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新疆驴细管冻精的制作 被引量：1
1
作者 李梦雨 董红 +5 位作者 范洪先 郑新宝 张永生 李超程 孙玉江 贾斌 《现代畜牧兽医》 2022年第3期26-29,共4页
试验旨在研究新疆驴细管冻精制作过程中精液冷冻液、降温平衡时间及液氮熏蒸时间对精子冻后活力的影响。研究共设计3个试验。试验1对比了INRA-Freeze、Optidyl、房氏驴精液冷冻保存液、自配马精液冷冻冷冻液等4种精液冷冻液在精子冷冻... 试验旨在研究新疆驴细管冻精制作过程中精液冷冻液、降温平衡时间及液氮熏蒸时间对精子冻后活力的影响。研究共设计3个试验。试验1对比了INRA-Freeze、Optidyl、房氏驴精液冷冻保存液、自配马精液冷冻冷冻液等4种精液冷冻液在精子冷冻过程对精子冻后活力的影响,筛选出适合制作新疆驴细管冻精的冷冻液;试验2探索在细管冻精制作过程中平衡90、120、150 min对精子冻后活力的影响;试验3比较在细管冻精制作过程中使用液氮熏蒸5、6、7、8、9、10 min时对精子冻后活力的影响,探索液氮熏蒸的最佳时间。结果显示,使用INRA-Freeze冷冻液或房氏冷冻液在冷冻过程中对精子的损伤最小;冷冻过程中,降温平衡90、120、150 min对精子冻后活力的影响差异不显著(P>0.05);在冷冻过程中液氮熏蒸7 min时精子冻后活力最高,显著高于熏蒸5、9、10 min的精子冻后活力(P<0.05),与熏蒸6、8 min时精子冻后活力差异不显著(P>0.05)。研究表明,为降低成本可使用INRA-Freeze冷冻液稀释精液,于冰箱中平衡90~150 min后装入0.5 mL的细管中、液氮熏蒸7 min制作的冻精细管的精子活力最佳。 展开更多
关键词 新疆驴 细管冻精 精液冷冻液 精子冻后活力 降温冷冻
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实验大鼠、小鼠胚胎的缓慢冷冻和玻璃化冷冻的比较 被引量：15
2
作者 徐平 川野佳代 +1 位作者 刘丽均 朱冬琴 《上海交通大学学报（农业科学版）》 2002年第4期261-265,共5页
对 3日龄小鼠胚胎和 5日龄大鼠胚胎进行了玻璃化低温保存和缓慢冷冻保存的比较研究 ,从经过超数排卵的小鼠和大鼠中收集到了 1 897个 8～ 1 6细胞的胚胎 ,经筛选后将 I级和 II级胚计 1 73 8个 (91 .62 % )分别进行两种低温保存试验 ,并... 对 3日龄小鼠胚胎和 5日龄大鼠胚胎进行了玻璃化低温保存和缓慢冷冻保存的比较研究 ,从经过超数排卵的小鼠和大鼠中收集到了 1 897个 8～ 1 6细胞的胚胎 ,经筛选后将 I级和 II级胚计 1 73 8个 (91 .62 % )分别进行两种低温保存试验 ,并对其中的 881个冷冻胚胎分阶段进行复苏 ,复苏率分别为 65 .0 3 % (小鼠 69.5 9% ,大鼠 60 .46% )和 68.45 % (小鼠72 .61 % ,大鼠 64.2 9% ) ,两者间无显著性差异 (P>0 .0 5 )。在复苏的胚胎中 ,选择其中的 488个胚胎进行移植试验 ,结果 ,玻璃化冷冻保存胚胎的移植的受孕率为 3 9.47% (89/ 2 2 2 ) ,缓慢冷冻保存胚胎的移植的受孕率为 42 .5 6% (1 1 5 / 2 66) ,两种低温保存方法经方差检验也无显著性差异 (P>0 .0 5 ) 展开更多
关键词 实验大鼠 小鼠 缓慢冷冻 玻璃化冷冻 程控降温冷冻 胚胎移植
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程序降温冷冻保存对血管内皮细胞生长因子表达的影响
3
作者 李雷 顾松 陈蕾蕾 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期280-281,共2页
目的　探讨冷冻复苏对人脐静脉内皮细胞的血管内皮细胞生长因子 (VEGF)表达的影响以及在生物血管制品保存中的作用。方法　将人脐静脉内皮细胞株 (ECV30 4 )程序降温冷冻保存后再复苏 ,在不同的复苏时间内应用RT PCR和ELISA检测内皮细胞... 目的　探讨冷冻复苏对人脐静脉内皮细胞的血管内皮细胞生长因子 (VEGF)表达的影响以及在生物血管制品保存中的作用。方法　将人脐静脉内皮细胞株 (ECV30 4 )程序降温冷冻保存后再复苏 ,在不同的复苏时间内应用RT PCR和ELISA检测内皮细胞VEGFmRNA及其相应蛋白的表达。结果　复苏 3d内VEGF的表达显著下降 ,第 4d以后恢复至正常表达水平。结论　冷冻复苏血管内皮细胞孵育 4d后VEGF表达基本恢复正常。程序降温冷冻保存可能在制备具有生物活性的血管代用品上具有重要的作用。 展开更多
关键词 程序降温冷冻保存 血管内皮细胞生长因子 表达 逆转录聚合酶链式反应
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人胚胎干细胞的保存方法 被引量：1
4
作者 王晶 李亚里 +2 位作者 闫志风 彭红梅 杨怡卓 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期2291-2295,共5页
目的:胚胎干细胞经传代长期培养后会导致核型出现异常、未分化细胞的克隆数减少,因此经低温保存后复苏的胚胎干细胞必须要保持其未分化状态及生物学特性。实验拟比较程序降温法、改良慢速冻存法及传统慢速冻存法对人胚胎干细胞冷冻保存... 目的:胚胎干细胞经传代长期培养后会导致核型出现异常、未分化细胞的克隆数减少,因此经低温保存后复苏的胚胎干细胞必须要保持其未分化状态及生物学特性。实验拟比较程序降温法、改良慢速冻存法及传统慢速冻存法对人胚胎干细胞冷冻保存的效率,以及解冻后细胞生长与分化的状态。方法:实验于2006-07/2007-04在解放军军事医学科学院野战输血研究所完成。①材料:清洁级孕13.5d的ICR小鼠由军事医学科学院动物中心提供,用于制备鼠成纤维细胞饲养层,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。人胚胎干细胞系PKU由北京大学第三医院生殖中心建立并提供;kryo-550-16程序降温仪为英国planner公司产品,由液氮压力泵、液氮罐、层流冷冻箱、温度传感器组成。②实验方法:将人胚胎干细胞系PKU接种在胚胎鼠成纤维细胞饲养层上,胶原酶Ⅳ消化传代,分3组冷冻保存人胚胎干细胞。程序降温法:用吸管将消化后人胚胎干细胞吹成若干团块,取65个团块移入配制的冻存液中,装入麦管进行三段式降温,即22℃^-7℃,每分钟降温2.5℃→-7℃置核后停留5min→-7℃^-30℃,每分钟降温0.3℃→-30℃^-150℃,每分钟降温10℃。降至-150℃时置液氮中保存。改良慢速冻存法:A管含人胚胎干细胞培养基和血清替代品,B管含人胚胎干细胞培养基和二甲亚砜,将60个团块置入A管,再将B管液体移入A管,混匀后-70℃过夜,第2天移入液氮中保存。传统慢速冻存法:将60个团块直接放入添加二甲亚砜的人胚胎干细胞培养基中混匀,分装入冻存管,-4℃放置1h,-70℃过夜,第2天移入液氮长期保存。③实验评估:解冻后,将保持完整形态且细胞未散离的人胚胎干细胞团块回收,比较3组细胞复苏率、复制生长状态、克隆分化程度。鉴定程序降温组人胚胎干细胞的生物学特性。结果:①复苏率:程序降温组、改良慢速� 展开更多
关键词 人胚胎干细胞 程序降温法冷冻 慢速冷冻 细胞保存 细胞工程
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人胚胎干细胞体外培养、传代及冻存、复苏研究
5
作者 王晶 李亚里 +2 位作者 闫志风 彭红梅 杨怡卓 《中国优生与遗传杂志》 2008年第2期17-19,61,共4页
目的建立人胚胎干细胞体外培养模式,并对其进行冻存及复苏。方法将人胚胎干细胞置于小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上培养,细胞接近融合状态时进行传代,程序降温法冻存,速溶方法复苏,确定解冻后细胞复苏率、克隆生长与分化情况,并对其生物学... 目的建立人胚胎干细胞体外培养模式,并对其进行冻存及复苏。方法将人胚胎干细胞置于小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上培养,细胞接近融合状态时进行传代,程序降温法冻存,速溶方法复苏,确定解冻后细胞复苏率、克隆生长与分化情况,并对其生物学特性进行鉴定。结果人胚胎干细胞稳定增殖了5个月,传至20代;细胞在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上呈集落生长,核大,核仁明显。程序降温法冻存后复苏,细胞复苏率达到78.3%;解冻后第12代细胞仍具有稳定的46,XX核型;TRA-1-81阳性,表达Nanog基因,流式细胞术检测SSEA-4阳性表达率为89.38%。结论成功建立了人胚胎干细胞体外培养模式,为研究人胚胎干细胞及相关疾病的防治提供细胞模型和细胞来源。 展开更多
关键词 人胚胎干细胞 体外培养 程序降温法冷冻 复苏
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空巢脾的两种物理处理方法
6
作者 张建国 《中国养蜂》 2003年第1期16-16,共1页
关键词 空巢脾 物理处理 日光晒射 降温冷冻法
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