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CORRECT介导的人HBB-28基因定点突变细胞株的建立及其应用
1
作者 刘永祥 麦庆云 +5 位作者 黎允诗 梅珺琰 梁爱军 彭新良 周瑞鸿 周少虎 《广西科学》 CAS 北大核心 2022年第6期1125-1133,共9页
为利用CRISPR/Cas9系统建立一种新型、高效的定点突变和基因修复的新方法——引入阻断突变碱基的CORRECT(Consecutive re-Guide or re-Cas steps to Erase CRISPR/Cas blocked Targets)方法,本研究使用规律间隔成簇短回文重复序列(Clust... 为利用CRISPR/Cas9系统建立一种新型、高效的定点突变和基因修复的新方法——引入阻断突变碱基的CORRECT(Consecutive re-Guide or re-Cas steps to Erase CRISPR/Cas blocked Targets)方法,本研究使用规律间隔成簇短回文重复序列(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats, CRISPR)在线设计工具,针对人β-珠蛋白(HBB)基因设计小向导RNA (small guide RNA,sgRNA),构建PX459-sgRNA-Cas9共表达质粒,然后以含阻断突变碱基(G>T)的单链寡核苷酸(single-stranded Oligo DNA Nucleotides, ssODNs)为同源模板,通过脂质体转染HEK293T细胞,并通过Sanger测序和酶切(T7EⅠ和AatⅡ)检测编辑效率,最后通过Sanger测序分析敲除HBB单克隆细胞的基因型。结果表明,成功构建β-地中海贫血(简称β-地贫)HBB-28(A>G)基因纯合定点突变的HEK293T细胞株。阻断突变碱基优化的ssODNs减少Cas9蛋白对靶点的再次编辑,提高了整合效率。本研究建立的新型点突变技术可以高效获得纯合定点突变的HEK293T细胞株,既为单碱基突变疾病模型的建立提供实验依据,又为基因修复治疗提供高效的方法。 展开更多
关键词 Β-地中海贫血 HBB 阻断突变 定点突变 基因修复治疗
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突变生物合成在微生物药物领域的研究进展 被引量：3
2
作者 白宝星 张春燕 +1 位作者 田敏 朱辉 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期65-72,94,共9页
突变生物合成作为产生抗生素衍生物的重要手段,自20世纪70年代兴起以来,发挥了巨大作用,已开发出许多至今在临床上仍广泛使用的抗生素品种。随着基因技术的发展,突变生物合成技术可直接对次级代谢途径中一特定酶基因进行改造获得突变株... 突变生物合成作为产生抗生素衍生物的重要手段,自20世纪70年代兴起以来,发挥了巨大作用,已开发出许多至今在临床上仍广泛使用的抗生素品种。随着基因技术的发展,突变生物合成技术可直接对次级代谢途径中一特定酶基因进行改造获得突变株,大大提高了工作效率和准确性。本文综述了突变生物合成技术在微生物药物领域的应用,特别是结合基因技术进行突变生物合成研究的新进展。 展开更多
关键词 突变生物合成 突变合成元 阻断突变株 抗生素
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柔红霉素产生菌阻断突变株的筛选和鉴别 被引量：4
3
作者 朱春宝 何雯 +2 位作者 郝伟月 朱宝泉 许文思 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 1991年第3期165-168,共4页
经NTG和紫外光诱变,从天蓝淡红链霉菌正定变种SIPI 1482中获得了阻断突变株N-18和U-25,通过TLC和HPLC分析,证明这两突变株的主要产物均为ε—紫红霉酮,这表明它们都在生物合成途径的中间步骤被阻断。
关键词 柔红霉素 阻断突变株 筛选 鉴别
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嘧肽霉素生物合成阻断突变株原生质体制备和再生条件的研究 被引量：2
4
作者 魏颖颖 吴元华 +2 位作者 张晓雯 赵秀香 高芬 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期174-177,共4页
针对嘧肽霉素的生物合成阻断突变株,研究了其最佳的菌体培养、原生质体制备和再生条件。采用改良的含15%蔗糖、0.5%甘氨酸的YEME液体培养基振荡培养36h,获得细腻丰富的菌丝体;对不同的酶浓度、酶解温度和酶解时间进行3因子4水平的正交试... 针对嘧肽霉素的生物合成阻断突变株,研究了其最佳的菌体培养、原生质体制备和再生条件。采用改良的含15%蔗糖、0.5%甘氨酸的YEME液体培养基振荡培养36h,获得细腻丰富的菌丝体;对不同的酶浓度、酶解温度和酶解时间进行3因子4水平的正交试验,筛选最佳酶解条件为:溶菌酶浓度2mg·mL-1,28℃,作用90min,可获得最高的制备率为99%;再生培养基以R2YE为最佳,采取直接涂布方式,25.5℃培养可达48%的再生率。 展开更多
关键词 嘧肽霉素:不吸水链霉菌 生物合成阻断突变株 原生质体 制备和再生条件
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吉它霉素产生菌阻断突变株的筛选 被引量：1
5
作者 徐作英 余柏松 《四川师范学院学报（自然科学版）》 1996年第3期28-31,共4页
吉它霉素产生菌ＳＫ４－２经亚硝基胍诱变处理，经过分离培养和多次筛选，获得了吉它霉素生物合成阻断的突变株，用生物发酵测定，化学薄层分析及生理特性分析测定，确定了突变株的吉它霉素的生物合成途径被阻遏，从而失去了产生抗生素... 吉它霉素产生菌ＳＫ４－２经亚硝基胍诱变处理，经过分离培养和多次筛选，获得了吉它霉素生物合成阻断的突变株，用生物发酵测定，化学薄层分析及生理特性分析测定，确定了突变株的吉它霉素的生物合成途径被阻遏，从而失去了产生抗生素的能力． 展开更多
关键词 诱变 阻断突变株 吉它霉素 抗生素 链霉菌
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武夷菌素产生菌阻断突变株的筛选及分析 被引量：1
6
作者 檀贝贝 孙蕾 +3 位作者 杨振娟 武哲 张俊 张克诚 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2012年第1期95-100,共6页
以不吸水链霉菌武夷变种Streptomyces ahygroscopicus var.wuyiensis为出发菌株,分别用亚硝基胍、氯化锂、微波为单一诱变剂,亚硝基胍和氯化锂为复合诱变剂进行处理,从亚硝基胍处理的菌株中筛选到1株丧失抑菌活性且性状稳定的突变株N1... 以不吸水链霉菌武夷变种Streptomyces ahygroscopicus var.wuyiensis为出发菌株,分别用亚硝基胍、氯化锂、微波为单一诱变剂,亚硝基胍和氯化锂为复合诱变剂进行处理,从亚硝基胍处理的菌株中筛选到1株丧失抑菌活性且性状稳定的突变株N1。突变株孢子丝为长螺旋形,孢子呈椭圆形,与出发菌株相比,在形态上没有显著变化且产孢量无变化。突变株的抑菌活性发生了显著变化,对所有8种供试菌株均无抑制作用。HPLC结果显示与出发菌株不同,突变株中抗生素的特征峰消失。本研究为今后开展武夷菌素合成途径和生物合成基因研究奠定基础。 展开更多
关键词 不吸水链霉菌武夷变种 诱变 阻断突变株
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产生西索米星的棘孢小单孢阻断型突变株JIM-121的筛选和研究 被引量：11
7
作者 赵敏 范瑾 +2 位作者 刘军 胡小玲 谢凤龙 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 1992年第1期16-20,共5页
利用紫外光、氯化锂和甲胺复合因子处理棘孢小单孢JIM-202变株,得到一株JIM-121;其发酵液用离子交换树脂提取、然后用CM-Sephadex C-25分离表明主要含有二个抗生素即121-A和121-B。经薄层层析、红外光谱和核磁共振谱、质谱测定证实抗生... 利用紫外光、氯化锂和甲胺复合因子处理棘孢小单孢JIM-202变株,得到一株JIM-121;其发酵液用离子交换树脂提取、然后用CM-Sephadex C-25分离表明主要含有二个抗生素即121-A和121-B。经薄层层析、红外光谱和核磁共振谱、质谱测定证实抗生素121-A与西索米星同质。根据庆大霉素-西索米星生物合成途径可推断该突变株系在西索米星到庆大霉素C_(1a)这一步转化绛红糖胺部份4′、5′还原反应较弱所致。 展开更多
关键词 西索米星 阻断型突变株 小单孢南属
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