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题名SDH全基因的拼接及原核表达
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作者
涂继方
汪旭珍
徐莉
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机构
浙江中医药大学
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出处
《生物技术》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第2期6-8,共3页
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基金
浙江省医药卫生科学研究基金项目(2006A093)
浙江省自然科学基金项目(243Y206757)
浙江省教育厅科研计划项目(20060727)资助
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文摘
目的:构建闭联异松树脂醇二脂脱氢酶(SDH)全基因片段与原核表达质粒载体,在大肠杆菌中进行表达。方法:将SDH3′端和5′端序列通过PCR方法拼接获得全基因后,然后将其插入到相应的原核表达质粒载体PGEX-6p-1中,形成了重组载体,并使其在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导其表达蛋白,再用SDS-PAGE电泳检测表达结果。结果:成功的将SDH基因片段拼接成全基因,并将其构建入原核表达载体PGEX-6p-1中。测序结果表明载体构建成功,无插入和移码突变。经1.5mmol/LIPTG诱导后获得与预测大小(29.253kDa)完全一致的目的蛋白即闭联异松树脂醇二脂脱氢酶蛋白,并测得在37℃、250r/min的实验条件下的最佳诱导时间为4h。结论:成功获得了重组质粒并在大肠杆菌中较好的诱导表达得到了闭联异松树脂醇二脂脱氢酶的蛋白。
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关键词
原核表达
拼接
原核载体
闭联异松树脂醇二脂脱氢酶
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Keywords
prokaryotic expression,splicing,prokaryotic vector,secoisolariciresinol dehydrogenase
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分类号
Q786
[生物学—分子生物学]
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