛋白基因(ompW).根据霍乱弧菌外膜蛋白基因的特异性引物,PCR扩增的产物经DHPLC进行快速检测.以54株参考菌株做特异性检测.在丹东口岸国境外环境水体采集水样310份,以PCR-DHPLC和常规分离培养进行了比较,对丹东口岸国境外环境水体霍乱弧菌感染状况进行了检测,并对分离株进行了ompW基因测序.试验结果表明该方法有很好的特异性,310份水样中经PCR-DHPLC检测出58株霍乱弧菌的分菌株,阳性率为19%,与常规分离培养比较,符合率为100%.分离株的ompW序列与Genbank中的存在1%～3%的差异.这种检验方法特异性强,简便快捷,为霍乱防治提供了一种有效的检测新手段. 展开更多
关键词 DHPLC 霍乱弧菌o1群 霍乱弧菌o139群 霍乱弧菌非o1非o139群 外膜蛋白基因 (ompW) 丹东口岸国境外环境水体
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针对hly基因快速筛检食品中霍乱弧菌实时荧光PCR方法的研究 被引量：4
2
作者 焦红 翁文川 +3 位作者 杨泽 王方金 易敏英 王伟毅 《检验检疫科学》 2005年第z1期11-15,共5页
[目的]研制一种供基层疾病控制和口岸检疫单位日常疫情监测使用的对水产品、食品、外环境水中的O1群、O139群和非01群、非O139群霍乱弧菌都可进行筛检的实时荧光PCR快速检测方法及其通用试剂体系。以早期进行流行株的鉴定,分析外环境疫... [目的]研制一种供基层疾病控制和口岸检疫单位日常疫情监测使用的对水产品、食品、外环境水中的O1群、O139群和非01群、非O139群霍乱弧菌都可进行筛检的实时荧光PCR快速检测方法及其通用试剂体系。以早期进行流行株的鉴定,分析外环境疫情变化。[方法]针对霍乱弧菌溶血素基因(hly)设计引物和探针,取标准O1、O139、非O1非O139群霍乱菌种各10株,其他肠道菌种21株同时做荧光PCR测试其特异性;用标准菌株系列稀释敏感度测试、实际样品稀释染菌敏感度测试、实际样品不经增菌直接检测低限实验、实际样品经过夜培养增菌检测低限实验等测试其敏感性;通过日常实际样品对方法的应用和实验室间验证考察其符合性。[结果]实验与对照菌株51株只有霍乱弧菌产生S型扩增荧光曲线,其它同源和非同源菌株均未产生S型荧光扩增曲线,设计的引物探针具有强特异性;通用霍乱弧菌实时荧光PCR试剂体系直接检测染菌样本的检测低限为103cfu/mL;对染菌样本经过夜培养增菌检测低限分别在:霍乱弧菌O1群为2.1cfu/g、霍乱弧菌O139群为1.4cfu/g、霍乱弧菌非O1非O139群为3.4cfu/g;实际样本检测252例阳性检出情况与常规方法一致。实验室间验证结果同实验一致。[结论]研制的通用霍乱弧菌实时荧光PCR试剂体系具有快速、准确、实用、敏感性强的优点,值得在各检测部门推广应用。 展开更多
关键词 霍乱弧菌非o1非o139群 霍乱弧菌o1群 霍乱弧菌o139群 溶血素基因(hly) 实时荧光PCR
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霍乱弧菌O139胶体金免疫层析快速检测法的建立 被引量：5
3
作者 王玉金 杨书豪 +3 位作者 刘丽 庞向宇 孙晨阳 李珊珊 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1126-1129,共4页
目的建立一种快速、简易的检测霍乱弧菌O139群的胶体金免疫层析法(GICA)。方法利用胶体金免疫层析技术,采用双抗体夹心法检测霍乱弧菌O139群,对该法进行敏感性、特异性和稳定性分析。与细菌培养法对比检测184份临床标本。结果该法能在10... 目的建立一种快速、简易的检测霍乱弧菌O139群的胶体金免疫层析法(GICA)。方法利用胶体金免疫层析技术,采用双抗体夹心法检测霍乱弧菌O139群,对该法进行敏感性、特异性和稳定性分析。与细菌培养法对比检测184份临床标本。结果该法能在10min内完成检测;该试纸条仅与霍乱弧菌O139群阳性样品发生特异性反应;检测霍乱弧菌O139群的最低检出浓度为1×105cfu/mL;与细菌培养法对比检测184份临床标本,特异性和灵敏度均达100%。结论新建立的霍乱弧菌O139群胶体金免疫层析试验简便、快速,特异性和灵敏度较好,适用于现场样品的快速筛查。 展开更多
关键词 霍乱弧菌o139群 胶体金 免疫层析试验 快速筛查
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兔抗霍乱弧菌O139血清群rMSHA多克隆抗体的制备和鉴定
4
作者 甄伟春 尹铁球 楼永良 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期172-174,共3页
目的制备兔抗霍乱弧菌O139血清群rMSHA多克隆抗体。方法用经Ni-NTA亲和层析法纯化的重组蛋白(rMSHA)免疫日本大耳兔,收集免疫兔血清。Western Blot检测重组蛋白的免疫原性;ELISA测定该抗体的效价。结果兔抗rMSHA抗体能与重组蛋白发生特... 目的制备兔抗霍乱弧菌O139血清群rMSHA多克隆抗体。方法用经Ni-NTA亲和层析法纯化的重组蛋白(rMSHA)免疫日本大耳兔,收集免疫兔血清。Western Blot检测重组蛋白的免疫原性;ELISA测定该抗体的效价。结果兔抗rMSHA抗体能与重组蛋白发生特异性反应;间接ELISA法测定该抗体效价为1∶25 600。结论成功地制备了兔抗rM-SHA抗体,该抗体能够识别原核表达的重组蛋白rMSHA,为研制霍乱弧菌疫苗及相关诊断试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 霍乱弧菌o139血清群 rMSHAI多克隆抗体 间接ELISA法
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