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脆壁克鲁维酵母基因置换技术的建立
1
作者
李杰
曹宇婷
+4 位作者
徐欣
张旭
李璐
吕洋
卢松冲
《东北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第2期53-58,共6页
以中性乳糖酶生产菌脆壁克鲁维酵母为材料,构建以kan基因为筛选标记、以脆壁克鲁维酵母乳糖酶基因上游调控区为同源臂的质粒pPkan。将质粒pPkan电击转化脆壁克鲁维酵母,对受体菌生长时期、电场强度、电击后培养时间等条件进行优化。结...
以中性乳糖酶生产菌脆壁克鲁维酵母为材料,构建以kan基因为筛选标记、以脆壁克鲁维酵母乳糖酶基因上游调控区为同源臂的质粒pPkan。将质粒pPkan电击转化脆壁克鲁维酵母,对受体菌生长时期、电场强度、电击后培养时间等条件进行优化。结果表明,以OD600为0.8的脆壁克鲁维酵母为受体、电压1.5 kV、电场强度为7.5 kV.cm-1、电击后培养时间为90 min,可获得较高的转化率,最高转化效率为2.37×102转化子.μgDNA。在电击转化的同时加入限制性内切酶10μL,对电击转化的转化率无显著影响。经PCR筛选证实87.5%的转化子为同源重组,从而建立一套有效的脆壁克鲁维酵母基因置换技术。
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关键词
脆壁克鲁维酵母
电击转化
限制
内切
酶
介导
同源重组
基因置换
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职称材料
题名
脆壁克鲁维酵母基因置换技术的建立
1
作者
李杰
曹宇婷
徐欣
张旭
李璐
吕洋
卢松冲
机构
东北农业大学生命科学学院
出处
《东北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第2期53-58,共6页
基金
黑龙江省科技攻关项目(KT05A400-1)
文摘
以中性乳糖酶生产菌脆壁克鲁维酵母为材料,构建以kan基因为筛选标记、以脆壁克鲁维酵母乳糖酶基因上游调控区为同源臂的质粒pPkan。将质粒pPkan电击转化脆壁克鲁维酵母,对受体菌生长时期、电场强度、电击后培养时间等条件进行优化。结果表明,以OD600为0.8的脆壁克鲁维酵母为受体、电压1.5 kV、电场强度为7.5 kV.cm-1、电击后培养时间为90 min,可获得较高的转化率,最高转化效率为2.37×102转化子.μgDNA。在电击转化的同时加入限制性内切酶10μL,对电击转化的转化率无显著影响。经PCR筛选证实87.5%的转化子为同源重组,从而建立一套有效的脆壁克鲁维酵母基因置换技术。
关键词
脆壁克鲁维酵母
电击转化
限制
内切
酶
介导
同源重组
基因置换
Keywords
Kluyveromyces fragilis
electroporation
REMI
homologous recombination
gene replacement
分类号
Q-31 [生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
脆壁克鲁维酵母基因置换技术的建立
李杰
曹宇婷
徐欣
张旭
李璐
吕洋
卢松冲
《东北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
0
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