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色水法包装系统密封性研究策略 被引量：5
1
作者 周浩 王欢 +2 位作者 张士博 李瑶 王慧洁 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第15期1293-1296,共4页
目的 针对色水法方法开发与验证的挑战进行深入探讨,为建立准确、可靠的包装系统密封性检查方法提供参考。方法 结合《美国药典》<1207>指导原则和研发工作经验,重点研究产品相关因素、测试参数、阳性对照品的制备和检出结果的判... 目的 针对色水法方法开发与验证的挑战进行深入探讨,为建立准确、可靠的包装系统密封性检查方法提供参考。方法 结合《美国药典》<1207>指导原则和研发工作经验,重点研究产品相关因素、测试参数、阳性对照品的制备和检出结果的判断方法对色水法灵敏度的影响,聚焦分析方法验证的基本内容和关键问题。结果 产品相关因素需要考虑包装组件和制剂的特性。测试参数中需重点关注染料溶液的黏度、压差条件、泄漏孔径和染液浸没时间。阳性对照品的制备应综合考虑产品包装形式、制剂特性、测试条件和潜在泄漏风险。检出结果可通过紫外-可见分光光度法和目视检查法进行判断。方法学验证中灵敏度是关键,且必须通过专属性考察确认产品是否影响检出结果判断。结论 制药企业必须基于产品特性、包装形式和预期测试要求评估方法的适用性,建立合理的色水法包装系统密封性检查标准。 展开更多
关键词 色水法 灵敏度 包装系统密封性 测试参数 阳性对照品
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新疆出血热病毒实时荧光RT-PCR检测方法的假病毒阳性对照品制备 被引量：4
2
作者 郑夔 袁帅 +5 位作者 黎东红 丁国允 李小波 师永霞 戴俊 黄吉城 《华南预防医学》 2016年第1期1-5,共5页
目的制备安全、稳定的新疆出血热病毒实时荧光RT-PCR检测阳性对照品。方法人工合成含实时荧光RT-PCR扩增片段的新疆出血热病毒核苷酸序列,连接入慢病毒载体,将重组慢病毒载体与慢病毒包装载体共转染293T细胞,培养48 h后采用实时荧光RT-... 目的制备安全、稳定的新疆出血热病毒实时荧光RT-PCR检测阳性对照品。方法人工合成含实时荧光RT-PCR扩增片段的新疆出血热病毒核苷酸序列,连接入慢病毒载体,将重组慢病毒载体与慢病毒包装载体共转染293T细胞,培养48 h后采用实时荧光RT-PCR方法检测假病毒包装情况,随后将包装成功的假病毒颗粒加核酸保护剂制备成阳性对照品,并进行稳定性试验。结果重组慢病毒载体与慢病毒包装载体共转染293T细胞后,将收集到的细胞培养上清采用实时荧光RT-PCR进行检测,结果显示10、100、1 000、10 000倍4个倍比稀释度扩增后所得的Ct值分别为13、19、25、33,显示含高浓度的假病毒颗粒。取经1 000倍稀释后制备的阳性对照品于37℃孵箱中放置0、3、7、15、21和30 d后,提取的RNA经实时荧光RT-PCR检测,所得Ct值在25~28之间,表明阳性对照品有较高的热稳定性。结论本研究通过慢病毒包装技术制备的假病毒颗粒,是新疆出血热病毒荧光RT-PCR核酸检测过程中理想的阳性对照品。 展开更多
关键词 新疆出血热病毒 实时荧光RT-PCR 阳性对照品
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用于非洲猪瘟病毒核酸检测的假病毒阳性对照品的制备和标定 被引量：2
3
作者 李朋霏 宋晓明 +4 位作者 周保琨 曹志 张洪亮 马清霞 单虎 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期647-655,共9页
【目的】制备安全、稳定的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)实时荧光定量PCR阳性对照品。【方法】人工合成含ASFV P 72、CD 2 v和MGF 360-12 L基因片段的核苷酸序列,将3段基因串联插入腺病毒载体PacAd5中,将重组腺病毒质... 【目的】制备安全、稳定的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)实时荧光定量PCR阳性对照品。【方法】人工合成含ASFV P 72、CD 2 v和MGF 360-12 L基因片段的核苷酸序列,将3段基因串联插入腺病毒载体PacAd5中,将重组腺病毒质粒和腺病毒骨架质粒共转染293A细胞,利用倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(EGFP)的表达情况,培养10 d后用PCR方法检测假病毒包装情况,将制备的假病毒颗粒加冻干保护剂制备成阳性对照品,进行均一性和稳定性试验,并对制备好的阳性对照品进行核酸拷贝数的绝对定量。【结果】重组腺病毒质粒和腺病毒骨架质粒共转染293A细胞24 h后出现点状荧光,转染后7 d细胞有形成岛屿状感染区的趋势,转染后10 d细胞出现固缩和脱落等明显细胞病变,收获的假病毒液经PCR检测和测序鉴定,结果显示,能扩增出大小约2400 bp的阳性条带且测序序列与插入片段一致。均一性试验显示,阳性对照品Ct值的变异系数<1%,表明均一性良好;加速热稳定性试验显示,制备的阳性对照品分别经4℃放置7 d、室温(25℃)和37℃处理24 h后仍能保持稳定;阳性对照品在DNaseⅠ作用1 h后仍具有良好的稳定性;保存期试验表明制备的阳性对照品在-20℃下可稳定保存6个月。经微滴式数字PCR(ddPCR)检测结果显示,制备的阳性对照假病毒液的核酸拷贝数为(2.26±0.09)×10^(4)拷贝/μL。【结论】本研究成功制备了含有P 72、CD 2 v和MGF 360-12 L基因片段的ASFV假病毒阳性对照品,可实现对核酸提取与检测过程的全程监控。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒(AFSV) 假病毒 阳性对照品
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新型冠状病毒保存液开发与应用
4
作者 余辉 钟德优 +1 位作者 范月珍 黄丽芳 《现代医药卫生》 2022年第17期2989-2992,共4页
目的分析不同保存液存放新型冠状病毒阳性对照品的效果。方法采用常规保存液(常规保存液组)和长庚病毒样本保存液(CG保存液组)存放新型冠状病毒阳性对照品,分析2种保存液于室温(25℃)、4℃、-20℃存放的稳定性。结果常规保存液组室温存... 目的分析不同保存液存放新型冠状病毒阳性对照品的效果。方法采用常规保存液(常规保存液组)和长庚病毒样本保存液(CG保存液组)存放新型冠状病毒阳性对照品,分析2种保存液于室温(25℃)、4℃、-20℃存放的稳定性。结果常规保存液组室温存放时第12小时后N基因稳定性下降;第18小时后ORFlab基因稳定性下降;而CG保存液组24 h内靶基因稳定性均未受影响。4℃存放7 d、-20℃存放8周靶基因稳定性均良好。结论CG保存液可用于临床样本运输存储且能保持病毒核酸完整性。 展开更多
关键词 新型冠状病毒肺炎 阳性对照品 保存液 病毒核酸完整性
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