新型氯霉素化学发光芯片免疫检测方法的建立及应用 被引量：8

1

作者 任帅 丁乔棋 +3 位作者 李丽 邵漫雨 宋素泉 闫丽萍 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1581-1587,共7页

采用氯霉素(CAP)全抗原CAP-HS-BSA免疫新西兰兔,获得抗CAP多克隆抗体,测得效价为2×10~5,此抗体与CAP结构类似物的交叉反应率均小于0.01%,特异性良好。在此基础上,分别建立了特异性检测氯霉素残留的间接竞争酶联免疫吸附法(ic-ELISA... 采用氯霉素(CAP)全抗原CAP-HS-BSA免疫新西兰兔,获得抗CAP多克隆抗体,测得效价为2×10~5,此抗体与CAP结构类似物的交叉反应率均小于0.01%,特异性良好。在此基础上,分别建立了特异性检测氯霉素残留的间接竞争酶联免疫吸附法(ic-ELISA)和基于iPDMS膜的化学发光芯片免疫检测法,并用于实际牛奶样品中CAP的检测。建立的ic-ELISA法的半数抑制浓度(IC_(50))为12.9 ng/mL,线性检测范围(IC_(20)~IC_(80))为0.8~250.0 ng/mL,检出限(IC_(10))为0.1 ng/mL,回归方程B/B_0=-0.2028lg C_(CAP)+0.7281(R^2=0.9926)。牛奶样品中加标回收率为81.8%~97.9%,相对标准偏差(RSD)小于10%。建立的化学发光芯片免疫检测方法的半数抑制浓度为263.0 ng/mL,线性范围(IC_(20)~IC_(80))为1~5000 ng/mL之间,检出限(IC_(10))为1 ng/mL,回归方程B/B_0=0.1781 lg C_(CAP)+0.9318(R^2=0.9891),牛奶中CAP的加标回收率为77.0%~100.5%,RSD<15%。 展开更多

关键词 氯霉素 多克隆抗体 间接竞争酶联免疫分析 化学发光 芯片免疫

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呋喃它酮代谢物单链抗体制备和酶联免疫分析方法 被引量：5

2

作者 杨武英 王弘 +6 位作者 洪艳平 王丹 徐振林 沈玉栋 柯法钧 陈薪竹 孙远明 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第24期251-258,共8页

从呋喃它酮代谢物5-吗啉甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮(5-morpholinomethyl-3-amino-2-oxazolidinone,AMOZ)衍生物单克隆抗体杂交瘤细胞中克隆抗体重链可变区和轻链可变区基因,通过(G1y4Ser)3连接肽采用重叠延伸聚合酶链式反应技术构建单链... 从呋喃它酮代谢物5-吗啉甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮(5-morpholinomethyl-3-amino-2-oxazolidinone,AMOZ)衍生物单克隆抗体杂交瘤细胞中克隆抗体重链可变区和轻链可变区基因,通过(G1y4Ser)3连接肽采用重叠延伸聚合酶链式反应技术构建单链抗体基因,pET-22b(+)表达载体进行表达,Ni亲和柱进行纯化,制备得到抗AMOZ衍生物单链抗体,采用棋盘滴定实验优化包被原包被浓度和单链抗体稀释度,建立基于此单链抗体的AMOZ残留间接竞争酶联免疫分析方法并对方法进行评价。结果表明:最佳包被抗原质量浓度和单链抗体稀释度分别为0.0625μg/mL和20倍;建立的间接竞争酶联免疫分析方法半抑制浓度为8.65μg/L,线性范围为2.90~53.28μg/L,检测限为1.48μg/L;除与原药呋喃它酮有交叉反应外,此单链抗体与其他硝基呋喃类抗生素及其代谢物交叉反应率均小于0.1%,虾肉样品添加回收率为74.3%~86.6%;用高效液相色谱-串联质谱法对免疫测定结果进行确证实验,两种方法相关性良好(R^2=0.9992),说明建立的间接竞争酶联免疫分析方法可用于虾类等水产品中AMOZ残留的快速筛查。 展开更多

关键词 呋喃它酮 呋喃它酮代谢物 单链抗体 间接竞争酶联免疫分析

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间接竞争ELISA法检测谷物中T-2毒素 被引量：3

3

作者 唐世云 武玉香 +2 位作者 曲光刚 付石军 沈志强 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第6期118-121,共4页

T-2毒素是单端孢霉烯族毒素的重要代表，在单端孢霉烯族毒素中毒性最强，是主要的食品污染源之一，用间接竞争酶联免疫分析法（ELISA）对谷物中的T-2毒素进行了测定。从样品的处理、T-2毒素的添加回收及ELISA的实验检测等方面进行试验... T-2毒素是单端孢霉烯族毒素的重要代表，在单端孢霉烯族毒素中毒性最强，是主要的食品污染源之一，用间接竞争酶联免疫分析法（ELISA）对谷物中的T-2毒素进行了测定。从样品的处理、T-2毒素的添加回收及ELISA的实验检测等方面进行试验，最终结果用分析软件分析相关数据得到相关系数为0．998，IC5。为1．3μg/kg，标准品浓度为0-16．2μg／kg，灵敏度为0．2μg／kg，添加回收率均大于90％。该法测定T-2毒素方法简便，特异性高，灵敏度高，重复性好，适合用于检测谷物中的T－2毒素。 展开更多

关键词 间接竞争酶联免疫分析 T-2毒素 谷物

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恩诺沙星残留酶联免疫分析法的建立 被引量：2

4

作者 穆洪涛 李嘉慧 +1 位作者 刘凤银 黄玉琦 《广东第二师范学院学报》 2020年第5期61-67,共7页

不合理地使用喹诺酮类药物导致了市场上出现喹诺酮类抗生素残留严重的现象,危害消费者的健康,因此建立快速检测喹诺酮类药物的方法成为研究热点.选择恩诺沙星、达氟沙星、沙拉沙星3种药物为研究对象,通过碳化二亚胺法制备免疫原和包被原... 不合理地使用喹诺酮类药物导致了市场上出现喹诺酮类抗生素残留严重的现象,危害消费者的健康,因此建立快速检测喹诺酮类药物的方法成为研究热点.选择恩诺沙星、达氟沙星、沙拉沙星3种药物为研究对象,通过碳化二亚胺法制备免疫原和包被原,使用紫外分光光度法鉴定,通过免疫BALB/c小鼠初步筛选可用的免疫原,然后免疫新西兰大白兔制备特异性多克隆抗体,建立icELISA方法.人工抗原ENR-OVA稀释1∶64000,在37℃恒温水浴条件下孵育12 h,一抗稀释1∶16000,一抗与抗原竞争反应60 min,酶标抗体稀释1∶5000时反应最佳.抗体对恩诺沙星的半数抑制浓度(IC50)为4.539μg·mL^-1,线性范围(IC20~IC80)为0.595~34.632μg·mL^-1,与诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星有明显的交叉反应. 展开更多

关键词 喹诺酮 抗体 间接竞争酶联免疫分析 标准曲线

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基于抗大豆苷单克隆抗体的Ic-ELISA方法的建立 被引量：1

5

作者 贺娜娜 屈会化 +5 位作者 冯会宾 冯盛岚 赵灵灵 成金俊 任雅君 赵琰 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期587-590,共4页

目的：建立大豆苷的快速免疫分析检测方法。方法：该研究通过大豆苷单克隆抗体与葛根素、芦丁等共9种中药小分子的交叉反应证明该抗体具有特异性,并以制备出的大豆苷特异性单克隆抗体为基础,建立了大豆苷间接竞争酶联免疫分析方法（Ic-E... 目的：建立大豆苷的快速免疫分析检测方法。方法：该研究通过大豆苷单克隆抗体与葛根素、芦丁等共9种中药小分子的交叉反应证明该抗体具有特异性,并以制备出的大豆苷特异性单克隆抗体为基础,建立了大豆苷间接竞争酶联免疫分析方法（Ic-ELISA）,并用此方法检测大豆中大豆苷的含量。结果：抗体与葛根素的交叉反应率为115%,与芦丁、甘草酸、栀子苷等小分子无交叉反应。该方法线性范围为10~10 000 ng·m L^-1,孔内差和板间差均小于6.3%,平均回收率为105.4%%。采用该方法检测大豆中大豆苷的含量,所得结果与HPLC法的结果一致。结论：该研究建立了大豆苷的Ic-ELISA方法,可为含大豆苷的中药及复方的质量控制分析提供更加快速灵敏的检测方法。 展开更多

关键词 大豆苷 单克隆抗体 间接竞争酶联免疫分析 大豆异黄酮 Ic-ELISA法含量测定 快速免疫分析

原文传递

间接竞争酶联免疫分析方法检测花生中黄曲霉毒素B1 被引量：16

6

作者 潘明飞 李诗洁 +2 位作者 郭丹丹 王俊平 王硕 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第9期255-261,共7页

目的:针对花生中强毒性污染物黄曲霉毒素B1(AFB1)建立了一种准确、灵敏的间接竞争酶联免疫分析方法(ic-ELISA)。方法:制备了AFB1包被抗原,包被量为0.1μg/孔;抗体稀释64000倍;选用0.1%脱脂乳粉为方法封闭液,0.01mol/L磷酸盐缓冲液(PBS,p... 目的:针对花生中强毒性污染物黄曲霉毒素B1(AFB1)建立了一种准确、灵敏的间接竞争酶联免疫分析方法(ic-ELISA)。方法:制备了AFB1包被抗原,包被量为0.1μg/孔;抗体稀释64000倍;选用0.1%脱脂乳粉为方法封闭液,0.01mol/L磷酸盐缓冲液(PBS,pH7.4)为样品稀释液;结果:在最优的试验条件下,建立的ic-ELISA对目标物AFB1的检测线性范围为0.0097~0.088μg/L(R2=0.999);灵敏度(IC50)和检出限(IC15)分别达到0.027μg/L和0.0066μg/L。板内变异系数(n=6)为0.29%~16.9%,板间变异系数(n=6)为0.22%~21.19%。在花生样品中AFB1的检测灵敏度(IC50)为1.04μg/kg,回收率为96.67%~106.51%。结论:本研究建立的ic-ELISA方法操作相对简便,检测灵敏度高、准确性好,可稳定地用于花生样品中AFB1污染物的定量分析检测。 展开更多

关键词 黄曲霉毒素B1 间接竞争酶联免疫分析方法 花生

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间接竞争酶联免疫分析用于薏苡仁中杂色曲霉毒素的快速检测研究

7

作者 黄惠强 黄雨心 +4 位作者 廖梦瑶 林懿 王淑美 王峰 张磊 《化学试剂》 CAS 2024年第8期84-90,共7页

杂色曲霉毒素(Sterigmatocystin,ST)是一种主要由杂色曲霉和构巢曲霉等真菌产生的次级代谢产物,其结构与黄曲霉毒素相似,具有潜在的致癌性和毒性,严重危害人类生命健康。研究发现部分中药易ST污染,但目前针对中药中ST的快速检测研究相... 杂色曲霉毒素(Sterigmatocystin,ST)是一种主要由杂色曲霉和构巢曲霉等真菌产生的次级代谢产物,其结构与黄曲霉毒素相似,具有潜在的致癌性和毒性,严重危害人类生命健康。研究发现部分中药易ST污染,但目前针对中药中ST的快速检测研究相对较少。通过系统优化样品前处理条件及影响检测灵敏度的关键参数,建立了简便的间接竞争酶联免疫分析法(ic-ELISA),用于消费量较大的药食同源薏苡仁中ST的快速筛查。所建立ic-ELISA的半数抑制浓度(Half-Maximal Inhibitory Concentration,IC 50)为0.11 ng/mL,线性范围为6.25~100μg/kg,加标回收率在79.27%~99.95%之间,相对标准偏差(RSD)<12%。此外,该方法可抗基质干扰,只需利用溶剂标准曲线即可进行定量。用所建立的ic-ELISA对96批薏苡仁样品进行了检测,并用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)对阳性样品进行了确证。该ic-ELISA快速、准确、经济,可作为薏苡仁中ST高通量快筛的技术手段,同时为其他中药中ST的快速检测提供参考。 展开更多

关键词 杂色曲霉毒素 间接竞争酶联免疫分析方法 样品前处理 快速筛查 薏苡仁

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微囊藻毒素纳米抗体的制备及其间接竞争酶联免疫分析方法的建立 被引量：5

8

作者 司睿 吴广培 +2 位作者 王锋 雷红涛 王弘 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第5期332-337,共6页

微囊藻毒素(MC)作为肝毒性最强的藻毒素之一,在受污染的水体中时常检出,严重威胁着人畜饮水安全,加强其检测十分重要。在前期研究中,已成功构建抗MC-LR噬菌体展示纳米抗体文库。本研究以MC-LR-OVA作为包被原,经4轮固相淘筛,获得纳米抗体... 微囊藻毒素(MC)作为肝毒性最强的藻毒素之一,在受污染的水体中时常检出,严重威胁着人畜饮水安全,加强其检测十分重要。在前期研究中,已成功构建抗MC-LR噬菌体展示纳米抗体文库。本研究以MC-LR-OVA作为包被原,经4轮固相淘筛,获得纳米抗体M110。该抗体可识别MC-LR,且具有良好的稳定性。基于纳米抗体M110建立了检测MC-LR的间接竞争酶联免疫分析法(ic-ELISA),检测的半抑制浓度IC50值为3.55 ng/mL,检测限0.65 ng/mL,线性范围1.28~9.88 ng/mL。与UPLC-MS/MS方法检测结果相关系数达0.998,提示本方法可用于水体中微囊藻毒素残留的检测。 展开更多

关键词 微囊藻毒素 纳米抗体 淘筛 间接竞争酶联免疫分析法

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基于单克隆抗体的双酚A间接竞争酶联免疫分析法的建立 被引量：5

9

作者 张玉超 刘旭东 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2020年第17期172-177,共6页

为建立一种简便、快速、准确的双酚A检测方法,采用活性酯法将双酚酸与牛血清蛋白、卵清蛋白偶联制备人工抗原免疫BALB/c小鼠。选择抗血清效价和灵敏度高的BALB/c小鼠,采用聚乙二醇法制备杂交瘤细胞,获得一株可分泌双酚A单克隆抗体的杂... 为建立一种简便、快速、准确的双酚A检测方法,采用活性酯法将双酚酸与牛血清蛋白、卵清蛋白偶联制备人工抗原免疫BALB/c小鼠。选择抗血清效价和灵敏度高的BALB/c小鼠,采用聚乙二醇法制备杂交瘤细胞,获得一株可分泌双酚A单克隆抗体的杂交瘤细胞株。通过方阵滴定和反应条件优化,建立一种基于单克隆抗体的双酚A间接竞争酶联免疫分析法。该检测方法在0.5 ng/mL^50 ng/mL内有良好的线性关系,最低检测限IC10为0.5 ng/mL,半数抑制率IC50为16.65 ng/mL,水样中加标回收率为89.72%~105.25%。该单克隆抗体效价高、特异性强,该检测方法灵敏度高。 展开更多

关键词 双酚A 人工抗原 单克隆抗体 间接竞争酶联免疫分析法

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氟乐灵抗体的制备及其酶联免疫分析方法的建立 被引量：4

10

作者 黄惠威 刘凤银 +7 位作者 曾思敏 曾羲 钱振杰 施迪燊 聂玉丹 江海超 袁学文 穆洪涛 《现代食品科技》 CAS 北大核心 2022年第1期345-354,共10页

该研究针对农(水)产品中氟乐灵农药残留的问题,建立了间接竞争酶联免疫分析方法,快速检测氟乐灵农药。利用3,5-二硝基-4-氯-三氟甲苯与仲胺侧链氨基反应合成半抗原2C,采用碳二亚胺法将半抗原2C与牛血清白蛋白/卵清蛋白偶联合成完全抗原... 该研究针对农(水)产品中氟乐灵农药残留的问题,建立了间接竞争酶联免疫分析方法,快速检测氟乐灵农药。利用3,5-二硝基-4-氯-三氟甲苯与仲胺侧链氨基反应合成半抗原2C,采用碳二亚胺法将半抗原2C与牛血清白蛋白/卵清蛋白偶联合成完全抗原。通过免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体Pc Ab-2C,基于间接竞争酶联免疫分析方法原理对包被原和抗体的稀释倍数、包被温度、抗体和标准品稀释液等7个因素进行系统优化,最终建立间接竞争酶联免疫分析方法。结果表明:该方法的IC_(50)为54.07 ng/mL,最低检测限为7.22 ng/mL,线性范围为12.56~282.62 ng/mL,与20种氟乐灵结构类似物进行交叉反应,只有2种药物的交叉反应率大于15%,方法特异性良好;对大豆、大豆油和鳗鱼等样品进行检测,添加回收率为89.8%~106.4%,变异系数小于10%。采用气相色谱法进行验证,添加回收率为89%~108.2%,变异系数小于10%,两种方法测定结果呈现良好的线性关系(R^(2)=0.99)。该研究所建立的方法具有灵敏度强、特异性强、准确度高等优点,适用于农(水)产品中氟乐灵农药残留的高通量快速检测。 展开更多

关键词 氟乐灵 间接竞争酶联免疫分析方法 快速检测 农产品 水产品

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基于QuEChERS样品前处理的间接竞争酶联免疫分析法快速检测薏苡仁中黄曲霉毒素B_(1) 被引量：1

11

作者 张磊 关凯仪 +1 位作者 黄雨心 王淑美 《广东药科大学学报》 CAS 2023年第6期37-43,共7页

目的解决间接竞争酶联免疫分析法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA)检测薏苡仁中黄曲霉毒素B_(1)(Aflatoxin B_(1),AFB_(1))的基质干扰问题,建立一种简便的高通量检测方法,用于薏苡仁中AFB_(1)的快速... 目的解决间接竞争酶联免疫分析法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA)检测薏苡仁中黄曲霉毒素B_(1)(Aflatoxin B_(1),AFB_(1))的基质干扰问题,建立一种简便的高通量检测方法,用于薏苡仁中AFB_(1)的快速筛查。方法以ic-ELISA的显色值和抑制率为评价指标优化样品前处理过程,重点考察QuEChERS萃取净化技术、不同稀释溶剂和稀释方式消除基质效应的效果,并对建立的方法进行方法学考察,最后应用于薏苡仁实际样品检测,检测结果用液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)进行确证。结果建立了一种无需任何校正,可用溶剂标准曲线进行定量分析的ic-ELISA。方法的半数抑制浓度为0.074 ng/mL,线性范围为1.37~20.0μg/kg,加标回收率在75.12%~84.46%之间,RSD小于6%。122批薏苡仁及其相关样品中AFB_(1)的阳性率为20.5%,阳性样品的超标率为24.0%,污染水平为1.76~27.56μg/kg。ic-ELISA与LC-MS/MS检测结果的相关系数(r)为0.98。结论QuEChERS萃取净化技术能够有效去除薏苡仁中的干扰成分,对快速样品前处理方法的建立具有重要应用价值,结合本研究所建立的ic-ELISA,为薏苡仁中AFB_(1)的检测和监测提供简便有效的技术手段。 展开更多

关键词 QuEChERS技术 间接竞争酶联免疫分析方法 快速检测 薏苡仁 黄曲霉毒素B_(1)

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草甘膦单克隆抗体的制备及酶联免疫分析方法的建立 被引量：1

12

作者 杜斌 岳绪辉 +5 位作者 罗建芝 袁学伟 姚南南 陈海军 杨梅 令狐克勇 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2023年第16期205-212,共8页

目的制备出草甘膦(glyphosate,GLY)单克隆抗体,建立间接竞争酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)快速检测茶叶中GLY的方法。方法首先合成GLY完全抗原(包被原和免疫原),通过免疫小鼠成功制备出GLY单克隆抗体。根据E... 目的制备出草甘膦(glyphosate,GLY)单克隆抗体,建立间接竞争酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)快速检测茶叶中GLY的方法。方法首先合成GLY完全抗原(包被原和免疫原),通过免疫小鼠成功制备出GLY单克隆抗体。根据ELISA的检测流程,采用棋盘法确定最佳包被抗原和抗体的稀释倍数,确定最佳包被的温度和时间,并确定最佳加入一抗、二抗后反应时间,建立检测方法并对其性能进行评价。结果GLY包被抗原和抗体的稀释倍数为1:2000,包被温度为37℃、包被时间为90 min,加入一抗、二抗后反应时间为60 min。该方法的线性方程为Y=-0.2353X+0.6539(r2=0.9871),半抑制浓度(50%inhibiting concentration,IC50)为4.508 ng/mL,检出限为1.18 ng/mL。变异系数均在10%以下,与异菌脲、多菌灵、三唑磷、甲基对硫磷、噻菌灵这5种标准品的交叉反应率均低于0.03%,在茶叶中加标回收率为90.86%~110.35%,且相对标准偏差均小于10%。结论该方法具有较高的灵敏度和特异性,可用于茶叶样本中GLY残留的快速检测。 展开更多

关键词 草甘膦 完全抗原 单克隆抗体 间接竞争酶联免疫分析法

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玉米赤霉烯酮间接竞争ELISA方法的建立 被引量：4

13

作者 唐颂 李岩松 +5 位作者 尚翠玲 胡盼 卢士英 任洪林 柳增善 周玉 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2022年第4期300-304,共5页

本研究以玉米面为例,建立了玉米赤霉烯酮间接竞争ELISA(ic-ELISA)方法。采用棋盘滴定法确定抗原和单抗的最佳工作浓度,并确定了抗原37℃包被1 h、不封闭、酶催化底物作用时间15 min的反应条件进行检测。该方法的检测范围(IC_(20)~IC_(8... 本研究以玉米面为例,建立了玉米赤霉烯酮间接竞争ELISA(ic-ELISA)方法。采用棋盘滴定法确定抗原和单抗的最佳工作浓度,并确定了抗原37℃包被1 h、不封闭、酶催化底物作用时间15 min的反应条件进行检测。该方法的检测范围(IC_(20)~IC_(80))为11~292 pg/mL,检测限(IC_(10))为6 pg/mL。玉米赤霉烯酮在玉米面中的加标回收率为81.29%~105.80%。本研究建立的ic-ELISA方法与赭曲霉素A、黄曲霉素B_(1)、呕吐毒素、伏马毒素B_(1)、T-2毒素无交叉反应,可用于玉米面中玉米赤霉烯酮的初筛检测。 展开更多

关键词 玉米赤霉烯酮 真菌毒素 检测 间接竞争酶联免疫分析(ic-ELISA)

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间接竞争酶联免疫分析法测定葛根中葛根素的含量 被引量：4

14

作者 单文超 冯会宾 +5 位作者 赵琰 曾文浩 贺娜娜 赵妍 孙晔 屈会化 《环球中医药》 CAS 2015年第9期1089-1092,共4页

目的利用间接竞争酶联免疫分析法（indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA）测定葛根中葛根素的含量。方法利用抗葛根素单克隆抗体,通过线性关系、精密度、回收率的考察,建立葛根素的ic-ELISA分析方法。结... 目的利用间接竞争酶联免疫分析法（indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA）测定葛根中葛根素的含量。方法利用抗葛根素单克隆抗体,通过线性关系、精密度、回收率的考察,建立葛根素的ic-ELISA分析方法。结果该方法的线性范围为15.6～500ng/m L,孔间差和板间差均不大于3.5%,平均回收率为101.8%,并且该法检测结果与高效液相色谱法检测结果一致。结论本实验为葛根质量控制以及含葛根药材的中药复方中葛根素的含量测定提供了一种新技术方法。 展开更多

关键词 间接竞争酶联免疫分析法 葛根素 葛根 含量测定

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间接竞争酶联免疫分析法快速检测决明子中黄曲霉毒素B_(1)的研究

15

作者 张磊 林煜伦 《广东化工》 CAS 2023年第21期20-22,29,共4页

目的:建立适用于中药决明子中黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))快速检测的间接竞争酶联免疫分析法(indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA)。方法:首先采用棋盘滴定法优化抗原抗体最佳浓度,建立抑... 目的:建立适用于中药决明子中黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))快速检测的间接竞争酶联免疫分析法(indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA)。方法:首先采用棋盘滴定法优化抗原抗体最佳浓度,建立抑制曲线,然后以显色值和灵敏度为评价指标筛选样品的提取和稀释方法。对所建立的方法进行方法学考察,最后用于实际样品检测。结果:经过优化,确定样品的最佳提取溶剂为乙腈-甲醇溶液(90∶10,v/v),稀释溶液为甲醇-PBS溶液(10∶90,v/v),稀释倍数为20倍。方法的半数抑制浓度为0.078 ng/mL,线性范围为0.016~0.25 ng/mL,回收率为85.00%~109.2%,RSD为0.45%~9.08%。采用所建立的方法对25批决明子进行了检测,经液相色谱-串联质谱法确证,超过限量标准的样品的假阳性率小于5%。结论:本文所建立的ic-ELISA灵敏、简便,适用于决明子中AFB_(1)的快速筛查,但仍存在一定的假阳性率,后续还需要对产生干扰的基质因素进行研究并消除,进一步提高检测的准确度。 展开更多

关键词 黄曲霉毒素B_(1) 间接竞争酶联免疫分析法 样品前处理 决明子 一步稀释法

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呋喃西林代谢物半抗原的制备及其免疫检测中的应用 被引量：3

16

作者 李斌 俞思明 +1 位作者 胡睿 于淑娟 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2018年第3期90-94,100,共6页

本研究为了克服现有SEM半抗原结构不含硝基端基团的不足,将SEM与4-(3-醛基-4-硝基-苯氧基)-丁酸衍生制备半抗原,保留了硝基端基团。然后,将制备的半抗原分别与BSA和OVA偶联制备SEM-BSA免疫原和SEM-OVA包被原。免疫原免疫BALB/C小鼠后,... 本研究为了克服现有SEM半抗原结构不含硝基端基团的不足,将SEM与4-(3-醛基-4-硝基-苯氧基)-丁酸衍生制备半抗原,保留了硝基端基团。然后,将制备的半抗原分别与BSA和OVA偶联制备SEM-BSA免疫原和SEM-OVA包被原。免疫原免疫BALB/C小鼠后,结合细胞融合技术制备单克隆抗体,并利用间接竞争酶联免疫分析法(ci ELISA)评价单克隆抗体的效价及特异性。结果显示,单克隆抗体可特异性识别SEM的2-硝基苯甲醛衍生物(2-NPSEM),效价达1:2560000。应用ci ELISA检测法,在0.05~4.05μg/L呈线性关系,检测限高达0.04μg/L,IC_(50)值为0.23μg/L,与结构类似物NPAMOZ、NPAOZ和NPAHD的交叉反应率分别为0.03%、0.02%和0.26%。本论文提供的SEM半抗原的设计和改造方法,为呋喃西林的代谢物SEM的高效检测提供了新思路和方法。 展开更多

关键词 呋喃西林代谢物 氨基脲 单克隆抗体 间接竞争酶联免疫分析法

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新型抗植物病毒剂毒氟磷的酶联免疫分析方法 被引量：3

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作者 卢平 李艳娇 丁晓燕 《农药》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期802-805,共4页

[目的]以新型抗病毒剂创制品种毒氟磷为研究对象,通过杂交瘤技术建立抗毒氟磷及其类似物的高特异性杂交瘤细胞系,应用体内诱生腹水制备单克隆抗体,开发出检测毒氟磷及其类似物的酶联免疫分析方法。[方法]利用2-甲酰苯氧乙酸、氨基酸合... [目的]以新型抗病毒剂创制品种毒氟磷为研究对象,通过杂交瘤技术建立抗毒氟磷及其类似物的高特异性杂交瘤细胞系,应用体内诱生腹水制备单克隆抗体,开发出检测毒氟磷及其类似物的酶联免疫分析方法。[方法]利用2-甲酰苯氧乙酸、氨基酸合成半抗原,通过碳二亚胺法合成人工抗原,免疫动物并通过杂交瘤技术得到一株杂交瘤细胞株DHS3A2。[结果]在制备的单克隆抗体mAb-DHS3A2的基础上,通过对有机溶剂、pH值、离子强度等因素的筛选比较,优化了毒氟磷间接竞争ic-ELISA,方法的IC50值为(9.62±0.59)μg/L,检出限为(0.3±0.05)μg/L。[结论]该方法快速、准确,适用于不同基质中毒氟磷农药残留快速检测。 展开更多

关键词 毒氟磷 单克隆抗体 间接竞争酶联免疫分析方法

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燕窝唾液酸糖蛋白间接竞争酶联免疫检测方法的建立

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作者 何金麟 王仍瑞 +4 位作者 张世伟 冯荣虎 范群艳 柳训才 徐敦明 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2022年第23期7630-7636,共7页

目的建立间接竞争酶联免疫(indirect competitive enzyme linked immunesorbent assay,IC-ELISA)检测燕窝中唾液酸糖蛋白的分析方法。方法以唾液酸糖蛋白为抗原,制备单克隆抗体,对IC-ELISA步骤中相关参数进行优化,确定最佳反应条件。结... 目的建立间接竞争酶联免疫(indirect competitive enzyme linked immunesorbent assay,IC-ELISA)检测燕窝中唾液酸糖蛋白的分析方法。方法以唾液酸糖蛋白为抗原,制备单克隆抗体,对IC-ELISA步骤中相关参数进行优化,确定最佳反应条件。结果最佳包被抗原为1:2000,抗体稀释倍数为1:5000;封闭液浓度为1%牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA),封闭时间为150 min;竞争时间30 min;酶标二抗浓度稀释倍数为1:1000,孵育时间30 min;显色时间为10 min。建立的IC-ELISA检测方法半抑制浓度(50%inhibition concentration,IC_(50))为8.61μg/mL,线性范围为2.23~33.25μg/mL,回收率为82.7%~92.0%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSDs)为1.7%~8.9%。结论该方法灵敏度较高、特异性强,可以有效地鉴别假冒伪劣燕窝产品,具有较好的实际应用价值。 展开更多

关键词 燕窝 唾液酸糖蛋白 间接竞争酶联免疫分析法

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酶联免疫法检测动物组织及尿液中氟苯尼考与甲砜霉素的残留 被引量：25

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作者 李然 林泽佳 +5 位作者 杨金易 徐振林 王弘 雷红涛 孙远明 沈玉栋 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1321-1328,共8页

针对食品中氟苯尼考及甲砜霉素多残留污染问题,基于新设计的半抗原制备了系列人工抗原,通过免疫动物获得了可同时特异性识别氟苯尼考与甲砜霉素的多克隆抗体,并在抗体-包被原组合的筛选及反应条件优化基础上,建立了动物组织及尿液中氟... 针对食品中氟苯尼考及甲砜霉素多残留污染问题,基于新设计的半抗原制备了系列人工抗原,通过免疫动物获得了可同时特异性识别氟苯尼考与甲砜霉素的多克隆抗体,并在抗体-包被原组合的筛选及反应条件优化基础上,建立了动物组织及尿液中氟苯尼考和甲砜霉素残留同时检测的酶联免疫分析方法。本方法对于氟苯尼考的半数抑制浓度(IC_(50))为1.32 ng/mL,线性检测范围为0.31~5.61 ng/mL,检出限为0.12 ng/mL;对于甲砜霉素的IC_(50)为2.13 ng/mL,线性检测范围为0.41~11.20 ng/mL,检出限为0.15 ng/mL,与氯霉素等多种类似物均无交叉反应,动物组织及尿样中氟苯尼考和甲砜霉素的添加回收率均在77.2%~116.0%之间,相对标准偏差<15%,适用于实际样品中氟苯尼考和甲砜霉素的快速筛查检测。 展开更多

关键词 氟苯尼考 甲砜霉素 抗体 间接竞争酶联免疫吸附分析

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鸡肉中金刚烷胺间接竞争ELISA检测方法的建立 被引量：13

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作者 谭庶 杨金易 +6 位作者 许吉华 沈玉栋 曾道平 苏晓娜 钟翠丽 许小炫 孙远明 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第10期304-310,共7页

建立检测鸡肉中金刚烷胺的间接竞争酶联免疫吸附分析(indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA)法。利用N-(1-金刚烷胺基)肼甲酰胺与乙醛酸合成新式金刚烷胺半抗原,采用活泼酯法将金刚烷胺半抗原分别与血蓝蛋... 建立检测鸡肉中金刚烷胺的间接竞争酶联免疫吸附分析(indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA)法。利用N-(1-金刚烷胺基)肼甲酰胺与乙醛酸合成新式金刚烷胺半抗原,采用活泼酯法将金刚烷胺半抗原分别与血蓝蛋白、牛血清白蛋白偶联合成免疫原和包被原,将所制备的人工抗原免疫BALB/c小鼠,并制备特异性识别金刚烷胺的单克隆抗体。ic-ELISA法经系统优化后,最佳包被原稀释倍数为80000,抗体工作质量浓度为122.50μg/L,对金刚烷胺的IC50为0.69μg/L,检出限为0.21μg/L,在0.07~6.15μg/L之间线性良好,鸡肉样品中添加回收率为101.69%~108.71%,变异系数均低于15%,且实际样品检测结果与高效液相色谱-质谱联用测定结果相关性良好(R2=0.97),表明建立的ic-ELISA具有良好的准确度和可靠性。利用该特异性抗体建立的方法适用于实际鸡肉样品中金刚烷胺的快速检测。 展开更多

关键词 鸡肉 金刚烷胺 间接竞争酶联免疫吸附分析 单克隆抗体

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