免疫毒素BDI-1-PEA的构建及其活性测定 被引量：4

1

作者 薛松 温儒民 孙晓青 《徐州医学院学报》 CAS 2001年第5期386-389,共4页

目的　构建新型免疫毒素BDI- 1-PEA ,并进行抗人膀胱肿瘤活性的初步研究测定。方法　应用异型双功能连接剂N -琥珀酰胺酯 3- (2 -吡啶基二硫 )丙酸 (SPDP)将抗人膀胱肿瘤单克隆抗体 (BDI- 1)与铜绿假单胞菌外毒素 (PEA)交联 ,制备出新... 目的　构建新型免疫毒素BDI- 1-PEA ,并进行抗人膀胱肿瘤活性的初步研究测定。方法　应用异型双功能连接剂N -琥珀酰胺酯 3- (2 -吡啶基二硫 )丙酸 (SPDP)将抗人膀胱肿瘤单克隆抗体 (BDI- 1)与铜绿假单胞菌外毒素 (PEA)交联 ,制备出新型免疫毒素BDI- 1-PEA。应用四甲基偶氮唑盐 (MTT)法初步检测其对人膀胱肿瘤细胞系E -J的选择性杀伤活性。结果　BDI- 1-PEA结合物具有高效靶向杀伤膀胱肿瘤细胞的能力 ,优于游离PEA或PEA与BDI- 1的混合物。结论　新型免疫毒素BDI- 1-PEA有较高的选择性抗人膀胱肿瘤细胞的活性 。 展开更多

关键词 免疫毒素 膀胱肿瘤 单克隆抗体 铜绿假单胞菌外毒素

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重组血管内皮受体F3肽-铜绿假单胞菌外毒素A蛋白抑制肿瘤生长的实验研究 被引量：3

2

作者 郭凯 陈泉 +4 位作者 周红姿 陈凯 李纪顺 扈进冬 杨合同 《科学技术与工程》 北大核心 2014年第11期127-130,共4页

检测融合表达的F3肽-铜绿假单胞菌外毒素A(F3-PE39KDEL)在抗肿瘤细胞及活体肿瘤抑制方面的作用效果。用MTT法检测F3-PE39KDEL对肿瘤细胞株的抑制活性。小鼠半致死剂量LD50检测毒理学性质,裸鼠成瘤实验检测F3-PE39KDEL对荷瘤裸鼠中肿瘤... 检测融合表达的F3肽-铜绿假单胞菌外毒素A(F3-PE39KDEL)在抗肿瘤细胞及活体肿瘤抑制方面的作用效果。用MTT法检测F3-PE39KDEL对肿瘤细胞株的抑制活性。小鼠半致死剂量LD50检测毒理学性质,裸鼠成瘤实验检测F3-PE39KDEL对荷瘤裸鼠中肿瘤的生长抑制。结果表明,融合蛋白F3-PE39KDEL能很好抑制肿瘤细胞和人结肠癌的生长,同时具有较低的生物学毒性。说明F3-PE39KDEL具有抑制人结肠癌生长的潜在应用价值。 展开更多

关键词 F3肽 铜绿假单胞菌外毒素A 受体 肿瘤

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铜绿假单胞菌外毒素A在生物制药中应用的研究进展 被引量：3

3

作者 张瑾 王兴勇(综述) 顾江(审校) 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2020年第5期598-602,共5页

铜绿假单胞菌外毒素A(Pseudomonas aeruginosa exotoxin A,PEA)是该菌分泌的外毒素之一,通过催化细胞延伸因子2(elongation factor-2,EF-2)的ADP核糖基化,抑制蛋白合成,从而导致细胞死亡,在铜绿假单胞菌导致的感染性疾病中发挥重要作用... 铜绿假单胞菌外毒素A(Pseudomonas aeruginosa exotoxin A,PEA)是该菌分泌的外毒素之一,通过催化细胞延伸因子2(elongation factor-2,EF-2)的ADP核糖基化,抑制蛋白合成,从而导致细胞死亡,在铜绿假单胞菌导致的感染性疾病中发挥重要作用。PEA强烈的细胞毒性特点使得该毒素成为免疫毒素的重要成分之一,已广泛应用于肿瘤的靶向治疗中。此外,由于PEA可与抗原提呈细胞表面的α2巨球蛋白受体结合,通过胞饮作用进入胞内,辅助抗原的处理和提呈,可作为分子佐剂应用于各种疫苗的研发。本文对PEA在免疫毒素及疫苗佐剂方面应用的研究进展作一综述。 展开更多

关键词 铜绿假单胞菌外毒素A 生物制药 应用

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铜绿假单胞菌外毒素A的抗原性及其与辅助细胞的关系 被引量：1

4

作者 梁小兵 庄汉澜 +2 位作者 周洁 詹轶群 郭庆福 《中华微生物学和免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2000年第5期447-450,共4页

目的　研究铜绿假单胞菌外毒素A(PE)的某些抗原性及其与辅助细胞的关系。方法用MTT法观察PE在有无辅助细胞参与条件下对鼠脾淋巴细胞的刺激作用 ,并用鼠细胞毒性T细胞株CTLL进行证实。结果　PE在 0 0 1～ 10 0ng/ml浓度范围能刺激鼠脾... 目的　研究铜绿假单胞菌外毒素A(PE)的某些抗原性及其与辅助细胞的关系。方法用MTT法观察PE在有无辅助细胞参与条件下对鼠脾淋巴细胞的刺激作用 ,并用鼠细胞毒性T细胞株CTLL进行证实。结果　PE在 0 0 1～ 10 0ng/ml浓度范围能刺激鼠脾淋巴细胞增殖 ,PE的丝裂原作用无需粘附细胞的辅助 ,但粘附细胞及其粘附细胞的PE刺激上清能协同PE对鼠脾淋巴细胞的刺激作用。PE在丝裂原作用范围内能刺激CTLL细胞生长 ,并与IL 2有协同作用。PE在体内能使小鼠脾淋巴细胞自发淋转率增高 ,对ConA刺激的增殖反应增强 ,但对淋巴细胞自发分泌IL 2和ConA诱导IL 2的产生水平无影响。 展开更多

关键词 铜绿假单胞菌外毒素A 抗原 辅助细胞 CTLL细胞株

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靶向EGFR隐蔽表位的免疫毒素的制备及其对肿瘤细胞的特异性杀伤 被引量：2

5

作者 李雅婷 石必枝 +1 位作者 孔娟 李宗海 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期425-431,共7页

目的:制备靶向表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)隐蔽表位(287-302)的免疫毒素,并鉴定其生物学功能。方法:通过基因工程方法将抗EGFR(287-302)的806单链抗体(806 single-chain antibody fragment,806scFv)基因... 目的:制备靶向表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)隐蔽表位(287-302)的免疫毒素,并鉴定其生物学功能。方法:通过基因工程方法将抗EGFR(287-302)的806单链抗体(806 single-chain antibody fragment,806scFv)基因经柔性肽与铜绿假单胞菌外毒素A(Pseudomonas exotoxin A,PEA)的截短形式PE38KDEL连接,构建原核表达载体pET-22b-806scFv-PE38KDEL并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经纯化获得该免疫毒素融合蛋白806scFv-PE38KDEL,ELISA和流式细胞术检测其与EGFR的结合活性,间接免疫荧光检测重组免疫毒素的内化作用,CCK-8法检测806scFv-PE38KDEL对人脑胶质瘤细胞U87MG和U87MG-EGFRvⅢ、表皮癌细胞A431、乳腺癌细胞MDA-MB-468、舌癌细胞CAL-27的细胞毒性。结果:成功构建重组免疫毒素806scFv-PE38KDEL,诱导表达的蛋白806scFv-PE38KDEL以包涵体形式存在,经纯化后的纯度>95%,经SDS-PAGE和Western blotting鉴定为目的蛋白。806scFv-PE38KDEL能EGFRvⅢ胞外段蛋白结合,还能与外源性表达EGFRvⅢ的肿瘤细胞和高表达EGFR的肿瘤细胞相结合,而与表达低水平EGFR的肿瘤细胞不结合。806scFv介导了重组免疫毒素的内化。806scFv-PE38KDEL对靶细胞有明显的杀伤作用,对过表达EGFRvⅢ的U87MG-EGFRvⅢ细胞IC50值为(5.85±0.03)ng/ml,对EGFR高表达细胞MDA-MB-468、A431、CAL-27的IC50值分别为(162.80±0.06)、(75.72±0.04)、(123.70±0.03)ng/ml。在1μg/ml的质量浓度下,相比PBS对照组,806scFv-PE38KDEL对U87MG-EGFRvⅢ、MDA-MB-468、A431和CAL-27细胞增殖的抑制率均显著增高[(98.67±0.07)%vs(2.45±2.85)%、(86.26±1.01)%vs(0.48±1.76)%、(96.72±0.16)%vs(1.33±1.31)%、(96.29±0.30)%vs(2.00±0.60)%,均P<0.01],而对U87MG细胞几乎没有抑制作用[(3.59±2.09)%vs(0.19±0.95),P>0.05]。结论:本研究所制备的靶向EGFR(287-302)表位的重组免疫毒素806scFv-PE38KDEL能特异地结合并杀伤EGFRvⅢ或EGFR高表达的肿瘤细胞。 展开更多

关键词 表皮生长因子受体 隐蔽表位 免疫毒素 单链抗体 铜绿假单胞菌外毒素A 肿瘤

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铜绿假单胞菌外毒素A诱导MLE-12细胞氧化应激损伤并激活自噬 被引量：2

6

作者 王婷婷 康思静 胡天玉 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2015年第10期1148-1151,共4页

目的观察铜绿假单胞菌外毒素A(PEA)对MLE-12细胞的氧化应激损伤及其自噬活动的影响。方法体外培养MLE-12细胞至对数生长期,分别采用PEA 0、200、400、800和1 000ng/mL处理细胞1h和2h,之后进一步采用PEA 1 000ng/mL处理细胞15min、30min... 目的观察铜绿假单胞菌外毒素A(PEA)对MLE-12细胞的氧化应激损伤及其自噬活动的影响。方法体外培养MLE-12细胞至对数生长期,分别采用PEA 0、200、400、800和1 000ng/mL处理细胞1h和2h,之后进一步采用PEA 1 000ng/mL处理细胞15min、30min、1h、2h和3h,应用过氧化氢试剂盒检测H2O2的生成量,Western-blot法检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达,分析LC3II与β-actin之间的比值变化。结果与对照组细胞相比较,随着PEA浓度的增高,细胞的H2O2检出量逐渐增加,PEA处理2h后,各组细胞H2O2检出量分别是对照组的1.73、2.09、3.82和5.06倍(P<0.01)。与此同时,细胞中自噬标记物LC3II的表达量显著增加。此外,高浓度PEA(1 000ng/mL)处理细胞后,随着时间的延长,H2O2检出量明显升高,同时伴随着细胞自噬活动的增强。结论 PEA可以诱导MLE-12细胞产生氧化应激损伤,并激活细胞的自噬活动。 展开更多

关键词 铜绿假单胞菌外毒素A 氧化应激 自噬

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含hTERT启动子、PE38KDEL片段质粒构建及其对人胰腺癌细胞凋亡的影响 被引量：2

7

作者 李宝玉 孙晋津 陈剑秋 《山东医药》 CAS 北大核心 2010年第34期4-6,共3页

目的构建含hTERT启动子和PE38KDEL片段的重组表达质粒,并观察其对人胰腺癌MiaPaCa2细胞凋亡的影响。方法采用PCR法构建含hTERT启动子和PE38KDEL片段的重组表达质粒,并用双酶切法鉴定;将MiaPaCa2细胞分为5组,A组为空白对照组,仅加入含10%... 目的构建含hTERT启动子和PE38KDEL片段的重组表达质粒,并观察其对人胰腺癌MiaPaCa2细胞凋亡的影响。方法采用PCR法构建含hTERT启动子和PE38KDEL片段的重组表达质粒,并用双酶切法鉴定;将MiaPaCa2细胞分为5组,A组为空白对照组,仅加入含10%FBS的DMEM;B、C、D、E组分别转染pIRES2-EGFP、phTERT-IRES2-EGFP、pPE38KDEL-IRES2-EGFP、phTERTp-PE38KEDL-IRES2-EGFP,采用TUNEL法检测MiaPaCa2细胞的凋亡指数。结果重组质粒的PCR产物及酶切后片段的测序结果与GeneBank报道序列一致。A组转染24、48 h时MiaPaCa2细胞凋亡率分别为17.12%±1.66%、24.86%±2.80%,B组分别为18.14%±1.61%、26.47%±2.71%,C组为19.08%±3.84%、27.42%±7.26%,D组为29.46%±2.86%、38.12%±3.19%,E组为72.16%±4.79%、86.40%±7.71%。B^E组与A组比较,P均<0.05;E组与D组比较,P<0.05。结论成功构建了含hTERT启动子和PE38KDEL片段的重组表达质粒,该质粒可促进人胰腺癌MiaPaCa2细胞的凋亡。 展开更多

关键词 胰腺癌 人端粒酶反转录酶 启动子 铜绿假单胞菌外毒素 绿色荧光蛋白 基因疗法

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铜绿假单胞菌外毒素A的调控基因 被引量：1

8

作者 胡晓梅 《国外医学（微生物学分册）》 2001年第3期32-35,共4页

铜绿假单胞菌(绿脓杆菌)外毒素A(PEA)为该菌最主要的致病物质,由toxA基因编码。本文综述PEA的调控基因,包括正调控基因regA、regB、lasR、ptxR、vfr和负调控基因fur、ptxS。regA是影响toxA转录的最主要基因。除lasR外,其余其因均在转录... 铜绿假单胞菌(绿脓杆菌)外毒素A(PEA)为该菌最主要的致病物质,由toxA基因编码。本文综述PEA的调控基因,包括正调控基因regA、regB、lasR、ptxR、vfr和负调控基因fur、ptxS。regA是影响toxA转录的最主要基因。除lasR外,其余其因均在转录水平上通过regA调控PEA的产量。 展开更多

关键词 铜绿假单胞菌外毒素A 调控基因 REGA regB

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血液PEA检测在鉴别PA感染与定植中的作用 被引量：1

9

作者 傅玉琼 周伟 +2 位作者 熊彬 湛晓勤 冉茂娟 《泸州医学院学报》 2014年第1期70-74,共5页

目的：探讨大鼠血液铜绿假单胞菌（pseudomonas aeruginosa，PA）外毒素（paeruginosa exotoxin A，PEA）检测在PA感染与定植鉴别中的价值。方法：8周龄雄性SD大鼠180只，经地塞米松抑制免疫预处理后，随机分为感染组（气管内注入0.4 m... 目的：探讨大鼠血液铜绿假单胞菌（pseudomonas aeruginosa，PA）外毒素（paeruginosa exotoxin A，PEA）检测在PA感染与定植鉴别中的价值。方法：8周龄雄性SD大鼠180只，经地塞米松抑制免疫预处理后，随机分为感染组（气管内注入0.4 ml铜绿假单胞菌混悬液）、定植组（经咽部滴入铜绿假单胞菌混悬液0.2 ml）、对照组（气管内注入0.4 ml生理盐水）。各组按处死时间不同，再分为3 D组、7 D组、11 D组，分别于接种后第3、7、11 d随机抽取各组20只大鼠，心脏采血法处死，无菌取出肺组织并抽取血样。左肺组织匀浆行铜绿假单胞菌培养并计数菌落；右肺组织HE染色，镜下观察肺组织结构；收集血液分别以实时荧光定量PCR法检测PEA DNA及ELISA法检测IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α。结果：定植组、对照组大鼠各时间点肺组织均未见PA菌生长及明显炎症反应，定植组各时间点咽拭子培养见PA菌生长（其菌落计数均＞105 cfu/ml），感染组大鼠肺组织匀浆各时间点均可见PA菌生长（其菌落计数均＞104 cfu/ml）及明显炎症反应，其中以第3 d最为明显，至第7、11天有所下降。各时间点感染组大鼠血液PEA DNA及IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α表达均有升高，与定植组及对照组表达差异均有统计学意义（P＜0.05），各时间点定植组及对照组大鼠血液PEA DNA及IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α表达差异无统计学意义（P〉0.05），其中感染组大鼠血液PEA DNA及IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α表达检测以第3 d最为显著。结论：血液PEA DNA检测对鉴别铜绿假单胞菌感染与定植有一定价值，其表达水平高低与大鼠肺组织PA菌菌落计数及肺组织炎症反应程度正相关，推测PEA DNA可能反映肺部感染程度及其预后。 展开更多

关键词 铜绿假单胞菌外毒素 感染 定植

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铜绿假单胞菌外毒素对淋巴细胞毒性作用 被引量：1

10

作者 邓予晖 李素珍 马艳艳 《医药论坛杂志》 2003年第18期13-14,共2页

目的　探讨铜绿假单胞菌外毒素A(PEA)对人外周血单核细胞 (PBMC)的毒性剂范围及抗PEA血清对PEA的中和作用。 方法 　采集健康成年人的静脉血 ,密度梯度离心分离PBMC。不同浓度的PEA与PBMC37℃、5 %CO2 共同孵育 4 8h ,用台盼蓝染色排除... 目的　探讨铜绿假单胞菌外毒素A(PEA)对人外周血单核细胞 (PBMC)的毒性剂范围及抗PEA血清对PEA的中和作用。 方法 　采集健康成年人的静脉血 ,密度梯度离心分离PBMC。不同浓度的PEA与PBMC37℃、5 %CO2 共同孵育 4 8h ,用台盼蓝染色排除法和四甲基偶氨唑蓝 (MTT)法检测细胞存活率。 结果　台盼蓝染色排除法和MTT法结果一致 ,PEA在 10 0 0ng/ml时PBMC的存活率显著下降 (P <0 0 1) ,PEA剂量在 0～80ng/ml时 ,对细胞存活率无明显影响 (P >0 0 5 )。而抗PEA抗体完全中和PEA的细胞毒作用。 结论　PEA在 10 0 0ng/ml时 ,对PBMC表现出细胞毒作用 ,而抗PEA血清可以中和PEA的毒性作用。 展开更多

关键词 淋巴细胞 毒性作用 人外周血 单核细胞 铜绿假单胞菌外毒素A

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重组VEGF165-PE38融合基因对裸鼠移植性人胶质瘤血管生成的抑制作用 被引量：1

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作者 柯以铨 胡昌辰 +6 位作者 姜晓丹 王育胜 孙新林 薛杉 张发兵 姚鹏飞 蔡颖谦 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1203-1206,共4页

目的研究血管内皮细胞生长因子（VEGF）和铜绿假单胞菌外毒素A（PE）融合基因的真核表达载体对裸鼠移植性人脑恶性胶质瘤血管生成的影响，探索抗肿瘤血管生成的新方法。方法采用裸鼠背部皮下注射U251细胞建立移植性恶性胶质瘤模型，9d... 目的研究血管内皮细胞生长因子（VEGF）和铜绿假单胞菌外毒素A（PE）融合基因的真核表达载体对裸鼠移植性人脑恶性胶质瘤血管生成的影响，探索抗肿瘤血管生成的新方法。方法采用裸鼠背部皮下注射U251细胞建立移植性恶性胶质瘤模型，9d后按随机数字表法将裸鼠分为未治疗组、PBS组、空质粒组、重组质粒组，采用HE染色观察肿瘤组织的形态学变化，免疫组织化学SP法检测胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、CD31、PE的表达，分析肿瘤组织的微血管密度（MVD）。结果注射后第16天重组质粒组裸鼠移植瘤体积明显小于其他3组，差异有统计学意义（P〈0．05）；重组质粒组裸鼠移植瘤MVD低于其他3组，差异均有统计学意义（P〈0．05）；重组质粒组裸鼠肿瘤组织PE呈阳性表达，而在空质粒组、PBS组及未治疗组均为阴性表达。结论VEGF165-PE38融合基因的表达产物对人脑恶性胶质瘤有明显的抑制作用，并能抑制肿瘤新生血管生成，可能为一种有效抗肿瘤血管治疗的新策略。 展开更多

关键词 血管内皮细胞生长因子 铜绿假单胞菌外毒素A 融合基因 基因治疗 抗血管治疗 神经胶质瘤

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铜绿假单胞菌外毒素衍生物PE38KDEL的原核表达载体构建及其鉴定 被引量：1

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作者 张琴 李明远 +3 位作者 张林 蒋忠华 祁志荣 李虹 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期291-294,共4页

目的构建铜绿假单胞菌外毒素衍生物(PE38KDEL)的原核表达载体并对其表达的蛋白进行鉴定。方法采用PCR方法扩增本实验所需要的PE38KDEL基因片段,再通过酶切及连接反应构建原核表达载体pGEX-4T-1-PE38KDEL,重组载体经过限制性内切酶酶切、... 目的构建铜绿假单胞菌外毒素衍生物(PE38KDEL)的原核表达载体并对其表达的蛋白进行鉴定。方法采用PCR方法扩增本实验所需要的PE38KDEL基因片段,再通过酶切及连接反应构建原核表达载体pGEX-4T-1-PE38KDEL,重组载体经过限制性内切酶酶切、PCR扩增鉴定及DNA序列测定证实插入片段正确后,转化感受态大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳后及蛋白免疫印迹法分别测定其大小和特异性。结果经鉴定证实原核表达载体pGEX-4T-1-PE38KDEL构建成功,且在大肠杆菌BL21中获得了PE38KDEL与GST的融合表达,且表达蛋白产物的分子质量大小与预期值一致,并可被PE的特异性抗体所识别。结论PE38KDEL在大肠杆菌中获得了高效的融合表达,为下一步研究其功能奠定了基础。 展开更多

关键词 铜绿假单胞菌外毒素 PE38KDEL 原核表达

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伤寒Vi多糖与不同载体蛋白制备的结合物的特性分析 被引量：1

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作者 吴凯 樊会兰 +6 位作者 赵志宏 周燕美 金栋 白梅 包南艳 陈瑾 李生迪 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第5期456-460,共5页

目的比较以白喉类毒素(diphtheria toxoid,DT)和重组铜绿假单胞菌外毒素A(recombinant Pseudomonas aeruginosa exotoxin A,r EPA)为载体蛋白,分别与伤寒Vi多糖(typhoid Vi polysaccharide,STVi)偶联的结合物的理化特性、抗原性及免疫... 目的比较以白喉类毒素(diphtheria toxoid,DT)和重组铜绿假单胞菌外毒素A(recombinant Pseudomonas aeruginosa exotoxin A,r EPA)为载体蛋白,分别与伤寒Vi多糖(typhoid Vi polysaccharide,STVi)偶联的结合物的理化特性、抗原性及免疫效应。方法分别以DT、r EPA为载体蛋白,以己二酰肼(adipyl dihydrazide,ADH)为连接剂,使Vi多糖与载体蛋白共价偶联制备多糖蛋白结合物STVi-DT和STVi-r EPA,检测其理化特性指标、抗原性,再将其于0、14、28 d免疫NIH小鼠,经眼眶采血,分离血清,采用间接ELISA法检测小鼠血清抗体水平,分析其免疫原性、免疫记忆效应及免疫持久性。结果 STVi-DT、STVi-r EPA理化特性指标相似。STVi-DT针对STVi、DT抗血清均具有明显抗原性,而针对r EPA抗血清无抗原性,STVi-r EPA针对STVi、r EPA抗血清均具有明显抗原性,而针对DT抗血清无抗原性。Vi多糖和Vi多糖蛋白结合物均具有动物免疫原性,STVi蛋白结合物较STVi具有更强的免疫原性,STVi-DT的动物免疫原性试验结果略优于STVi-r EPA;免疫2剂STVi-DT和STVi-r EPA后,小鼠血清GMT明显升高,且STViDT组明显高于STVi-r EPA组(P<0.05),具有较强的免疫记忆效应;免疫STVi-DT和STVi-r EPA后,小鼠血清GMT随免疫剂次增加和时间延长持续升高,直至稳定在一定水平,免疫持久性较好。结论 STVi-DT、STVi-r EPA理化特性相似,均具有显著的免疫原性、免疫记忆效应及免疫持久性,而STVi-DT免疫原性、免疫记忆效应更强。 展开更多

关键词 伤寒Vi多糖 白喉类毒素 铜绿假单胞菌外毒素A 载体蛋白

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重组F3肽-铜绿假单胞菌外毒素A抑制肿瘤生长

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作者 郭凯 王贻莲 +5 位作者 周红姿 陈泉 陈凯 李纪顺 扈进冬 杨合同 《科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期15-21,共7页

为检测重组的F3肽-铜绿假单胞菌外毒素A(F3-PE39KDEL)的抗肿瘤作用,采用MTT法检测F3-PE39KDEL对人乳腺癌细胞MCF-7、人肺癌细胞A549、人卵巢癌细胞SKOV3和人肝癌细胞HepG2的生长抑制活性。采用半数致死剂量法观察F3-PE39KDEL对小鼠的毒... 为检测重组的F3肽-铜绿假单胞菌外毒素A(F3-PE39KDEL)的抗肿瘤作用,采用MTT法检测F3-PE39KDEL对人乳腺癌细胞MCF-7、人肺癌细胞A549、人卵巢癌细胞SKOV3和人肝癌细胞HepG2的生长抑制活性。采用半数致死剂量法观察F3-PE39KDEL对小鼠的毒性反应。以接种人肺癌细胞的裸鼠为模型,观察F3-PE39KDEL的抗肿瘤作用。结果显示,培养72、120 h时,F3-PE39KDEL对于人肺癌细胞A549和人乳腺癌细胞MCF-7具有显著的抑制活性,IC50分别为0.41、0.42μg/mL,4.95、2.53μg/mL。毒性试验结果显示,静脉注射给予F3-PE39KDEL后小鼠的半数致死量为1.1782 mg/kg,动物出现自发运动减少,死亡集中在给药后1 d内,死亡动物及实验结束存活动物剖检未见异常。F3-PE39KDEL对荷瘤裸鼠具有较强的抗肿瘤活性,剂量分别为0.1、0.2、0.4 mg/kg,其抑制率分别达到37.0%、43.2%、53.1%,显示出良好的量效关系。F3-PE39KDEL在靶向治疗肿瘤方面具有较好的应用前景。 展开更多

关键词 F3肽 铜绿假单胞菌外毒素A 受体 肿瘤

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PA感染与定植中细胞因子变化的研究

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作者 傅玉琼 冉茂娟 +2 位作者 周伟 熊彬 湛晓勤 《中国医药指南》 2014年第5期29-30,共2页

目的探讨铜绿假单胞菌外毒素(PEA)在铜绿假单胞菌肺部感染及定植表达差异的临床价值。方法 SD大鼠180只,随机分为PA(铜绿假单胞菌)感染模型组,PA咽部定植组及生理盐水对照组。取肺组织HE染色光镜下观察肺部炎症情况。结果①细菌培养结果... 目的探讨铜绿假单胞菌外毒素(PEA)在铜绿假单胞菌肺部感染及定植表达差异的临床价值。方法 SD大鼠180只,随机分为PA(铜绿假单胞菌)感染模型组,PA咽部定植组及生理盐水对照组。取肺组织HE染色光镜下观察肺部炎症情况。结果①细菌培养结果:模型组在接种后肺组织PA菌落数明显升高;定植组咽拭子培养见大量PA生长;定植组及对照组肺组织未见PA菌生长;②模型组血清IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α表达在接种后第3、7、11天均明显高于定植组及对照组(其差异有统计学意义)。结论血清细胞因子IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α检测有助于对铜绿假单胞菌感染与定植的鉴别诊断。 展开更多

关键词 铜绿假单胞菌外毒素 酶联免疫吸附法

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高效液相色谱串联三重四级杆质谱法检测重组铜绿假单胞菌外毒素A蛋白质原液中氨苄西林残余量

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作者 慕艳红 范锋锋 +6 位作者 马庆华 罗树权 方红春 徐英 魏然 赵志强 朱莉萍 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第8期827-831,共5页

目的建立高效液相色谱串联三重四级杆质谱法检测重组铜绿假单胞菌外毒素A（recombinant Pseudomonas aeruginosa exotoxin A,r EPA）蛋白原液中氨苄西林残余量。方法用乙腈沉淀蛋白质,离心后收集上清,采用高效液相色谱串联三重四级杆质... 目的建立高效液相色谱串联三重四级杆质谱法检测重组铜绿假单胞菌外毒素A（recombinant Pseudomonas aeruginosa exotoxin A,r EPA）蛋白原液中氨苄西林残余量。方法用乙腈沉淀蛋白质,离心后收集上清,采用高效液相色谱串联三重四级杆质谱法上样分析,色谱条件：色谱柱Zorbax SB-C18 Rapid Resolution HT,1.8 Micron2.1 mm×100 mm,流动相30%乙腈,流速0.1 ml/min;质谱检测条件：多重反应监测（multiple reaction monitoring,MRM）,正离子模式,ESI电压3 500 V,碎裂电压110 V,碰撞能10,气体流速8 L/min,母离子的质荷比（mass to charge ratio,m/z）=350.1,定量子离子m/z=105.8,定性子离子m/z=159.9。对建立的方法进行系统适用性、专属性、精密度、稳定性验证,确定该方法的线性范围及最低检出限、定量限,并进行基质效应试验。结果该方法试验参数符合检测要求,对氨苄西林的检测专属性强,当氨苄西林浓度在10~100 ng/ml范围内,r2〉0.999 00,最低检出限为5 ng/ml,最低定量限为10 ng/ml。氨苄西林加标试验的回收率在98%~110%之间,重复性及日间精密度RSD均小于5.5%;冻融稳定性、样品前处理后的稳定性、短期稳定性试验中,样品回收率均在95%~120%之间;以超纯水5倍稀释的r EPA蛋白原液作为溶剂配制的3个不同浓度的氨苄西林对照品溶液的回收率均接近120%,RSD值在3%~5%之间,准确度和精密度良好。结论该方法系统适用性好,灵敏度高,专属性强,准确度和精密度好,检测时间短,是一种易于实现仪器自动化分析的方法。 展开更多

关键词 高效液相色谱法 三重四级杆质谱法 铜绿假单胞菌外毒素A 氨苄西林 残留量

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重组铜绿假单胞菌外毒素A工程菌的高密度发酵与表达

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作者 董勇前 宣俊文 +4 位作者 冯宜扬 丁浩 范锋锋 胡海涛 赵志强 《微生物学免疫学进展》 2011年第1期24-27,共4页

高密度培养表达大肠杆菌生产重组铜绿假单胞菌外毒素A(rEPA)。用上海高机公司的30L自控发酵罐,采用分批补料培养技术,维持葡萄糖的浓度始终处于较低的水平,并分批补加氮源,同时溶氧控制在30%～40%,pH自动调控至7.0,培养至对数中期进行... 高密度培养表达大肠杆菌生产重组铜绿假单胞菌外毒素A(rEPA)。用上海高机公司的30L自控发酵罐,采用分批补料培养技术,维持葡萄糖的浓度始终处于较低的水平,并分批补加氮源,同时溶氧控制在30%～40%,pH自动调控至7.0,培养至对数中期进行诱导。重组菌最终发酵液光密度(A600)未诱导时达到44,诱导时达到36,在上清液中表达的rEPA蛋白的含量占总蛋白的28.1%,在菌体中表达蛋白含量占总蛋白的4.7%。本实验为rE-PA的大规模生产奠定了基础。 展开更多

关键词 铜绿假单胞菌外毒素A 高密度培养 表达

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PA感染与定植中血液PEA变化的研究

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作者 傅玉琼 周伟 +1 位作者 熊彬 湛晓勤 《中国医药指南》 2014年第1期10-11,共2页

目的探讨铜绿假单胞菌外毒素(PEA)在铜绿假单胞菌肺部感染及定植表达差异的临床价值。方法 SD大鼠180只,随机分为PA(铜绿假单胞菌)感染模型组,PA咽部定植组及生理盐水对照组。观察PA感染与定植中血液PEA变化。结果肺组织结构正常,定植... 目的探讨铜绿假单胞菌外毒素(PEA)在铜绿假单胞菌肺部感染及定植表达差异的临床价值。方法 SD大鼠180只,随机分为PA(铜绿假单胞菌)感染模型组,PA咽部定植组及生理盐水对照组。观察PA感染与定植中血液PEA变化。结果肺组织结构正常,定植组与对照组无明显区别,模型组出现了明显肺泡及肺间质水肿、出血、炎性细胞聚集的炎症表现。模型组血液PEA DNA表达在接种后第3、7、11天均明显高于定植组,二者比较存在统计学意义(P均<0.01)。结论血清检测有助于对铜绿假单胞菌感染与定植的鉴别诊断,且可预测肺部炎症的程度及预后。 展开更多

关键词 铜绿假单胞菌外毒素 实时荧光定量PCR 感染 定植

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铜绿假单胞菌外毒素A免疫毒素片段的抗原性评估及三级结构模拟

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作者 冯木林 陶爱林 +3 位作者 邹泽红 刘绮明 伍秋容 赖荷 《中华生物医学工程杂志》 CAS 2008年第4期255-259,共5页

目的克隆铜绿假单胞菌外毒素A（PEA）基因及分析不同克隆序列中不同性质氨基酸对抗原性及三级结构的贡献。方法以铜绿假单胞菌基因组DNA为模板，以PEA编码基因特异区段为引物，采用Touchdown PCR克隆PEA编码基因。阳性克隆经菌落PCR鉴... 目的克隆铜绿假单胞菌外毒素A（PEA）基因及分析不同克隆序列中不同性质氨基酸对抗原性及三级结构的贡献。方法以铜绿假单胞菌基因组DNA为模板，以PEA编码基因特异区段为引物，采用Touchdown PCR克隆PEA编码基因。阳性克隆经菌落PCR鉴定后进行DNA测序及Clustal X（1．83）比对分析；采用生物信息学在线软件BIMAS及SWISS—Model对所得基因编码蛋白进行抗原性评估及三级结构模拟。人为置换关键部位的氨基酸残基，考察不同性质氨基酸对三级结构的影响。结果从铜绿假单胞菌DNA中获得3个克隆。抗原性分析及三级结构模拟结果显示，3个克隆与公开发表的序列之间存在少数氨基酸的差异；个别区段上氨基酸的改变可引起相应位点抗原性的改变，但仅有个别位点的改变对空间结构产生影响。结论基于抗原性评估及三级结构分析，获得了不同性质氨基酸对抗原性及三级结构的贡献等信息，为PEA编码基因用于弱化抗原性靶向性毒素的构建奠定了基础。 展开更多

关键词 铜绿假单胞菌外毒素A 基因克隆 三级结构 抗原性 氨基酸置换 聚合酶链反应

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靶向EGFR免疫毒素BI7D12-PE38KDEL的制备及其体外活性测定 被引量：3

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作者 毛春燕 安钢力 +4 位作者 王祥岭 翟晓晨 孟会敏 游凤涛 杨林(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期558-562,573,共6页

目的:构建基于EGFR纳米抗体的免疫毒素BI7D12-PE38KDEL,并检测其对EGFR肿瘤细胞的细胞毒作用。方法:采用分子克隆技术,将靶向EGFR的纳米抗体7D12以二价的形式,通过柔性连接肽(G4S)4与铜绿假单胞菌外毒素的截断形式PE38KDEL连接,构建原... 目的:构建基于EGFR纳米抗体的免疫毒素BI7D12-PE38KDEL,并检测其对EGFR肿瘤细胞的细胞毒作用。方法:采用分子克隆技术,将靶向EGFR的纳米抗体7D12以二价的形式,通过柔性连接肽(G4S)4与铜绿假单胞菌外毒素的截断形式PE38KDEL连接,构建原核表达载体p ET28a-BI7D12-PE38KDEL。然后将其转化到BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG进行诱导表达。通过镍柱亲和层析法纯化目的蛋白,并经Western blot验证。通过流式细胞技术检测该免疫毒素与EGFR阳性细胞A549、HT29、MCF-7和EGFR阴性细胞CEM、Jurkat的结合能力后,将其按照一定的浓度梯度进行细胞毒实验研究,72 h后,使用WST-1试剂检测BI7D12-PE38KDEL对上述细胞的杀伤效果。结果:通过SDS-PAGE和Western blot实验验证,成功的制备了重组免疫毒素BI7D12-PE38KDEL,该毒素大部分以可溶性的方式表达。BI7D12-PE38KDEL能够与EGFR阳性的A549、HT29、MCF-7肿瘤细胞特异性的结合,并且对上述细胞的细胞毒作用与阴性对照组CEM和Jurkat相比具有极其显著性差异(P<0.01)。结论:成功地构建了基于EGFR纳米抗体的重组免疫毒素BI7D12-PE38KDEL,该免疫毒素能特异性的结合并杀伤EGFR阳性的肿瘤细胞。 展开更多

关键词 表皮生长因子受体 纳米抗体7D12 免疫毒素 铜绿假单胞菌外毒素PE38KDEL

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