SYBR-GreenⅠ实时荧光PCR检测传染性鲑鱼贫血病 被引量：10

1

作者 徐淑菲 孔繁德 +3 位作者 高隆英 刘荭 陈信忠 龚艳青 《检验检疫科学》 2007年第5期27-31,共5页

[目的]利用SYBR-GreenI实时荧光PCR检测传染性鲑鱼贫血病。[方法]根据传染性鲑鱼贫血病毒(ISAV)Y10404的序列合成部分基因片段,将其插入到T载体中,构建阳性质控品;并设计合成一对特异性引物。利用阳性质控品建立SYBR-GreenⅠ实时荧光PC... [目的]利用SYBR-GreenI实时荧光PCR检测传染性鲑鱼贫血病。[方法]根据传染性鲑鱼贫血病毒(ISAV)Y10404的序列合成部分基因片段,将其插入到T载体中,构建阳性质控品;并设计合成一对特异性引物。利用阳性质控品建立SYBR-GreenⅠ实时荧光PCR方法,对反应体系进行优化,进行特异性和敏感性分析,并制作标准曲线。[结果]最佳引物终浓度为0.5μmol/L。所建立的SYBR-GreenⅠ实时荧光PCR方法能够特异地检出ISAV;最低检出浓度为9.5×10-8μg/μL,其灵敏度比传统PCR高1000倍;能够从阳性样品中检出ISAV,Tm值为82.5℃。建立了标准曲线,其r2>0.99。 展开更多

关键词 传染性鲑鱼贫血病毒 阳性质控品 SYBR—Green Ⅰ实时荧光PCR 检测

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洁净环境生物污染检测实验室间比对研究

2

作者 田霖 赵燕君 +3 位作者 仪忠勋 吴慧 谢兰桂 杨会英 《中国医药生物技术》 2023年第4期328-332,共5页

目的设计并组织实施洁净环境生物污染检测实验室间比对项目,评价实验室的生物污染检测能力,识别实验室间存在的差异。方法制备洁净环境检测用阳性质控品,并进行均匀性和稳定性考察,对实验室间比对结果进行统计分析并评价。结果样品均匀... 目的设计并组织实施洁净环境生物污染检测实验室间比对项目,评价实验室的生物污染检测能力,识别实验室间存在的差异。方法制备洁净环境检测用阳性质控品,并进行均匀性和稳定性考察,对实验室间比对结果进行统计分析并评价。结果样品均匀性和稳定性符合要求。7家实验室参加洁净环境生物污染检测项目,满意数为7家,满意率100%。结论各实验室检测能力维持良好,洁净环境检测用阳性质控品可用于生物污染检测能力的实验室间比对,为今后开展洁净环境生物污染检测能力验证项目提供参考。 展开更多

关键词 洁净环境 生物污染 阳性质控品 实验室间比对 沉降菌 浮游菌

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携带圣路易斯脑炎病毒特异基因片段的重组假病毒颗粒的构建与鉴定 被引量：4

3

作者 张娜娜 邓永强 +3 位作者 年庆功 康晓平 杨银辉 秦成峰 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期194-198,共5页

目的制备含有圣路易斯脑炎病毒(SLEV)pr M基因片段的假病毒颗粒,旨在提供安全、可靠、稳定的核酸阳性质控品。方法根据armored RNA技术原理,构建携带含有SLEV prM基因片段的重组质粒pSE380-MS2-SLEV,转化大肠杆菌后利用IPTG进行诱导表达... 目的制备含有圣路易斯脑炎病毒(SLEV)pr M基因片段的假病毒颗粒,旨在提供安全、可靠、稳定的核酸阳性质控品。方法根据armored RNA技术原理,构建携带含有SLEV prM基因片段的重组质粒pSE380-MS2-SLEV,转化大肠杆菌后利用IPTG进行诱导表达,三氯甲烷法纯化后利用透射电镜观察重组假病毒颗粒形态。通过DNaseⅠ和RNase A双酶消化实验评价重组假病毒颗粒的核酸酶耐受性,并结合温度敏感性实验分析假病毒颗粒中核酸片段的稳定性。利用荧光定量RT-PCR法对该假病毒颗粒进行验证。结果 PCR扩增和测序分析显示,pr M基因片段正确克隆至载体p SE380-MS2。经大肠杆菌表达可形成直径约为25 nm的均一、球形重组假病毒颗粒。核酸酶消化和温度敏感性实验表明假病毒样颗粒包装的病毒核酸能耐受核酶的降解,37℃条件下存放20 d仍保持稳定。荧光定量RT-PCR检测该假病毒颗粒检测限可达1.8×103拷贝/ml,且与同属的其他病毒无交叉反应。结论成功构建了含有SLEV prM基因片段的假病毒颗粒,具有良好的核酸酶耐受性和稳定性,可作为核酸阳性质控品对核酸提取与检测过程进行全程监控。 展开更多

关键词 圣路易斯脑炎病毒 假病毒 阳性质控品

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一种模拟游离DNA阳性质控品的制备方法及表征

4

作者 方艳 王霞 +1 位作者 董莲华 杨靖亚 《计量学报》 CSCD 北大核心 2023年第3期361-367,共7页

通过优化一种新型的机理未明确的类酶解作用体系(reaction system, RS),直接作用带有KRAS G12C,KRAS G12D,EGFR L858R和EGFR T790M突变的肿瘤细胞系SW1573,SNU-C2B和NCI-H1975,通过对RS体系作用时间及作用的细胞数量的优化,可以裂解细... 通过优化一种新型的机理未明确的类酶解作用体系(reaction system, RS),直接作用带有KRAS G12C,KRAS G12D,EGFR L858R和EGFR T790M突变的肿瘤细胞系SW1573,SNU-C2B和NCI-H1975,通过对RS体系作用时间及作用的细胞数量的优化,可以裂解细胞基因组DNA制备得到一种可以高度模拟人体血浆游离DNA(cfDNA)阳性质控品。经芯片电泳检测获得的模拟cfDNA片段长度集中于(166±16) BP,与正常人体血浆cfDNA大小一致;通过微滴数字PCR检测显示RS制备的DNA片段和gDNA在目标突变位点处具有一致的突变丰度。表明经RS体系制备得到的DNA片段可以作为一种cfDNA的阳性质控品。 展开更多

关键词 计量学 游离DNA 阳性质控品 模拟cfDNA 突变丰度 数字PCR

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新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测阳性质控品的制备及效果评价 被引量：3

5

作者 周思彤 王永胜 +3 位作者 田卫花 魏曼 李莎莎 窦娇莹 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期709-711,720,共4页

目的制备新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测室内阳性质控品,探讨自制质控品的可行性,并进行效果评价。方法收集第三方检测试剂盒中的阳性对照品,用置有正常人鼻咽试子的病毒保存液制成稀释液,倍比稀释,实时荧光定量PCR法检测ORFlab基因的Ct... 目的制备新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测室内阳性质控品,探讨自制质控品的可行性,并进行效果评价。方法收集第三方检测试剂盒中的阳性对照品,用置有正常人鼻咽试子的病毒保存液制成稀释液,倍比稀释,实时荧光定量PCR法检测ORFlab基因的Ct值,取ORFlab基因Ct值约为31、34的稀释浓度分别作为高值质控品(nCov-H)和低值质控品(nCov-L),大量制备。小量分装后于-80℃冻存,评价质控品的均一性和稳定性。结果自制新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测室内阳性质控品均一性良好,不同保存温度下稳定性良好,可在-80℃保持稳定至少6个月,反复冻融3次后仍在控。结论自制新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测室内阳性质控品制备过程简单,均一性及稳定性良好,可作为商品质控的替代品用于临床检测。 展开更多

关键词 新型冠状病毒 阳性质控品 核酸 荧光定量PCR

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鹿胎阳性质控品DNA检测试剂盒的开发与应用 被引量：1

6

作者 崔琳 艾金霞 +8 位作者 段思琪 刘琳 李亚茹 邵博宇 杨畅 高丽君 孙丽媛 李明成 苑广信 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期232-237,共6页

目的研发鹿胎DNA阳性质控品,组装检测试剂盒。方法提取鹿胎及其伪品DNA,设计通用鹿引物并进行PCR扩增,克隆种属特异性目的片段,构建鹿胎DNA阳性质控品并组装DNA检测试剂盒,进行试剂盒性能实验并应用于市售鹿胎样品检测。结果应用美国国... 目的研发鹿胎DNA阳性质控品,组装检测试剂盒。方法提取鹿胎及其伪品DNA,设计通用鹿引物并进行PCR扩增,克隆种属特异性目的片段,构建鹿胎DNA阳性质控品并组装DNA检测试剂盒,进行试剂盒性能实验并应用于市售鹿胎样品检测。结果应用美国国家生物技术信息中心(NCBI)分析测序比对结果,正确率为100%,在526 bp处可见明显条带,与目的片段相符,可作为鹿胎阳性质控品。阳性质控品灵敏性最低检测限为10 ng·μL-1,经多次反复冻融的试剂盒,仍可确保PCR检测结果的稳定性。试剂盒应用于对市售鹿胎及伪品的检测,PCR检测结果与预期相符。结论构建鹿胎阳性质控品作为电泳分析时的阳性对照,结果更加准确稳定,适用于对鹿胎及伪品的快速鉴定,保障对鹿胎质量的有效监管。 展开更多

关键词 鹿胎 阳性质控品 DNA检测试剂盒 分子生物学 鉴别真伪

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艾滋病抗体初筛室内质控分析 被引量：12

7

作者 张凤兰 《国际检验医学杂志》 CAS 2012年第3期364-365,共2页

目的提高HIV抗体检测工作质量,保证HIV抗体初筛实验室检测结果的准确性。方法用ELISA法检测HIV抗体,对弱阳性质控血清的S/CO值绘制质量控制图。结果通过HIV抗体检测室内质量控制工作,可以发现检测过程中出现的如水浴箱温度失控,加样不... 目的提高HIV抗体检测工作质量,保证HIV抗体初筛实验室检测结果的准确性。方法用ELISA法检测HIV抗体,对弱阳性质控血清的S/CO值绘制质量控制图。结果通过HIV抗体检测室内质量控制工作,可以发现检测过程中出现的如水浴箱温度失控,加样不准等一些问题,及时分析和解决。结论弱阳性外部对照质控品S/CO值可监控HIV抗体初筛实验的重复性和稳定性,对监测实验室结果的准确性和可信度方面起了重要作用。ELISA检测手工操作步骤比较多,操作细节都对实验结果有很大影响,因此需要规范实验操作,并严格按照要求进行。 展开更多

关键词 HIV抗体 弱阳性质控品 室内质量控制

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不同核酸提取程序及扩增仪组合检测呼吸道病毒的差异

8

作者 钟福春 陈甜 +6 位作者 张抒彧 唐尧 罗荟辰 季文轩 薛飞 张爱芳 薛恒 《中国卫生标准管理》 2023年第15期128-132,共5页

目的比较不同核酸提取程序及扩增系统组合在呼吸道病毒检测中的差异。方法把呼吸道假病毒弱阳性室内质控品稀释成一系列浓度。将不同的核酸提取程序和不同的扩增系统进行混搭组合构建4种检测系统(A、B、C和D),A为常规核酸提取程序+普通... 目的比较不同核酸提取程序及扩增系统组合在呼吸道病毒检测中的差异。方法把呼吸道假病毒弱阳性室内质控品稀释成一系列浓度。将不同的核酸提取程序和不同的扩增系统进行混搭组合构建4种检测系统(A、B、C和D),A为常规核酸提取程序+普通实时荧光定量PCR仪,B为快速核酸提取程序+普通实时荧光定量PCR仪,C为常规核酸提取程序+快速实时荧光定量PCR仪,D为快速核酸提取程序+快速实时荧光定量PCR仪。各检测系统分别提取并扩增上述不同浓度的假病毒弱阳性室内质控品,比较靶基因检出率、循环阈值(Ct值)和批内重复性。结果在假病毒弱阳性室内质控品原浓度和1∶2稀释度时,4种检测系统均100%检出靶基因;其他稀释度时,靶基因检出率由高到低为A>B>C>D;靶基因Ct值由低到高为A<B<C<D;检测耗时由短到长为D<C<B<A,4种检测系统的批内重复性均在5%范围内。结论不同的检测系统其检测性能存在差异,实验室应根据自身条件和检测需求选择最适合的核酸检测系统。 展开更多

关键词 核酸提取 扩增系统 程序 检测 呼吸道病毒 弱阳性质控品

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自配新型冠状病毒核酸弱阳性质控品的评价 被引量：3

9

作者 张省委 寿好长 +2 位作者 韩冉 许朝霞 丁程伟 《标记免疫分析与临床》 CAS 2021年第7期1243-1248,共6页

目的评价不同基质配制新型冠状病毒假病毒颗粒制备弱阳性质控品的可行性。方法用无RNA酶水、样本保存液和生理盐水对一定浓度的假病毒颗粒配制至检测限的2.5倍,评价其均一性、反复冻融、4℃存放、常温存放、-30℃冻存的稳定性。结果生... 目的评价不同基质配制新型冠状病毒假病毒颗粒制备弱阳性质控品的可行性。方法用无RNA酶水、样本保存液和生理盐水对一定浓度的假病毒颗粒配制至检测限的2.5倍,评价其均一性、反复冻融、4℃存放、常温存放、-30℃冻存的稳定性。结果生理盐水为基质的弱阳性质控品均一性差,不适合作为质控品基质。其余两种基质的均一性良好,ORF1ab基因的两组间比较Ct值差异均有统计学意义;反复冻融10次、4℃存放7 d、-30℃冻存8周的稳定性良好;无RNA酶水作为基质时常温存放24h稳定性良好,样本保存液作为基质时,12 h后N基因稳定性降低,16 h ORF1ab基因稳定性降低。结论以无RNA酶水作为基质制成的弱阳性质控品稳定性优于样本保存液,可以在实验室中应用。 展开更多

关键词 新型冠状病毒 弱阳性质控品 稳定性

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不同核酸提取及扩增系统组合检测新型冠状病毒核酸的效能比较 被引量：1

10

作者 李卓敏 张昕雨 +5 位作者 于洋 张磊 王新宇 杜金龙 王志阳 谭延国 《国际检验医学杂志》 CAS 2022年第23期2828-2831,2836,共5页

目的探讨不同核酸提取及扩增系统组合检测新型冠状病毒核酸的效能。方法收集同一时间段内使用不同核酸提取系统(提取系统a、b、c)和扩增系统(扩增系统1、2、3)组合检测结果为阴性的人源性标本的内标基因(IC基因)的Ct值,以及在不同检测... 目的探讨不同核酸提取及扩增系统组合检测新型冠状病毒核酸的效能。方法收集同一时间段内使用不同核酸提取系统(提取系统a、b、c)和扩增系统(扩增系统1、2、3)组合检测结果为阴性的人源性标本的内标基因(IC基因)的Ct值,以及在不同检测批次中所使用的同一批号弱阳性质控品O、N及IC基因的Ct值。比较不同核酸提取、扩增系统组合的检测效能。结果不同提取系统提取的人源性标本IC基因经同一扩增系统扩增,同一提取系统提取的人源性标本IC基因经不同扩增系统扩增,其Ct值差异均有统计学意义(P<0.05)。除部分检测系统组合(提取系统a与扩增系统2/3组合、提取系统a/b与扩增系统3组合检测弱阳性质控品N基因;提取系统a与扩增系统2/3组合、提取系统a/c与扩增系统2组合、提取系统b与扩增系统1/3组合检测弱阳性质控品O基因;提取系统a/c与扩增系统3组合、提取系统a/c与扩增系统2组合检测弱阳性质控品IC基因)检测的Ct值差异无统计学意义(P>0.05)外,其他不同提取系统提取的核酸由同一扩增系统扩增,同一提取系统提取的核酸由不同扩增系统扩增,其IC、O、N基因Ct值差异均有统计学意义(P<0.05)。结论不同核酸提取、扩增系统组合检测新型冠状病毒核酸的效能存在一定差别,选择最优的组合使用可提升检测效能。 展开更多

关键词 新型冠状病毒 内标基因 弱阳性质控品 提取系统 扩增系统

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自制弱阳性质控品对无偿献血者进行ABO血型鉴定室内质控的可行性研究

11

作者 高勇 《中国伤残医学》 2016年第3期207-208,共2页

目的：通过调查探究分析自制弱阳性质控品鉴定无偿献血者ABO血型鉴定室内质控是否具有可行性。方法：随机选择2012年1月-2013年1月于本站进行5800名无偿献血者的血液标本（自制弱阳性质控品使用前）作为对照组，另随机选择2013年2月-201... 目的：通过调查探究分析自制弱阳性质控品鉴定无偿献血者ABO血型鉴定室内质控是否具有可行性。方法：随机选择2012年1月-2013年1月于本站进行5800名无偿献血者的血液标本（自制弱阳性质控品使用前）作为对照组，另随机选择2013年2月-2014年2月于本站进行5800名无偿献血者的血液标本（自制弱阳性质控品使用后）作为探究组，观察并对比分析2组鉴定效果。结果：对照组和探究组“异常”标本送检率分别为77．59％、72．41％，探究组正常血型确认率65．52％，对照组正常血型确认率25．86％，探究组显著高于对照组；探究组和对照组2组ABO亚型的检出率分别为32．76、5．17％，探究组显著高于对照组。结论：自制弱阳性质控品鉴定无偿献血者ABO血型鉴定室内质控具有可行性，且能够提高无偿献血的安全性。 展开更多

关键词 弱阳性质控品 无偿献血者 ABO血型鉴定

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转基因定量检测结果测量不确定度的自上而下评定方法研究及应用 被引量：1

12

作者 李俊 赵新 +11 位作者 陈红 李飞武 梁晋刚 李允静 王颢潜 高鸿飞 张华 陈子言 吴刚 沈平 徐利群 武玉花 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第22期4371-4385,共15页

【目的】定量检测标准体系是实施转基因定量标识的基础,而不确定度评定是定量检测标准体系的重要组成部分。急需建立适合一般实验室采用的标准化转基因定量检测结果不确定度的自上而下评定方法,以便检测实验室自行评定定量检测结果的测... 【目的】定量检测标准体系是实施转基因定量标识的基础,而不确定度评定是定量检测标准体系的重要组成部分。急需建立适合一般实验室采用的标准化转基因定量检测结果不确定度的自上而下评定方法,以便检测实验室自行评定定量检测结果的测量不确定度。【方法】测量方法精密度不确定度评定有2种方法,一种是根据“不确定度函数”的一般概念,利用15个不同浓度的常规样品,建立测量方法精密度引入的不确定度评定公式;另一种是重复测量有证标准物质,根据检测数据的中间精密度,计算方法精密度引入的不确定度。用有证标准物质或实验室配制样品作阳性定量质控品进行偏倚不确定度评定,实验室配制样品标称值的不确定度由实验室根据制备过程采用简易程序自行评定。将测量方法精密度引入的不确定度和测量过程的偏倚不确定度合成,评定试样定量结果的标准不确定度,然后乘以包含因子k,获得扩展不确定度。【结果】以转基因玉米DBN9936定量检测方法为例,分别用模拟的DBN9936常规样品和有证基体标准物质(GBW(E)100901)评定测量方法精密度引入的不确定度,分别为0.76%和0.33%,与常规样品相比,用有证标准物质评定的测量方法精密度不确定度显著偏小。用有证标准物质(GBW(E)100901)评定的偏倚不确定度为0.26%;用实验室配制粉末样品和基因组DNA样品(标称值均为3.0%)评定的偏倚不确定度分别为0.20%和0.19%。采用简易程序评定实验室配制样品标称值引入的不确定度时,部分不确定度分量被忽略,评定的偏倚不确定度偏小。将测量方法精密度不确定度和偏倚不确定度分别合成,用常规样品评定的扩展不确定度为1.26%、1.20%和1.20%;用有证标准物质评定的扩展不确定度为0.84%、0.78%和0.76%。【结论】建立了转基因定量检测结果自上而下的不确定度评定方法,检测实� 展开更多

关键词 转基因定量结果 测量不确定度 自上而下 有证标准物质 阳性定量质控品

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