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鸭坦布苏病毒抗体间接ELISA检测方法的建立 被引量：71
1
作者 姬希文 闫丽萍 +3 位作者 颜丕熙 李国新 张七斤 李泽君 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期630-634,共5页
为建立快速检测鸭坦布苏病毒(DTV)的血清学方法,本研究利用纯化的DTV奉贤株(FX2010)作为包被抗原,建立了检测DTV血清抗体的间接ELISA方法,并且对各种检测条件进行了优化。优化后确定的抗原最适包被浓度为1.675μg/孔,抗原最佳包被条件... 为建立快速检测鸭坦布苏病毒(DTV)的血清学方法,本研究利用纯化的DTV奉贤株(FX2010)作为包被抗原,建立了检测DTV血清抗体的间接ELISA方法,并且对各种检测条件进行了优化。优化后确定的抗原最适包被浓度为1.675μg/孔,抗原最佳包被条件为37℃放置2 h后,4℃下过夜,血清的最佳稀释度为1∶200,酶标抗体最适稀释度为1∶2 000。在优化条件下,阴阳性临界值判定标准为0.432。用建立的间接ELISA方法对禽流感病毒、新城疫病毒、网状内皮增生病病毒、I型鸭肝炎病毒、呼肠孤病毒、禽白血病病毒阳性血清进行了检测,均无交叉反应,表明该方法具有良好的特异性。批内和批间重复试验的最大变异系数分别为2.9%和3.9%,显示该方法具有很好的稳定性。用间接ELISA方法对140份疑似鸭坦布苏病血清样品进行检测,有108份样品呈现阳性,而琼扩试验只有32份呈阳性结果,而且用该方法检测的阳性样品包括了琼扩试验的阳性样品,证明该方法具有较高的敏感性和特异性。本研究快速检测DTV抗体间接ELISA的建立为该病的诊断和流行病学调查提供了新的方法。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒 间接elisa 抗体
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以重组mE2蛋白为抗原建立检测猪瘟病毒抗体间接ELISA方法的研究 被引量：45
2
作者 余兴龙 涂长春 +5 位作者 李作生 马正海 李红卫 吴健敏 吕宗吉 殷震 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第3期220-222,共3页
以在Ｅ．ｃｏｌｉ高效表达的猪瘟病毒Ｅ２基因主要抗原编码区（ｍＥ２）为抗原，以辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记的兔抗猪ＩｇＧ为二抗，建立了检测猪瘟病毒抗体的间接ＥＬＩＳＡ方法。经检测筛选出最佳反应条件为：１２μｇ／孔纯化... 以在Ｅ．ｃｏｌｉ高效表达的猪瘟病毒Ｅ２基因主要抗原编码区（ｍＥ２）为抗原，以辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记的兔抗猪ＩｇＧ为二抗，建立了检测猪瘟病毒抗体的间接ＥＬＩＳＡ方法。经检测筛选出最佳反应条件为：１２μｇ／孔纯化的Ｅ．ｃｏｌｉ表达的ｍＥ２重组蛋白包被酶标板，用１０％的兔血清或马血清进行封闭，以正常Ｅ．ｃｏｌｉ裂解上清液稀释待检血清。试验表明应用重组ｍＥ２蛋白作为诊断ＨＣＶ抗原具有特异性高、抗原易纯化和成本低等特点。 展开更多
关键词 mE2重组蛋白 猪瘟病毒 抗体 间接elisa
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副猪嗜血杆菌血清5型间接血凝试验和间接ELISA抗体检测方法的建立 被引量：36
3
作者 石碧 崔耀文 +6 位作者 贾凡 金卉 万云 蔡旭旺 方刚 陈焕春 周锐 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期964-968,共5页
为建立副猪嗜血杆菌（HPS）的血清学诊断方法，通过探索HPS荚膜多糖产生的最适体外培养条件，提取了HPS血清5型菌株的荚膜多糖（CPS），并以之为抗原分别建立了间接血凝试验（IHA）和间接ELISA两种抗体检测方法，对其特异性、敏感性和... 为建立副猪嗜血杆菌（HPS）的血清学诊断方法，通过探索HPS荚膜多糖产生的最适体外培养条件，提取了HPS血清5型菌株的荚膜多糖（CPS），并以之为抗原分别建立了间接血凝试验（IHA）和间接ELISA两种抗体检测方法，对其特异性、敏感性和符合率进行了比较研究。结果表明，两种检测方法的特异性良好，但ELISA的敏感性是IHA的5～10倍，二者的阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为79．7％、55．2％和65．3％。用这两种方法检测了320份临床送检猪血清，IHA和ELISA的阳性率分别为40％和59％。结果证实，这两种方法适用于不同实验室条件下HPS的诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 荚膜多糖 间接血凝试验 间接elisa
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间接ELISA检测猪伪狂犬病血清抗体 被引量：23
4
作者 邱德新 陈焕春 +2 位作者 何启盖 吴斌 曹胜波 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期149-152,共4页
用猪肾传代细胞 IBRS- 2增殖猪伪狂犬病病毒 (PRV)鄂 A株 ,病毒培养上清液经硫酸铵沉淀、聚乙二醇(Mr2 0 0 0 0 )浓缩后作为包被抗原。用纯化的猪血清 Ig G免疫家兔 ,HRP标记提取的兔抗猪 Ig G,制备出高效价的酶标抗体 ,酶标抗体工作浓... 用猪肾传代细胞 IBRS- 2增殖猪伪狂犬病病毒 (PRV)鄂 A株 ,病毒培养上清液经硫酸铵沉淀、聚乙二醇(Mr2 0 0 0 0 )浓缩后作为包被抗原。用纯化的猪血清 Ig G免疫家兔 ,HRP标记提取的兔抗猪 Ig G,制备出高效价的酶标抗体 ,酶标抗体工作浓度为 1∶ 5 0 0 0 0 ;经各种条件的选择 ,建立了检测猪伪狂犬病血清抗体的间接 EL ISA。所建立的间接 EL ISA抗原包被浓度为 39.2 mg/ L ,血清最佳稀释度为 1∶ 2 0 ,与猪细小病毒、猪瘟、O型口蹄疫、猪衣原体标准阳性血清呈阴性反应 ,与标准阴性血清和临床未感染 PRV的猪血清呈阴性反应 ;与猪伪狂犬病标准阳性血清、免疫猪血清和临床发病猪血清呈明显的阳性反应 ;与美国进口的 PRV抗体检测 EL ISA诊断试剂盒检测结果比较 ,45份猪血清的阴、阳性检出符合率均为 10 0 %。表明建立的间接 EL ISA具有敏感性高、特异性强、重复性好的优点 ,可用于猪伪狂犬病血清抗体的定性和定量检测。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病 间接elisa 抗体检测 血清 抗体
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迟缓爱德华氏菌间接ELISA快速检测法 被引量：35
5
作者 白方方 兰建新 +2 位作者 王燕 韩茵 张晓华 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期619-625,共7页
以迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)WY28作为抗原,免疫新西兰兔,获得效价为1:2048的多克隆抗体;以此多克隆抗体作为一抗,山羊抗兔IgG-HRP作为酶标二抗,建立迟缓爱德华氏菌的间接ELISA快速检测法。采用棋盘滴定法确定抗原与一抗的最... 以迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)WY28作为抗原,免疫新西兰兔,获得效价为1:2048的多克隆抗体;以此多克隆抗体作为一抗,山羊抗兔IgG-HRP作为酶标二抗,建立迟缓爱德华氏菌的间接ELISA快速检测法。采用棋盘滴定法确定抗原与一抗的最佳工作浓度分别为106CFU·mL-1和1:10000;酶标二抗的最适工作浓度为1:1000。病原菌检测灵敏度为每孔103CFU。该方法标准化后具有快速、灵敏等特性,与肠杆菌科其他细菌参考菌株无交叉反应,具良好的特异性。对养殖场发病大菱鲆(Scophthalmus maximus)和半滑舌鳎中分离的细菌菌株进行检测,从56株分离菌株中检测出27株迟缓爱德华氏菌,阳性检出率为48.2%。该方法的建立有助于快速准确地诊断由迟缓爱德华氏菌引起的养殖鱼类病害。 展开更多
关键词 间接elisa 迟缓爱德华氏菌 多克隆抗体 水产养殖 病原菌
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检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体ELISA方法的建立 被引量：17
6
作者 蔡雪晖 郭宝清 +3 位作者 柴文君 刘文兴 翁长江 刘光清 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第2期122-125,共4页
本试验通过差速离心法和非线性蔗糖密度梯度离心法纯化猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)。经三氯_三氟乙烷处理后 ,作为ELISA试验的标准抗原 ,并建立了检测PRRSV抗体ELISA方法。该方法与IFA、IPMA和国外同类商品化试剂盒进行了对比试验 ... 本试验通过差速离心法和非线性蔗糖密度梯度离心法纯化猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)。经三氯_三氟乙烷处理后 ,作为ELISA试验的标准抗原 ,并建立了检测PRRSV抗体ELISA方法。该方法与IFA、IPMA和国外同类商品化试剂盒进行了对比试验 ,表明该方法具有敏感性高、特异性好的特点 ,是一种快速准确检测PRRSV抗体的方法。间接ELISA方法在敏感性上要优于IFA和IPMA。 展开更多
关键词 间接elisa PRRSV 抗体检测 敏感性 诊断
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猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体间接ELISA方法的建立 被引量：28
7
作者 王光华 独军政 +5 位作者 丛国正 邵军军 林彤 薛慧文 常惠芸 谢庆阁 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期961-966,共6页
将口蹄疫病毒(FMDV)的VP1基因,通过pPROex-HT表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达,获得大小为31ku的融合蛋白,Westernblot检测证实表达的该蛋白具有良好的生物学活性。以纯化的融合蛋白为抗原建立了猪FMDVVP1蛋白间接ELISA检测方法... 将口蹄疫病毒(FMDV)的VP1基因,通过pPROex-HT表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达,获得大小为31ku的融合蛋白,Westernblot检测证实表达的该蛋白具有良好的生物学活性。以纯化的融合蛋白为抗原建立了猪FMDVVP1蛋白间接ELISA检测方法。通过对80份田间血清样品的检测表明,该方法与FMDV液相阻断ELISA(国标试剂盒)的总符合率为96.25%,表明建立的VP1蛋白间接ELISA检测方法具有很好的特异性和敏感性。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒抗体 VP1蛋白 间接elisa
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猪传染性胃肠炎病毒重组N蛋白抗原间接ELISA抗体检测方法的建立 被引量：20
8
作者 孙东波 冯力 +7 位作者 时洪艳 刘胜旺 陈洪岩 佟有恩 李伟杰 王明 马思奇 陈建飞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期572-576,580,共6页
本研究以纯化的原核表达猪传染性胃肠炎病毒N蛋白为诊断抗原,建立了猪传染性胃肠炎病毒抗体检测的间接ELISA诊断方法,将其命名为rnTGE-ELISA。该抗原不与其他常见10种猪病的阳性血清发生交叉反应,批内和批间重复性试验的变异系数均小于1... 本研究以纯化的原核表达猪传染性胃肠炎病毒N蛋白为诊断抗原,建立了猪传染性胃肠炎病毒抗体检测的间接ELISA诊断方法,将其命名为rnTGE-ELISA。该抗原不与其他常见10种猪病的阳性血清发生交叉反应,批内和批间重复性试验的变异系数均小于15%;对仔猪免疫后不同时间的血清检测结果表明rnTGE-ELISA与纯化病毒ELISA符合率达95.0%;rnTGE-ELISA相对于VN试验的敏感性为96.3%、特异性为92.2%;现地试验中,rnTGE-ELISA与SvanovaTGEV/PRCVantibodydiagnosisKit的符合率达87.0%,通过中和试验复核结果表明,rnTGE-ELISA的假阳性低于SvanovaTGEV/PRCVantibodydiagnosisKit。本试验建立的rnTGE-ELISA诊断方法具有良好的敏感性和特异性,为免疫猪群抗体监测和TGE流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。 展开更多
关键词 TGEV 重组N蛋白 间接elisa 诊断
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非洲猪瘟病毒p30基因的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立 被引量：28
9
作者 吴竞 王西西 +2 位作者 吴映彤 任肖 郭晓宇 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第12期3555-3562,共8页
为建立检测血清中非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)抗体的间接ELISA方法,本试验将ASFVp30基因进行原核表达,采用SDS-PAGE和Western blotting方法对重组蛋白进行表达鉴定和免疫原性分析,随后以纯化的重组蛋白为包被抗原,经... 为建立检测血清中非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)抗体的间接ELISA方法,本试验将ASFVp30基因进行原核表达,采用SDS-PAGE和Western blotting方法对重组蛋白进行表达鉴定和免疫原性分析,随后以纯化的重组蛋白为包被抗原,经条件优化、特异性试验、敏感性试验和重复性试验,建立一种血清中ASFV抗体的检测方法。结果显示,ASFVp30基因成功克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,获得pET-32a-p30重组质粒;转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达,得到P30重组蛋白,重组蛋白大小约为42ku,主要以包涵体形式存在;Western blotting结果显示,纯化后的蛋白具有良好的免疫原性;以纯化的P30重组蛋白为包被抗原,建立了检测ASFV抗体的间接ELISA方法,通过方阵试验对间接ELISA方法进行优化,最终确定了抗原最佳包被浓度为1.2μg/mL,待检血清最佳稀释倍数为1∶100,最佳封闭液为1%BSA,酶标抗体最佳稀释度为1∶4 000,以此建立的ASFV间接ELISA方法临界值为0.322。本方法仅与ASFV阳性血清发生特异性反应,与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒、伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型及猪流行性腹泻病毒阳性血清均无交叉反应,具有较强的特异性。该方法检测ASFV阳性血清灵敏度可达到1∶1 600;批内重复性和批间重复性变异系数均<10%。本试验建立的间接ELISA方法具有良好的特异性、灵敏度和重复性,可初步应用于ASFV抗体的检测。 展开更多
关键词 非洲猪瘟(ASFV) P30基因 原核表达 重组蛋白 间接elisa
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间接ELISA检测犬细小病毒病血清抗体方法的建立 被引量：15
10
作者 刘剑郁 李晓成 +3 位作者 陈德坤 张燕霞 陈杰 吴发兴 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2006年第3期27-29,共3页
用犬肾细胞增殖犬细小病毒,经纯化﹑标化作为包被抗原,建立检测犬细小病毒抗体的间接ELISA方法。结果表明:抗原最佳包被浓度5μg/mL;血清最佳稀释度1:40,反应时间45min;酶标抗体最佳稀释度1:2000,反应时间45min;S/P≥0.240判为阳性,≤0.... 用犬肾细胞增殖犬细小病毒,经纯化﹑标化作为包被抗原,建立检测犬细小病毒抗体的间接ELISA方法。结果表明:抗原最佳包被浓度5μg/mL;血清最佳稀释度1:40,反应时间45min;酶标抗体最佳稀释度1:2000,反应时间45min;S/P≥0.240判为阳性,≤0.190判为阴性,介于二者之间为可疑。该抗原不与犬瘟热﹑犬传染性肝炎﹑犬冠状病毒病﹑猫泛白细胞减少症病原阳性血清反应;批内重复试验变异系数小于10%,批间重复试验变异系数小于15%;对20份免疫犬血清进行检测,阳性检出率为85%,明显高于血凝抑制试验(65%),符合率为80%。试验结果表明建立的间接ELISA检测犬细小病毒抗体方法特异、灵敏、可重复性好。 展开更多
关键词 间接elisa 犬细小病毒 抗体检测
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副溶血弧菌间接ELISA快速检测法的建立 被引量：22
11
作者 窦勇 宁喜斌 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期205-209,共5页
以副溶血弧菌1.2164作为抗原,免疫新西兰兔,获得效价为1.6×105的多克隆抗体;以此多克隆抗体作为一抗,山羊抗兔IgG-HRP作为酶标二抗,建立副溶血弧菌的间接ELISA快速检测法。采用棋盘滴定法确定抗原与一抗的最佳工作浓度分别为107cfu... 以副溶血弧菌1.2164作为抗原,免疫新西兰兔,获得效价为1.6×105的多克隆抗体;以此多克隆抗体作为一抗,山羊抗兔IgG-HRP作为酶标二抗,建立副溶血弧菌的间接ELISA快速检测法。采用棋盘滴定法确定抗原与一抗的最佳工作浓度分别为107cfu·mL-1和1∶4000;酶标二抗最适工作浓度为1∶1000。将该方法标准化后进行检测实验,交叉实验表明,此多克隆抗体与其它菌株交叉反应结果为阴性;阻断实验表明,其具有较高的特异性,阻断率高达86.53%。结果表明:此法在6h内即可检测出浓度为104cfu·mL-的副溶血弧菌,且与其它菌株均无交叉反应。 展开更多
关键词 间接elisa 副溶血弧菌 多克隆抗体 效价 OD492值
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检测NDV特异性IgG、IgM、IgA的间接ELISA方法的建立 被引量：12
12
作者 孙建宏 曹殿军 +3 位作者 刘培欣 闫丽辉 孔宪刚 刘宝全 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期23-25,共3页
本试验以新城疫病毒 (NDV)感染的鸡胚尿囊液经差速离心 ,庶糖密度梯度离心提纯的NDV为包被抗原 ,以纯化的鸡IgG、IgM及IgA免疫兔 ,制备辣根过氧化物酶标记的兔抗鸡IgG、IgM及IgA ,分别建立了检测NDV特异性IgG、IgM、IgA的间接ELISA方法 ... 本试验以新城疫病毒 (NDV)感染的鸡胚尿囊液经差速离心 ,庶糖密度梯度离心提纯的NDV为包被抗原 ,以纯化的鸡IgG、IgM及IgA免疫兔 ,制备辣根过氧化物酶标记的兔抗鸡IgG、IgM及IgA ,分别建立了检测NDV特异性IgG、IgM、IgA的间接ELISA方法 ,抗原最适包被量为 1.34μg/孔。酶标兔抗鸡IgG、IgM、IgA的最佳稀释度分别为 1∶40 0 ,1∶40 0 ,1∶10 0 ;血清样品检测IgG时 ,最适工作浓度为 1∶40 0 ,检测IgM时为 1∶5 0。该方法具有特异性强、灵敏度度、快速简便等优点 ,适合于对各类新城疫特异性抗体的动态监测和大批检测 。 展开更多
关键词 新城疫病毒 IgG IGM IGA 间接elisa 检测方法
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猪流感抗体间接ELISA检测方法的建立 被引量：20
13
作者 陈艳 辛晓光 +4 位作者 杨焕良 李婷 李海燕 乔传玲 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期308-311,共4页
猪流感病毒A/Swine/Fujian/668/2001(H3N2)株感染的鸡胚尿囊液,经差速离心后,再经蔗糖密度梯度离心,提纯、纯化的猪流感病毒经NP-40处理并反复冻融,作为猪流感间接ELISA抗原,确立了间接ELISA检测方法。对29份HI试验猪流感为阴性的血清... 猪流感病毒A/Swine/Fujian/668/2001(H3N2)株感染的鸡胚尿囊液,经差速离心后,再经蔗糖密度梯度离心,提纯、纯化的猪流感病毒经NP-40处理并反复冻融,作为猪流感间接ELISA抗原,确立了间接ELISA检测方法。对29份HI试验猪流感为阴性的血清进行了检测,经统计学分析,确定间接ELISA判定标准,被检血清OD_(490nm)值≥0.20判定为阳性。该方法对猪瘟等11种猪疫病阳性血清无交叉反应,批内和批间重复试验的吸收变异系数分别在3.34%～8.12%和6.2%～9.04%之间。与HI的符合率达到92.8%,经卡方检验(P<0.01)比HI试验敏感。为猪流感抗体检测提供了快速、准确、简便的方法。 展开更多
关键词 猪流感 猪流感病毒 间接elisa
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副猪嗜血杆菌OMP5基因的克隆、表达及间接ELISA检测方法的建立 被引量：22
14
作者 陈善真 李春玲 +1 位作者 贾爱卿 王贵平 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第14期3036-3044,共9页
【目的】利用表达纯化的副猪嗜血杆菌(Haemophilus Parasuis,HPS)外膜蛋白P5(outer-membrane protein P5,OMP5),建立检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA检测方法。【方法】克隆扩增HPS OMP5基因,并将OMP5基因与原核表达载体pET-32a(+)连接... 【目的】利用表达纯化的副猪嗜血杆菌(Haemophilus Parasuis,HPS)外膜蛋白P5(outer-membrane protein P5,OMP5),建立检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA检测方法。【方法】克隆扩增HPS OMP5基因,并将OMP5基因与原核表达载体pET-32a(+)连接,通过PCR、双酶切及测序鉴定后,将阳性重组质粒转化入受体菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达。亲和层析法纯化蛋白,尿素梯度透析复性,Western blot鉴定表达产物。将超声破碎抗原和复性蛋白分别按不同浓度包被酶标板,通过方阵滴定法确定最佳抗原包被浓度及血清稀释度,并对其它条件进行优化,最终建立检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法。【结果】利用克隆表达的HPS OMP5蛋白做抗原,通过方阵滴定法确定蛋白最佳包被浓度为1:400,血清的最佳稀释度为1:160。用建立的间接ELISA方法检测317份未进行HPS免疫的健康猪血清,结果检出72份阳性,检出率为22.71%,与广东地区发病猪中的HPS分离率24%接近。同时,用该方法与用超声破碎抗原建立的ELISA方法同时检测了78份血清样品,结果,该法检出27份阳性,检出率为34.62%,后者则检出31份阳性,检出率为39.74%,二者符合率为71.79%。【结论】本研究利用重组表达的OMP5蛋白作为抗原建立的检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法,特异性好、重复性好,检出率与HPS临床分离率接近,可用于副猪嗜血杆菌的临床检测、流行病学调查和免疫监控。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 外膜蛋白P5 克隆 表达 间接elisa
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侵染广西罗汉果的小西葫芦黄花叶病毒的鉴定及抗血清制备 被引量：17
15
作者 秦碧霞 郑红英 +3 位作者 蔡健和 陈炯 刘志明 陈剑平 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期468-473,共6页
在广西临桂罗汉果花叶畸形病株上获得了一个线状病毒分离物LGL-1,寄主范围、蚜传能力测定、病毒粒子形态和细胞病理特征研究表明,它是马铃薯Y病毒科成员。采用马铃薯Y病毒科特异性简并引物做PCR扩增,并测定了分离物LGL-1的基因组3′-末... 在广西临桂罗汉果花叶畸形病株上获得了一个线状病毒分离物LGL-1,寄主范围、蚜传能力测定、病毒粒子形态和细胞病理特征研究表明,它是马铃薯Y病毒科成员。采用马铃薯Y病毒科特异性简并引物做PCR扩增,并测定了分离物LGL-1的基因组3′-末端序列,序列分析表明它是小西葫芦黄花叶病毒(ZYMV)。系统进化树分析揭示,世界范围内的ZYMV分离物主要可分为3大群体,分离物LGL-1为中国特有群体Group III成员。原核表达制备了分离物LGL-1的外壳蛋白抗血清,明确了ZYMV是引起广西罗汉果病害的主要病毒,并且比较了原核表达法和提纯病毒法制备的抗血清,在病样的间接ELISA法检测中结果的差异。 展开更多
关键词 生物学鉴定 系统进化树 小西葫芦黄花叶病毒 原核表达 间接elisa
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非洲猪瘟病毒p54基因的原核表达及其抗体的间接ELISA检测方法的建立 被引量：21
16
作者 曹琛福 梁云浩 +6 位作者 陶虹 花群义 曾少灵 杨俊兴 陈兵 张桂红 吕建强 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第2期6-10,共5页
将非洲猪瘟病毒P54基因克隆到原核表达载体pET-52b(+)3C/LIC中,转入BL21(DE3)菌中诱导表达,对表达蛋白进行SDS-PAGE和Western blot分析的结果表明,表达蛋p54的分子质量约为28ku,具有很好的抗原性。纯化p54蛋白后,采用2.5μg/mL浓度作包... 将非洲猪瘟病毒P54基因克隆到原核表达载体pET-52b(+)3C/LIC中,转入BL21(DE3)菌中诱导表达,对表达蛋白进行SDS-PAGE和Western blot分析的结果表明,表达蛋p54的分子质量约为28ku,具有很好的抗原性。纯化p54蛋白后,采用2.5μg/mL浓度作包被抗原,建立了检测非洲猪瘟p54抗体的间接ELISA方法,结果表明建立的间接ELISA方法特异性、敏感性都较好。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 p54基因 原核表达 间接elisa
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用ELISA方法检测鸡蛋氟喹诺酮类药物残留的研究 被引量：17
17
作者 刘欢欢 于学辉 +3 位作者 彭莉 岳秀英 杨松沛 刘内生 《西南民族大学学报（自然科学版）》 CAS 2008年第6期1182-1185,共4页
针对鸡蛋中喹诺酮类药物的残留,采用间接竞争ELISA方法建立了检测手段.样品经提取净化后,以氟喹诺酮类药物多残留试剂盒为基础,建立了鸡蛋中喹诺酮类药物残留的检测方法.结果显示,在5～50μg/kg浓度范围内的平均添加回收率在70%以上,批... 针对鸡蛋中喹诺酮类药物的残留,采用间接竞争ELISA方法建立了检测手段.样品经提取净化后,以氟喹诺酮类药物多残留试剂盒为基础,建立了鸡蛋中喹诺酮类药物残留的检测方法.结果显示,在5～50μg/kg浓度范围内的平均添加回收率在70%以上,批内变异系数在10%以内,批间变异系数在15%以内,检测限为5μg/kg,低于国家规定的喹诺酮类药物在鸡蛋中的残留限,建立了一种快速的对鸡蛋中喹诺酮类药物残留的检测方法,能满足目前基层初筛工作的实际需要. 展开更多
关键词 鸡蛋 氟喹诺酮类药物 残留检测 间接elisa
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犬细小病毒VP2基因的原核表达及间接ELISA方法的建立 被引量：17
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作者 李慕瑶 姜骞 +3 位作者 刘家森 司昌德 韩凌霞 曲连东 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期218-222,共5页
根据GenBank上发表的犬细小病毒(CPV)VP2蛋白基因序列,设计并合成1对引物,通过PCR扩增VP2基因全长。将其克隆到pET-30a载体中,构建了原核表达载体pET-VP2,转化大肠杆菌Rosetta,表达并纯化了重组蛋白,Western-blotting证明该重组蛋白具... 根据GenBank上发表的犬细小病毒(CPV)VP2蛋白基因序列,设计并合成1对引物,通过PCR扩增VP2基因全长。将其克隆到pET-30a载体中,构建了原核表达载体pET-VP2,转化大肠杆菌Rosetta,表达并纯化了重组蛋白,Western-blotting证明该重组蛋白具有免疫原性。利用重组蛋白为抗原,通过方阵试验确定了包被抗原的最佳包被量为15.8 ng/孔,血清的最佳稀释倍数为1∶100,建立了检测CPV血清抗体的间接ELISA方法。 展开更多
关键词 VP2基因 原核表达 纯化 间接elisa
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间接ELISA检测新型鸭瘟病毒抗体 被引量：9
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作者 郑福英 刁有祥 +3 位作者 杨杰华 冯绪华 陈庆普 刘悦竹 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期226-230,共5页
以50%饱和度的硫酸铵粗提病毒,再经SephadexG＿200过柱层析纯化了新型鸭瘟病毒,以此作为包被抗原,并用自制油苗免疫雏鸭,获得了高效价的血清抗体,又经过各种条件优化,建立了检测血清抗体的间接ELISA方法。经对不同发病日龄和免疫油苗后... 以50%饱和度的硫酸铵粗提病毒,再经SephadexG＿200过柱层析纯化了新型鸭瘟病毒,以此作为包被抗原,并用自制油苗免疫雏鸭,获得了高效价的血清抗体,又经过各种条件优化,建立了检测血清抗体的间接ELISA方法。经对不同发病日龄和免疫油苗后雏鸭的血清检测,证明该检测方法有很高的敏感性、特异性和重复性,可作为快速诊断该病的一种可靠方法。 展开更多
关键词 新型鸭瘟 间接elisa 抗体检测
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应用间接ELISA检测动物隐孢子虫病抗体 被引量：12
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作者 黄克和 李培英 +1 位作者 廖圣法 ShiguangYangMarkC.Healey 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期353-355,共3页
分别应用蔗糖和氯化铯密度梯度离心法纯化小型隐孢子虫（ Ｃｒｙｐ ｔｏｓｐ ｏｒｉｄｉｕｍ ｐ ａｒｖｕｍ ）卵囊，获得高纯度的抗原，建立了用间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 检测动物隐孢子虫病抗体的方法。抗原最适包被质量浓度是 ５．０ ｍ... 分别应用蔗糖和氯化铯密度梯度离心法纯化小型隐孢子虫（ Ｃｒｙｐ ｔｏｓｐ ｏｒｉｄｉｕｍ ｐ ａｒｖｕｍ ）卵囊，获得高纯度的抗原，建立了用间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 检测动物隐孢子虫病抗体的方法。抗原最适包被质量浓度是 ５．０ ｍ ｇ／ Ｌ，待检血清最佳稀释度是 １∶１００，明胶封闭体积分数和作用时间分别为 １％ 和 ６０ｍ ｉｎ。试验证明，该法具有快速、简便、特异和重复性好等优点。 展开更多
关键词 隐孢子虫病 间接elisa 抗体 免疫检测
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