目的探讨热休克蛋白70C末端反应蛋白(C-terminus of hsp70-interacting protein,CHIP)过表达对MET以及SCLC细胞株凋亡以及侵袭功能的影响。方法体外培养SCLC细胞株,免疫印迹法检测SCLC细胞系中CHIP,MET的表达关系。用pcDNA3-CHIP(+)和pc...目的探讨热休克蛋白70C末端反应蛋白(C-terminus of hsp70-interacting protein,CHIP)过表达对MET以及SCLC细胞株凋亡以及侵袭功能的影响。方法体外培养SCLC细胞株,免疫印迹法检测SCLC细胞系中CHIP,MET的表达关系。用pcDNA3-CHIP(+)和pcDNA3(-)构建的NCI-H69细胞,检测ERK,FAK,pERK1/2,Akt,pFAK,GFP,Myc和paxillin的表达,评价CHIP和MET蛋白的表达。用GFP标记的CHIP和Myc标记的MET表达载体共转染NCI-H69细胞,免疫沉淀方法检测CHIP与MET的相互作用。最后对CHIP转染的细胞行细胞活力、细胞凋亡和细胞侵袭试验。结果CHIP与MET在SCLC细胞系中的表达呈反比关系。转染pcDNA3-CHIP(+)后的细胞CHIP蛋白表达升高,同时MET蛋白表达降低。CHIP过表达的肿瘤细胞中的paxillin和FAK活化程度降低。CHIP过表达SCLC细胞株的侵袭能力下降,细胞生长活力明显下降,凋亡水平增加。转染阴性对照载体(-)或CHIP表达载体(+)的NCI-H69细胞中CHIP过表达后MET的聚泛素化水平升高。结论CHIP抑制MET依赖性信号,调节MET介导的SCLC运动、凋亡和侵袭。此外,CHIP通过在SCLC细胞系中的过表达,可明显减少细胞侵袭和生长,同时促进细胞凋亡。展开更多
文摘目的探讨热休克蛋白70C末端反应蛋白(C-terminus of hsp70-interacting protein,CHIP)过表达对MET以及SCLC细胞株凋亡以及侵袭功能的影响。方法体外培养SCLC细胞株,免疫印迹法检测SCLC细胞系中CHIP,MET的表达关系。用pcDNA3-CHIP(+)和pcDNA3(-)构建的NCI-H69细胞,检测ERK,FAK,pERK1/2,Akt,pFAK,GFP,Myc和paxillin的表达,评价CHIP和MET蛋白的表达。用GFP标记的CHIP和Myc标记的MET表达载体共转染NCI-H69细胞,免疫沉淀方法检测CHIP与MET的相互作用。最后对CHIP转染的细胞行细胞活力、细胞凋亡和细胞侵袭试验。结果CHIP与MET在SCLC细胞系中的表达呈反比关系。转染pcDNA3-CHIP(+)后的细胞CHIP蛋白表达升高,同时MET蛋白表达降低。CHIP过表达的肿瘤细胞中的paxillin和FAK活化程度降低。CHIP过表达SCLC细胞株的侵袭能力下降,细胞生长活力明显下降,凋亡水平增加。转染阴性对照载体(-)或CHIP表达载体(+)的NCI-H69细胞中CHIP过表达后MET的聚泛素化水平升高。结论CHIP抑制MET依赖性信号,调节MET介导的SCLC运动、凋亡和侵袭。此外,CHIP通过在SCLC细胞系中的过表达,可明显减少细胞侵袭和生长,同时促进细胞凋亡。
