阿替普酶对急性脑梗死大鼠血管内皮细胞中Claudin-1和Claudin-5蛋白表达的影响 被引量：11

1

作者 朱云波 李佳佳 +1 位作者 马征 赵亮 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期1137-1141,共5页

目的:探讨阿替普酶对急性脑梗死大鼠溶栓后血管内皮细胞中闭合蛋白1(Claudin-1)和闭合蛋白5(Claudin-5)表达的影响及保护作用机制,为阿替普酶的临床应用提供依据。方法:建立大鼠急性大脑中动脉栓塞模型。54只SD大鼠随机分为假手术组、... 目的:探讨阿替普酶对急性脑梗死大鼠溶栓后血管内皮细胞中闭合蛋白1(Claudin-1)和闭合蛋白5(Claudin-5)表达的影响及保护作用机制,为阿替普酶的临床应用提供依据。方法:建立大鼠急性大脑中动脉栓塞模型。54只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和阿替普酶溶栓组,每组18只。透射电子显微镜下观察大鼠脑内皮细胞超微结构,荧光免疫组织化学法和Western blotting法检测大鼠血管内皮细胞中Claudin-1和Claudin-5蛋白的表达水平。结果:透射电子显微镜检测,模型组大鼠缺血区域脑体积明显增大,内皮细胞肿胀,部分皮质与周围脑组织界限明显,基膜厚薄均匀,紧密连接结构非常松散、出现断裂和消失;阿替普酶溶栓组大鼠脑梗死区域毛细血管内皮细胞肿胀明显减轻,基膜厚薄不均匀改善,脑毛细血管内皮细胞、内皮细胞之间大部分紧密连接结构断裂情况消失,无紧密连接结构消失。荧光免疫组织化学检测,与模型组比较,阿替普酶溶栓组大鼠血管内皮细胞中Claudin-1和Claudin-5蛋白的表达有明显改善。Western blotting检测,与假手术组比较,模型组大鼠血管内皮细胞中Claudin-1和Claudin-5蛋白表达水平明显减少(P<0.01);与模型组比较,不同时间点阿替普酶溶栓组大鼠血管内皮细胞中Claudin-1和Claudin-5蛋白表达水平均升高(P<0.01)。结论:阿替普酶对急性脑梗死大鼠大脑内皮细胞的结构有改善作用,其作用机制可能与阿替普酶能降低大鼠血管内皮细胞中Claudin-1和Claudin-5蛋白表达水平有关。 展开更多

关键词 阿替普酶 急性脑梗死 血管内皮细胞 闭合蛋白1 闭合蛋白5

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晚期糖基化终产物诱导内皮细胞紧密连接改变及其机制 被引量：9

2

作者 李强 郭晓华 +4 位作者 朱艳军 陈波 邓建新 黄绪亮 黄巧冰 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 2006年第6期499-502,共4页

目的探讨晚期糖基化终产物修饰蛋白对内皮细胞紧密连接带状闭合蛋白1的形态学影响,并对其机制作初步研究。方法培养人脐静脉内皮细胞,用免疫荧光染色方法显示带状闭合蛋白1在内皮细胞分布的形态和部位。观察不同浓度和不同时间晚期糖基... 目的探讨晚期糖基化终产物修饰蛋白对内皮细胞紧密连接带状闭合蛋白1的形态学影响,并对其机制作初步研究。方法培养人脐静脉内皮细胞,用免疫荧光染色方法显示带状闭合蛋白1在内皮细胞分布的形态和部位。观察不同浓度和不同时间晚期糖基化终产物修饰蛋白作用下内皮细胞带状闭合蛋白1的形态学变化。研究了细胞外信号调节激酶、p38丝裂原活化蛋白激酶通路抑制剂及相关特异蛋白突变体重组腺病毒转染对晚期糖基化终产物介导的内皮细胞闭合蛋白1形态学变化的影响。结果正常对照组的内皮细胞闭合蛋白1存在于细胞周边呈环状,线条清晰连续,边缘光滑流畅,晚期糖基化终产物以时间和剂量依赖的方式引起内皮细胞紧密连接带状闭合蛋白1结构形态的改变;细胞外信号调节激酶通路抑制剂或p38丝裂原活化蛋白激酶通路抑制剂均可减轻晚期糖基化终产物对闭合蛋白1的影响;转染显性失活的细胞外信号调节激酶上游激酶MEK1和p38丝裂原活化蛋白激酶上游激酶MEK6b的重组腺病毒,均可减轻晚期糖基化终产物对带状闭合蛋白1形态的影响,而转染组成性激活的MEK1和MEK6b的重组腺病毒本身即可引起内皮细胞带状闭合蛋白1形态的变化。结论晚期糖基化终产物刺激可以引起内皮细胞紧密连接蛋白带状闭合蛋白1分布和形态的变化,这一作用可能是由细胞外信号调节激酶及p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路介导的。 展开更多

关键词 病理学与病理生理学 晚期糖基化终产物致细胞紧密连接结构改变 免疫荧光染色 带状闭合蛋白1 血管通透性 细胞外信号调节激酶 丝裂原活化蛋白激酶

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缺氧诱导因子1α对大鼠血管内皮细胞通透性的调控作用及相关机制 被引量：3

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作者 胡德林 余又新 +8 位作者 梁荣 周舜英 段声梁 蒋智永 孟承颖 蒋薇 王欢 孙业祥 方林森 《中华烧伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期209-217,共9页

目的探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)对大鼠血管内皮细胞通透性的调控作用及相关机制。方法取12只雄性SD大鼠,35~38d龄,分离主动脉培养血管内皮细胞,4d后观察细胞形态,并取第2或3代细胞进行以下实验。(1)取大鼠血管内皮细胞,采用随机数字... 目的探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)对大鼠血管内皮细胞通透性的调控作用及相关机制。方法取12只雄性SD大鼠,35~38d龄,分离主动脉培养血管内皮细胞,4d后观察细胞形态,并取第2或3代细胞进行以下实验。(1)取大鼠血管内皮细胞,采用随机数字表法(分组方法下同)分为空白对照组、阴性对照组、HIF-1α干扰序列1组、HIF-1α干扰序列2组和HIF-1α干扰序列3组,每组3孔。阴性对照组和HIF-1α干扰序列1组、HIF-1α干扰序列2组和HIF-1α干扰序列3组细胞经脂质体2000分别转染GV248空质粒和含HIF-1α干扰序列1、干扰序列2、干扰序列3的GV248重组质粒,空白对照组细胞仅加入脂质体2000。转染24h后,采用实时荧光定量反转录PCR法和蛋白质印迹法(检测方法下同)分别检测各组细胞HIF-1α的mRNA和蛋白的表达,选取干扰效率最高的序列。(2)另取大鼠血管内皮细胞,分为空白对照组、阴性对照组和HIF-1α低表达组,每组3孔。空白对照组细胞仅加入脂质体2000,阴性对照组和HIF-1α低表达组细胞经脂质体2000分别转染GV248空质粒及实验(1)中筛选的低表达HIF-1α重组质粒。培养14d,检测各组细胞HIF-1α的mRNA和蛋白表达水平。(3)另取大鼠血管内皮细胞,分为空白对照组、阴性对照组、HIF-1α高表达组,每组3孔。空白对照组细胞仅加入脂质体2000,阴性对照组、HIF-1α高表达组细胞经脂质体2000分别转染GV230空质粒和HIF-1α高表达重组质粒。培养14d,检测各组细胞HIF-1α的mRNA和蛋白表达水平。(4)取实验(1)中3组、实验(2)中3组细胞,检测肌球蛋白轻链激酶(MLCK)、磷酸化肌球蛋白轻链(p-MLC)和带状闭合蛋白1(ZO-1)的mRNA和蛋白表达水平。对数据行单因素方差分析、t检验。结果培养4d,细胞呈梭形,成功培养出大鼠血管内皮细胞。(1)HIF-1α干扰序列1组、HIF-1α干扰序列2组和HIF-1α干扰序列3组细胞HIF-1α的干扰效率分别为47.66%、45.79%、62. 展开更多

关键词 缺氧诱导因子 α亚基 血管 通透性 内皮细胞 肌球蛋白轻链激酶 磷酸化肌球蛋白轻链 带状闭合蛋白1

原文传递

缺氧人肠上皮细胞Slingshot蛋白表达变化及其与屏障功能的关系 被引量：1

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作者 张健 王裴 +1 位作者 何雯 王凤君 《中华烧伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期249-253,共5页

目的研究缺氧对人肠上皮细胞Slingshot蛋白表达的影响及其与屏障功能变化的关系。方法建立人肠上皮细胞株Caco-2单层细胞培养模型。取细胞按照随机数字表法分为6部分，分别行缺氧处理0h（即刻）及1、2、6、12、24h，采用生物电阻测定仪... 目的研究缺氧对人肠上皮细胞Slingshot蛋白表达的影响及其与屏障功能变化的关系。方法建立人肠上皮细胞株Caco-2单层细胞培养模型。取细胞按照随机数字表法分为6部分，分别行缺氧处理0h（即刻）及1、2、6、12、24h，采用生物电阻测定仪测定细胞的跨上皮电阻（TER）。另取细胞同前行缺氧处理，采用蛋白质印迹法检测带状闭合蛋白1（ZO-1）、咬合蛋白、闭合蛋白1及Slingshot-1、Slingshot-2、Slingshot-3的蛋白表达。另取细胞同前行缺氧处理，采用荧光法检测纤维状肌动蛋白及球状肌动蛋白含量。3项检测中，各时相点样本数分别为10、10、18。对数据行单因素方差分析、Dunnett检验。结果（1）与缺氧0h比较，缺氧1—24h细胞的TER值均明显降低（P值均小于0．01）。（2）与缺氧0h（均为1．00）比较，缺氧1～24h细胞的ZO-1、咬合蛋白及闭合蛋白1表达量普遍降低，于缺氧12h或24h达到最低值（分别为0．69±0．20、0．47±0．15、0．474-0．22，P〈0．05或P〈0．01）。与缺氧0h比较，缺氧1～24h细胞的Slingshot-1、Slingshot-3蛋白表达量无明显变化（P值均大于0．05）；缺氧1～24h，细胞的Slingshot-2蛋白表达量呈先降低后上升的趋势，其中缺氧24h（1．544-0．57）明显高于缺氧0h（1．00，P〈0．05）。（3）与缺氧0h比较，缺氧1、6、12、24h细胞的纤维状肌动蛋白含量明显减少，缺氧6～24h细胞的球状肌动蛋白含量明显增加，P〈0．05或P〈0．01；其余时相点2项指标无明显变化（P值均大于0．05）。结论缺氧通过诱导人肠上皮细胞Slingshot-2表达，引起丝切蛋白去磷酸化而活化以及纤维状肌动蛋白解聚，从而影响细胞间紧密连接，导致细胞屏障功能受损。 展开更多

关键词 缺氧 肌动蛋白类 肠上皮细胞 Slingshot 带状闭合蛋白1 咬合蛋白 闭合蛋白1

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缺氧条件下人肠上皮细胞丝切蛋白活化及其与带状闭合蛋白1分布的关系 被引量：2

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作者 何雯 王裴 +1 位作者 张健 王凤君 《中华烧伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期116-121,共6页

目的研究缺氧对肠上皮细胞丝切蛋白活化的影响及丝切蛋白活化与紧密连接蛋白带状闭合蛋白（ZO－1）分布变化的关系。方法建立人肠上皮细胞株Caeo－2单层细胞培养模型，取部分细胞按照随机数字表法分为对照组（不处理）、缺氧组（置于缺... 目的研究缺氧对肠上皮细胞丝切蛋白活化的影响及丝切蛋白活化与紧密连接蛋白带状闭合蛋白（ZO－1）分布变化的关系。方法建立人肠上皮细胞株Caeo－2单层细胞培养模型，取部分细胞按照随机数字表法分为对照组（不处理）、缺氧组（置于缺氧环境下）和常氧组（置于常氧环境下），取对照组细胞（样小数为9）及其他2组培养1、2、6、12、24h的细胞（各时相点样本数均为9）采用蛋白质印迹法检测丝切蛋白及磷酸化丝切蛋白的表达。另取细胞，按照随机数字表法分为缺氧组和对照组（处理同前），取对照组细胞和缺氧组缺氧1、2、6、12、24h的细胞采用激光扫描共聚焦显微镜观察纤维状肌动蛋白的形态与分布，荧光法检测纤维状肌动蛋白与球状肌动蛋白含量的比值，激光扫描共聚焦显微镜观察细胞形态及ZO－1的分布；该3个实验中对照组样本数依次为3、6、3，缺氧组各时相点样本数依次为3、6、3。对数据行重复测量方差分析、配对t检验、LSD-t检验。结果与对照组比较，常氧组细胞培养1～24h丝切蛋白发磷酸化丝切蛋白表达量均无明显变化（t值分别为－0．385～1．701、0．040～1．538，P值均大于0．05）。与对照组比较，缺氧纰细胞培养1～24h丝切蛋白表达量也无明显变化（t值为1．032～2．390，P值均大于0．05）；但磷酸化丝切蛋白表达量均明显降低（t值为4．563～22．678，P值均小于0．01），其中培养24h降至最低值。常氧组、缺氧组细胞各时相点丝切蛋白表达量相近（t值为－0．904～1．433，P值均大于0．05）；缺氧组细胞培养l、2、6、12、24h时磷酸化丝切蛋白表达量分别为0．87±0．08、0．78±0．05、0．89±0．07、0．68±0．07、0．57±0．06，均低于常氧绀（0．90±0．07、0．97±0．06、1．00±0．06、1．00±0．05、0．99±0．05，t值为3．193～16．434，P值均小� 展开更多

关键词 缺氧 肌动蛋白类 肠上皮细胞 丝切蛋白 带状闭合蛋白1

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小窝蛋白-1对N-甲基-D天冬氨酸诱导的脑微血管内皮细胞紧密连接蛋白带状闭合蛋白1的破坏作用研究 被引量：2

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作者 毛凤萍 黄芳 +3 位作者 农伟东 劳大媛 龚卓伟 黄文 《广西医科大学学报》 CAS 2022年第1期1-6,共6页

目的:探索小窝蛋白(Cav)-1对N-甲基-D天冬氨酸(NMDA)诱导的脑微血管内皮细胞紧密连接蛋白带状闭合蛋白1(ZO-1)和血脑屏障完整性的破坏作用。方法:体外培养人脑微血管内皮细胞HBEC-5i并构建血脑屏障模型。以不同浓度的NMDA孵育HBEC-5i,... 目的:探索小窝蛋白(Cav)-1对N-甲基-D天冬氨酸(NMDA)诱导的脑微血管内皮细胞紧密连接蛋白带状闭合蛋白1(ZO-1)和血脑屏障完整性的破坏作用。方法:体外培养人脑微血管内皮细胞HBEC-5i并构建血脑屏障模型。以不同浓度的NMDA孵育HBEC-5i,并观察其对细胞活力的影响。细胞分别用NMDA受体(NMDAR)拮抗剂MK-801或Cav-1抑制剂Daidzein预处理后再用NMDA孵育。蛋白免疫印记(western blotting)法检测ZO-1、Cav-1及p-Cav-1蛋白的表达;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测ZO-1 mRNA的表达;跨膜细胞电阻仪Millicell ERS Volt-Ohm meter测量血脑屏障模型跨内皮细胞膜电阻(TEER)值。结果:与对照组比较,NMDA组p-Cav-1蛋白表达升高(P<0.05),ZO-1蛋白和mRNA表达下降(P<0.01),同时TEER值下降(P<0.001)。与NMDA组比较,使用MK801拮抗NMDAR活化后ZO-1蛋白和mRNA水平上调(P<0.05),TEER值增加(P<0.001);用Daidzein抑制Cav-1活化可下调p-Cav-1蛋白表达(P<0.05),上调ZO-1蛋白和mRNA表达(P<0.05)以及增加TEER(P<0.001)。结论:NMDA可诱导HBEC-5i中紧密连接蛋白ZO-1的破坏,从而增加紧密连接屏障的通透性。抑制Cav-1的活化可阻断NMDA诱导的ZO-1表达下降和减少TEER。 展开更多

关键词 人脑微血管内皮细胞 N-甲基-D天冬氨酸 带状闭合蛋白1 小窝蛋白-1

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清化肠饮对结肠炎相关结直肠癌小鼠及其肠道屏障功能的影响

7

作者 危水香 张歆 +4 位作者 王晗 曾玲静 黄凯伦 游玲娜 吴异兰 《湖南中医药大学学报》 CAS 2024年第1期16-21,共6页

目的观察清化肠饮对结肠炎相关结直肠癌(colitis-associated colorectal cancer,CAC)小鼠及其肠道屏障功能的影响。方法将40只C57BL/6小鼠随机均分为空白组、模型组、清化肠饮组、阳性对照组。除空白组外,其余组均用氧化偶氮甲烷(azoxym... 目的观察清化肠饮对结肠炎相关结直肠癌(colitis-associated colorectal cancer,CAC)小鼠及其肠道屏障功能的影响。方法将40只C57BL/6小鼠随机均分为空白组、模型组、清化肠饮组、阳性对照组。除空白组外,其余组均用氧化偶氮甲烷(azoxymethane,AOM)/葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium salt,DSS)联合诱导建立CAC小鼠模型,清化肠饮组给予清化肠饮灌胃剂量为1.8 g/(kg·d);阳性对照组给予柳氮磺吡啶混悬液0.45 g/(kg·d);空白组给予等量无菌生理盐水灌胃。均干预8周。观察并记录小鼠一般情况、体质量、疾病活动指数(disease activity index,DAI)及肿瘤长度;采用HE染色法观察小鼠结直肠组织病理变化;采用Western blot法检测小鼠结直肠组织中闭合蛋白-1(Claudin-1)、咬合蛋白(Occludin)、带状闭合蛋白-1(ZO-1)蛋白表达水平。结果模型组出现便血、脱肛等情况。与空白组相比,模型组、清化肠饮组、阳性对照组小鼠DAI评分明显升高(P<0.05或P<0.01)。与空白组相比,模型组、清化肠饮组、阳性对照组小鼠结直肠长度均缩短(P<0.01或P<0.05);与模型组比较,清化肠饮组与阳性对照组结直肠长度增长(P<0.01)。HE病理结果显示,模型组腺体高级别管状腺瘤形成,清化肠饮组存在低级别腺瘤和高级别瘤变。与空白组相比,模型组小鼠结直肠肿瘤组织中Claudin-1蛋白表达升高(P<0.01),Occludin、ZO-1蛋白表达水平降低(P<0.01);与模型组相比,清化肠饮组、阳性对照组Claudin-1蛋白表达水平降低(P<0.01),清化肠饮组、阳性对照组Occludin、ZO-1蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01)。与清化肠饮组相比,阳性对照组Claudin-1蛋白表达水平降低(P<0.01),Occludin、ZO-1蛋白表达水平升高(P<0.01)。结论清化肠饮可抑制CAC,其机制可能与改善肠道炎症反应、调节肠道屏障功能相关。 展开更多

关键词 清化肠饮 结肠炎相关结直肠癌 肠道屏障 闭合蛋白-1 咬合蛋白 带状闭合蛋白-1

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肠复方对葡聚糖硫酸钠诱导的急性溃疡性结肠炎小鼠的干预作用

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作者 张荣棋 冯淬灵 +1 位作者 戴中 张银丽 《现代中西医结合杂志》 CAS 2024年第6期750-756,共7页

目的观察肠复方对葡聚糖硫酸钠诱导的急性溃疡性结肠炎(UC)小鼠症状、结肠组织炎症程度的影响。方法将40只雄性C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、肠复方组和美沙拉秦组,每组10只。除空白组外,其余各组均自由饮用3%葡聚糖硫酸钠7 d建... 目的观察肠复方对葡聚糖硫酸钠诱导的急性溃疡性结肠炎(UC)小鼠症状、结肠组织炎症程度的影响。方法将40只雄性C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、肠复方组和美沙拉秦组,每组10只。除空白组外,其余各组均自由饮用3%葡聚糖硫酸钠7 d建立急性UC模型。实验第8天开始,肠复方组给予0.85 g/mL的肠复方颗粒溶液灌胃,美沙拉秦组给予0.08 g/mL的美沙拉秦缓释颗粒混悬液灌胃,空白组及模型组给予等体积蒸馏水灌胃,均1次/d,连续7 d。实验过程中每天记录小鼠一般情况并计算疾病活动指数(DAI)。实验第15天取材,测量结肠长度,苏木精-伊红染色法观察结肠组织病理形态并评分,ELISA法检测结肠组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)水平,Western blot法检测结肠组织中闭合小环蛋白-1(ZO-1)、闭合蛋白-1(Claudin-1)表达情况。结果与空白组比较,模型组小鼠结肠长度明显缩短(P<0.05),DAI、结肠组织病理评分及结肠组织中TNF-α、IL-6水平均明显升高(P均<0.05),结肠组织中IL-4、IL-10水平均明显降低(P均<0.05),结肠组织中ZO-1、Claudin-1蛋白相对表达量均无明显变化(P均>0.05)。肠复方组与美沙拉秦组小鼠结肠长度均明显长于模型组(P均<0.05),DAI、结肠组织病理评分及结肠组织中TNF-α、IL-6水平均明显低于模型组(P均<0.05),结肠组织中IL-4、IL-10水平及结肠组织中ZO-1、Claudin-1蛋白相对表达量与模型组比较差异均无统计学意义(P均>0.05),且肠复方组与美沙拉秦组各指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论肠复方可调节由葡聚糖硫酸钠诱导的急性UC小鼠的肠黏膜炎症因子水平,改善小鼠症状及减轻结肠组织炎症,其作用与美沙拉秦缓释颗粒等效。 展开更多

关键词 肠复方 溃疡性结肠炎 炎症因子 闭合小环蛋白-1 闭合蛋白-1

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小牛血清去蛋白对脑缺血-再灌注损伤模型大鼠血脑屏障的保护作用研究 被引量：1

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作者 邓超 郑永强 徐悦 《中国药业》 CAS 2019年第8期11-14,共4页

目的探讨小牛血清去蛋白对脑缺血-再灌注损伤模型大鼠血脑屏障(BBB)的保护作用。方法将100只SD大鼠随机分为假手术组(A组,等体积0. 9%氯化钠溶液)、模型组(B组,等体积0. 9%氯化钠溶液)及小牛血清去蛋白低剂量组(C_1组,7. 5 mg/kg,按肽量... 目的探讨小牛血清去蛋白对脑缺血-再灌注损伤模型大鼠血脑屏障(BBB)的保护作用。方法将100只SD大鼠随机分为假手术组(A组,等体积0. 9%氯化钠溶液)、模型组(B组,等体积0. 9%氯化钠溶液)及小牛血清去蛋白低剂量组(C_1组,7. 5 mg/kg,按肽量计,下同)和高剂量组(C_2组,37. 5 mg/kg),灌胃给药,每天1次,连续10 d。以栓线法建立脑缺血-再灌注损伤模型。在脑缺血-再灌注24 h时测定大鼠缺血区脑组织伊文斯蓝(EB)含量,采用免疫组化法检测大鼠BBB带状闭合蛋白-1(ZO-1)表达水平,以光镜、电镜观察大鼠BBB超微结构,以硝酸镧示踪电镜观察大鼠脑缺血-再灌注48 h时BBB的通透性。结果与A组比较,B组大鼠缺血区脑组织EB含量显著增加,ZO-1阳性血管数显著减少(P <0. 05);大鼠脑间质及神经纤维肿胀,内皮细胞皱缩。再灌注0. 5 h时,内皮细胞间紧密连接处(TJ)可见镧颗粒; 2～6 h时,内皮细胞空泡变多,足突和基底膜分离; 12～24 h时,神经细胞出现变性、坏死、核溶解,基底膜变得不连续; 48 h时,神经细胞坏死数量明显增多,内皮细胞的完整性也逐渐受到破坏。与B组比较,C_1组和C_2组大鼠脑组织EB含量显著减少,C_2组ZO-1阳性血管数显著增加(P <0. 05); C_1组和C_2组大鼠BBB受损程度有所减轻。结论小牛血清去蛋白对脑缺血-再灌注损伤模型大鼠BBB有保护作用,其机制可能与稳定缺血区脑细胞和增强ZO-1表达有关。 展开更多

关键词 脑缺血-再灌注 小牛血清去蛋白 带状闭合蛋白-1 血脑屏障 伊文斯蓝 大鼠

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基于中性粒细胞胞外诱捕网探究丹参酮ⅡA对脓毒症小鼠肠损伤的影响及机制 被引量：5

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作者 陈聪敏 张晓慧 +3 位作者 丁新耘 马源 刘澈 马玉清 《中国急救医学》 CAS CSCD 2023年第2期119-125,共7页

目的探究丹参酮ⅡA(TanⅡA)对脓毒症小鼠肠损伤的影响和中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)在其中的作用及可能机制。方法24只健康雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组(Control组)、脂多糖组(LPS组)、LY294002组(LPS+LY组)、丹参酮ⅡA组(LPS+TanⅡA... 目的探究丹参酮ⅡA(TanⅡA)对脓毒症小鼠肠损伤的影响和中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)在其中的作用及可能机制。方法24只健康雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组(Control组)、脂多糖组(LPS组)、LY294002组(LPS+LY组)、丹参酮ⅡA组(LPS+TanⅡA组),每组6只。除Control组注射等量磷酸盐缓冲液(PBS)外,其余各组腹腔注射LPS 10 mg/kg建立脓毒症模型。LPS+LY组于造模前30 min腹腔注射LY29400230 mg/kg,LPS+TanⅡA组于造模前30 min腹腔注射TanⅡA 30 mg/kg,其余两组于上述时间点腹腔注射等量PBS[含1‰二甲基亚砜(DMSO)]。给药12 h后采集标本。苏木精-伊红(HE)染色观察小肠组织病理学变化并进行Chiu′s评分;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清D-乳酸(D-Lac)水平、小肠组织髓过氧化物酶(MPO)-DNA复合物(MPO-DNA)及瓜氨酸化组蛋白H3(CitH3)含量;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测小肠组织闭合蛋白(Claudin)-1、磷酸化(p-)PI3K、磷酸化(p-)Akt蛋白表达。结果与Control组比较,LPS组小鼠小肠组织病理损伤严重;Chiu′s评分升高;血清D-Lac水平上升,小肠组织MPO-DNA、CitH3含量增加Claudin-1蛋白表达减少,p-PI3K、p-Akt蛋白表达增加,差异均有统计学意义(P<0.001)。与LPS组比较,LPS+LY组和LPS+TanⅡA组小鼠小肠组织病理损伤减轻,Chiu′s评分降低(P<0.001),血清D-Lac水平下降(P<0.001),小肠组织MPO-DNA、CitH3含量减少(P<0.001);Claudin-1蛋白表达增加(P<0.05或P<0.001),p-PI3K、p-Akt蛋白表达减少(P<0.01)。结论TanⅡA通过抑制PI3K/Akt信号通路,减少NETs生成,增加Claudin-1蛋白表达,降低肠黏膜通透性,发挥脓毒症小鼠肠损伤的保护作用。 展开更多

关键词 脓毒症 肠损伤 中性粒细胞胞外诱捕网(NETs) 磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶(Akt) 丹参酮ⅡA(TanⅡA) 瓜氨酸化组蛋白H3(CitH3) 闭合蛋白-1(Claudin-1)

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乳香及其炮制品对葡聚糖硫酸钠诱导小鼠炎症性肠病的保护作用 被引量：4

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作者 周宜 刘晓琴 +4 位作者 吴学敏 张浩 王海琴 王红亮 孟祥龙 《现代药物与临床》 CAS 2022年第7期1432-1438,共7页

目的研究乳香及其炮制品对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠炎症性肠病的保护作用。方法采用DSS水溶液代替正常饮水建立炎症性肠病小鼠模型,将实验小鼠分为对照组、模型组、柳氮磺胺吡啶(300 mg/kg)组、生乳香(0.76 g/kg)组、醋乳香(0.76 g/... 目的研究乳香及其炮制品对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠炎症性肠病的保护作用。方法采用DSS水溶液代替正常饮水建立炎症性肠病小鼠模型,将实验小鼠分为对照组、模型组、柳氮磺胺吡啶(300 mg/kg)组、生乳香(0.76 g/kg)组、醋乳香(0.76 g/kg)组、生乳香粪清液(0.2 mL)组、醋乳香粪清液(0.2 mL)组,分别进行给药治疗。观察和监测小鼠体质量、粪便性状、便血情况,进行疾病活动指数(DAI)评分;记录结肠长度;运用苏木精–伊红染色法(HE)观察炎症性肠病小鼠肠道组织的病理变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎症性肠病小鼠血清中白细胞介素(IL)-4、IL-10、IL-6、IL-1β的水平。采用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)测定炎症性肠病小鼠肠道组织中肠黏膜机械屏障蛋白的表达情况。结果生乳香、醋乳香、生乳香粪清液组和醋乳香粪清液组均可改善DSS造成的小鼠体质量下降、粪便性状评分和便血情况,显著降低DAI评分;改善炎症性肠病小鼠肠道组织的病理状态;调节血清中的炎症因子水平;显著升高炎症性肠病小鼠肠道组织中咬合蛋白(occludin)、紧密连接蛋白1(claudin-1)、闭合小环蛋白1(ZO-1)蛋白表达水平。结论乳香及其炮制品可改善炎症性肠病小鼠炎症反应,对肠黏膜屏障具有一定的保护作用,且粪菌移植效果更佳。 展开更多

关键词 乳香及其炮制品 炎症性肠病 粪菌移植 葡聚糖硫酸钠 白细胞介素 咬合蛋白 紧密连接蛋白1 闭合小环蛋白1

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乌司他丁对脓毒症大鼠肺损伤的保护作用及机制研究

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作者 刘瑞瑞 张树柳 +2 位作者 王军芳 田昭涛 崔云亮 《联勤军事医学》 CAS 2023年第10期827-830,共4页

目的探讨乌司他丁对脓毒症大鼠肺损伤的保护作用及其机制。方法按随机数字表法将45只健康成年SD大鼠随机分成乌司他丁组、盲肠结扎穿孔术(cecalligation and puncture,CLP)组和假手术组,每组15只大鼠。乌司他丁组术后即刻皮下注射乌司他... 目的探讨乌司他丁对脓毒症大鼠肺损伤的保护作用及其机制。方法按随机数字表法将45只健康成年SD大鼠随机分成乌司他丁组、盲肠结扎穿孔术(cecalligation and puncture,CLP)组和假手术组,每组15只大鼠。乌司他丁组术后即刻皮下注射乌司他丁(20000 U/kg溶于50 ml/kg生理盐水),CLP组和假手术组术后即刻皮下注射50 ml/kg生理盐水。每组分别于术后6、12、24 h各处死5只大鼠,取淋巴液和完整肺组织待测。采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测量每组大鼠各时间点淋巴液中白细胞介素8(interleukin 8,IL-8)、IL-10、高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)水平;采用伊文思蓝检测术后24 h肺组织通透性变化;Western blot检测术后24 h肺组织钙粘连蛋白和闭合小环蛋白1(zonulaoccludens 1,ZO-1)的表达水平。结果CLP组脓毒症大鼠致伤后各时间点淋巴液中IL-8、HMGB1和MMP-9水平均显著高于假手术组和乌司他丁组(P均<0.05),而IL-10水平显著低于假手术组和乌司他丁组(P均<0.05)。CLP组脓毒症大鼠术后24 h肺组织中伊文思蓝的浓度显著高于假手术组和乌司他丁组(P均<0.05),术后24 h肺脏钙粘连蛋白和ZO-1灰度值显著低于假手术组和乌司他丁组(P均<0.05)。结论乌司他丁对脓毒症大鼠早期肺损伤具有一定的保护作用,其机制可能是通过调节大鼠淋巴液中IL-8、IL-10、HMGB1和MMP-9水平,降低肺组织通透性和提高钙粘连蛋白、ZO-1蛋白的表达水平。 展开更多

关键词 乌司他丁 脓毒症 肺损伤 钙黏连蛋白 闭合小环蛋白1

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人胎盘源间充质干细胞条件培养液可上调缺氧状态下BeWo细胞活力和紧密连接因子的表达 被引量：1

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作者 林清凡 解一新 +2 位作者 陈婉清 叶振忠 陈幼芳 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2021年第31期4970-4975,共6页

背景:近年来间充质干细胞已是新药开发领域的研究热点,其旁分泌效应也已应用于多种组织损伤性细胞模型修复评估实验,但目前尚无研究探索其条件培养液是否对缺氧状态下人胎盘滋养层系细胞的紧密连接功能具有修复作用。目的:探讨人胎盘源... 背景:近年来间充质干细胞已是新药开发领域的研究热点,其旁分泌效应也已应用于多种组织损伤性细胞模型修复评估实验,但目前尚无研究探索其条件培养液是否对缺氧状态下人胎盘滋养层系细胞的紧密连接功能具有修复作用。目的:探讨人胎盘源间充质干细胞条件培养液对缺氧条件下人胎盘绒毛膜癌滋养层系BeWo细胞活力和紧密连接因子表达的影响。方法:采用1000μmol/L氯化钴处理12 h诱导BeWo细胞以构建胎盘屏障缺氧模型,检测细胞活力以及缺氧诱导因子1α和紧密连接因子闭合小环蛋白1、封闭蛋白4、封闭蛋白8的表达量变化;在缺氧模型中添加人胎盘源间充质干细胞条件培养液建立缺氧干预组、复氧修复组,检测细胞活力和上述4个基因的表达量改变;为探讨人胎盘源间充质干细胞条件培养液改变闭合小环蛋白1表达量的潜在机制,建立胰岛素样生长因子1缺氧干预组、胰岛素样生长因子1处理组,检测BeWo细胞活力以及闭合小环蛋白1表达量。结果与结论:①氯化钴诱导缺氧显著下调BeWo细胞活力,上调缺氧诱导因子1αmRNA和蛋白表达,下调闭合小环蛋白1和封闭蛋白4 mRNA和蛋白表达,上调封闭蛋白8 mRNA表达,但其蛋白表达下降;②人胎盘源间充质干细胞条件培养液明显提升缺氧条件下BeWo细胞活力和闭合小环蛋白1的表达,下调缺氧诱导因子1α的表达,但对封闭蛋白4无作用;③胰岛素样生长因子1干预缓解了缺氧对BeWo细胞活力的抑制作用,并上调闭合小环蛋白1的表达。 展开更多

关键词 干细胞 人胎盘源间充质干细胞 条件培养液 氯化钴 缺氧 BEWO细胞 闭合小环蛋白1

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硒化低聚氨基多糖对免疫抑制小鼠免疫器官及肠紧密连接蛋白表达的影响 被引量：5

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作者 汤震 顾丽霞 +4 位作者 相兴伟 闻正顺 曲有乐 郑斌 宋厚辉 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第21期171-176,共6页

本实验旨在研究硒化低聚氨基多糖(low-molecular-mass seleno-aminopolysaccharide,LSA)对免疫抑制小鼠组织形态、回肠闭合小环蛋白-1(zonula occludens-1,ZO-1)及闭锁蛋白(Occludin)表达的影响。通过腹腔注射环磷酰胺构建免疫抑制模型... 本实验旨在研究硒化低聚氨基多糖(low-molecular-mass seleno-aminopolysaccharide,LSA)对免疫抑制小鼠组织形态、回肠闭合小环蛋白-1(zonula occludens-1,ZO-1)及闭锁蛋白(Occludin)表达的影响。通过腹腔注射环磷酰胺构建免疫抑制模型,测定脏器指数,采用苏木精-伊红染色观察脾脏与空肠组织病理形态,利用反转录实时荧光定量聚合酶链式反应分析ZO-1、Occludin mRNA的表达水平。结果表明:LSA处理显著缓解了环磷酰胺对小鼠免疫器官的抑制作用(P<0.05);与环磷酰胺模型组比较,0.6、0.9 mg/(kg mb·d) LSA组小鼠脾脏结构较清晰,红髓和白髓界限较明显,白髓面积增大,空肠绒毛形态与环磷酰胺模型组相比较为整齐;0.6 mg/(kg mb·d)LSA组的ZO-1、Occludin m RNA表达量显著升高(P<0.05)。综上,LSA具有一定的免疫调节功能及肠道保护作用。 展开更多

关键词 硒化低聚氨基多糖 免疫抑制 闭合小环蛋白-1 闭锁蛋白

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病灶区灌注罗格列酮对脑出血家兔血肿周围咬合蛋白和闭合小环蛋白1 mRNA表达水平及血-脑屏障通透性的影响 被引量：5

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作者 任思颖 伍国锋 +3 位作者 杨勤 张艳 李军 孟现林 《中国脑血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期580-584,593,共6页

目的观察病灶区灌注罗格列酮(RSG)对家兔脑出血(ICH)模型血肿周围咬合蛋白和闭合小环蛋白1(ZO-1)mRNA表达水平、血-脑屏障(BBB)通透性及神经功能评分的影响。方法选择健康雄性家兔45只,体质量2.0~2.5 kg,按随机数字表法分为对照组、ICH... 目的观察病灶区灌注罗格列酮(RSG)对家兔脑出血(ICH)模型血肿周围咬合蛋白和闭合小环蛋白1(ZO-1)mRNA表达水平、血-脑屏障(BBB)通透性及神经功能评分的影响。方法选择健康雄性家兔45只,体质量2.0~2.5 kg,按随机数字表法分为对照组、ICH模型组和罗格列酮(RSG)治疗组,每组15只(其中5只用于BBB测定)。对照组模拟制作颅内血肿的过程,穿刺成功后对兔靶点注射等渗盐水0.3 ml,6 h后再次注入等渗盐水0.1 ml;ICH模型组穿刺成功后靶点注射自体非抗凝动脉血0.3 ml,6 h后靶点再次注入等渗盐水0.1 ml;RSG治疗组在ICH模型制作成功后6 h,血肿区灌注RSG 0.5 mg(溶于0.1 ml等渗盐水中)。继续饲养至第7天,对各组家兔进行神经功能缺损评分(Purdy评分)后处死,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测血肿周围脑组织咬合蛋白及ZO-1 mRNA的表达水平;采用甲酰胺方法测量血肿周围脑组织伊文思蓝(EB)含量以评估BBB通透性。结果 (1)神经功能评分:对照组、ICH模型组、RSG治疗组Purdy评分分别为(2.53±0.05)、(8.13±0.06)、(6.67±0.08)分,组间差异有统计学意义(F=459.116,P<0.01);与对照组比较,ICH模型组、RSG治疗组的Purdy评分均明显增加(均P<0.01);与ICH模型组比较,RSG治疗组的Purdy评分降低(P<0.05);(2)咬合蛋白及ZO-1 mRNA表达水平:对照组、ICH模型组、RSG治疗组咬合蛋白及ZO-1 mRNA差异均有统计学意义(每组分别为1.013±0.051、1.001±0.045;0.221±0.017、0.247±0.019;0.498±0.041、0.613±0.045;F值分别为443.924、381.929,均P<0.01),与对照组比较,ICH模型组、RSG治疗组咬合蛋白及ZO-1 mRNA表达均显著减少(均P<0.01);与ICH模型组比较,RSG治疗组咬合蛋白及ZO-1 mRNA的表达增加(均P<0.05);(3)BBB通透性:对照组、ICH模型组、RSG治疗组EB含量分别为(12.0±1.0)、(51.6±0.9)、(36.4±1.0)μg/g,组间差异有统计学意义(F=223.516,P<0.01);与对照组比较,ICH模型组、RSG治疗组的EB含量明显增加(� 展开更多

关键词 脑出血 罗格列酮 咬合蛋白 闭合小环蛋白-1 血-脑屏障 神经功能 兔

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