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蓖麻耐盐基因RcKUP 7克隆及分子特征分析 被引量:2
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作者 张继星 丛娇娇 +1 位作者 耿学军 刘海臣 《内蒙古民族大学学报(自然科学版)》 2018年第4期311-318,共8页
本试验以蓖麻叶片为材料,克隆K+吸收蛋白基因Rc KUP 7,并对其进行生物信息学分析.结果显示,Rc KUP 7基因开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)为2583 bp,编码860个氨基酸,蛋白分子量为95.149k D,p I值5.15.通过氨基酸组分分析得到含量最... 本试验以蓖麻叶片为材料,克隆K+吸收蛋白基因Rc KUP 7,并对其进行生物信息学分析.结果显示,Rc KUP 7基因开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)为2583 bp,编码860个氨基酸,蛋白分子量为95.149k D,p I值5.15.通过氨基酸组分分析得到含量最高的是亮氨酸(Leu),占该蛋白总摩尔质量的11.74%和分子质量的11.96%;含量最低的氨基酸为色氨酸(Trp),其摩尔质量与分子质量分别占总蛋白的1.16%和1.84%.进行多重序列比对和系统发育树分析可得出与麻枫树、木薯、橡胶树亲缘性较近.通过保守区蛋白分析可以得出该蛋白为钾离子转运蛋白家族的一员.通过亲水疏水性分析,可知该蛋白为疏水性蛋白.跨膜结构分析显示该蛋白具有10个蛋白跨膜结构,是典型的跨膜蛋白,并预测了该蛋白的三级结构. 展开更多
关键词 蓖麻 离子转运蛋白 基因克隆 分子特征分析
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梅毒螺旋体TrkA蛋白的表达、纯化及多克隆抗体制备
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作者 曹二龙 唐愈菲 宁韶辉 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2022年第6期660-664,共5页
目的 分析梅毒螺旋体钾离子转运蛋白TrkA的生物学特性,表达、纯化并制备TrkA蛋白的抗血清。方法 从NCBI中查到梅毒螺旋体钾离子转运蛋白TrkA的氨基酸序列,采用生物信息学方法分析TrkA蛋白的基本理化性质、信号肽、定位、跨膜区、糖基化... 目的 分析梅毒螺旋体钾离子转运蛋白TrkA的生物学特性,表达、纯化并制备TrkA蛋白的抗血清。方法 从NCBI中查到梅毒螺旋体钾离子转运蛋白TrkA的氨基酸序列,采用生物信息学方法分析TrkA蛋白的基本理化性质、信号肽、定位、跨膜区、糖基化位点、磷酸化位点、二级结构、三级结构和B细胞表位。按照梅毒螺旋体TrkA的DNA序列设计引物,PCR扩增TrkA基因,双酶切后与质粒pET28a相连,连接产物pET28a-TrkA转转化入大肠埃希菌BL21,培养后使用IPTG诱导重组TrkA蛋白表达,利用Ni^(2+)亲和层析法纯化TrkA蛋白。取TrkA蛋白皮下接种小鼠,免疫3次,制备小鼠血清,ELISA法检测血清TrkA特异性IgG滴度。结果 生物信息学预测TrkA蛋白共有236个氨基酸,相对分子质量26.7ku,为胞内蛋白。该蛋白二级结构中α螺旋占45.34%,β折叠占20.76%,无规卷曲占27.97%,β转角占5.93%。Phyre2网站预测TrkA蛋白三级结构中85.5%氨基酸处于最合理区。TrKA蛋白含有6个连续B细胞表位和4个非连续表位。成功构建重组质粒pET28a-TrkA并获得高纯度的重组TrkA蛋白。该蛋白免疫小鼠能够诱导产生特异性IgG抗体,血清抗体滴度为1∶25 600。结论 生物信息学分析梅毒螺旋体TrkA为亲水性蛋白,含有B细胞歌表位,纯化的重组TrkA蛋白具有良好的抗原性,能诱导小鼠产生高滴度抗体。 展开更多
关键词 梅毒螺旋体 离子转运蛋白 生物信息学分析 免疫原性
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利用子房滴注法获得转高亲和性钾离子转运蛋白基因(AlHAK1)棉花植株
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作者 刘灵娣 唐宏亮 +8 位作者 董丽君 张书玲 吴立柱 杜环 高佳佳 赵晓雅 刘晗 蒋肖 刘建凤 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2015年第1期9-15,共7页
棉花植株再生困难、基因型依赖性强和转化周期长等因素一直制约着棉花遗传转化的发展。本研究利用1种不依赖组织培养的转化方法,即子房滴注转化方法将獐茅高亲和性钾离子转运蛋白基因(AIHAK1)导入棉花基因组中。结果表明在1006株转... 棉花植株再生困难、基因型依赖性强和转化周期长等因素一直制约着棉花遗传转化的发展。本研究利用1种不依赖组织培养的转化方法,即子房滴注转化方法将獐茅高亲和性钾离子转运蛋白基因(AIHAK1)导入棉花基因组中。结果表明在1006株转化幼苗中有44株为卡那抗性植株,其中35株经PCR检测为阳性(T0代),转化率为3.5%。Southem与Northem杂交结果进一步表明外源基因已整合至棉花基因组中并在转录水平上表达。在提供外源0.05mmol·L-1K+水平下,T1转基因棉花叶片中K+含量约为对照植株的2倍.在根中约为野生型植株的1.5倍;而在2.5mmol·L-1K+的正常水平下,转基因棉花与野生型植株K+含量差异不明显。在50~200mmol·L-1NaC1胁迫条件下,转基因棉花的种子发芽率明显高于野生型植株.尤其是在150mmol·L-1NaC1胁迫条件下,转基因植株种子的发芽率是野生型的2.8倍左右。本研究为子房滴注转化体系在生产实践中的广泛应用提供了理论依据,并为培育适应土壤钾素匮乏及盐渍化环境下生长的棉花新品种提供了新的种质资源。 展开更多
关键词 棉花 子房滴注转化 离子转运蛋白 转基因植株 营养 盐胁迫
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蓖麻耐盐基因HKT的克隆及表达载体构建 被引量:8
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作者 丛娇娇 王晓宇 +3 位作者 李平 李惠根 张丽雪 张继星 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2018年第14期4648-4657,共10页
为挖掘蓖麻耐盐相关基因,以盐生植物蓖麻(Ricinus communis L.)叶片为材料。设计特异性引物,克隆高亲和性钾离子转运蛋白(high-affinity K+transporter,HKT)耐盐基因,并对其序列进行生物信息学分析。结果表明,该基因全长1 596 bp,编码53... 为挖掘蓖麻耐盐相关基因,以盐生植物蓖麻(Ricinus communis L.)叶片为材料。设计特异性引物,克隆高亲和性钾离子转运蛋白(high-affinity K+transporter,HKT)耐盐基因,并对其序列进行生物信息学分析。结果表明,该基因全长1 596 bp,编码531个氨基酸,推测分子量为59.74 kD,等电点(pI)为9.32。多重序列比对和系统发育树分析表明该蛋白与木薯和橡胶树的同源性最高,分别为69.13%和67.03%,且与HKT1蛋白家族成员同源性较高,为S-G-G-G类型蛋白,推测该蛋白为HKT1类蛋白。二级结构预测蓖麻HKT蛋白有9个跨膜结构域,主要定位于内质网上,是典型的跨膜蛋白。根据蓖麻HKT基因序列设计带有Bam HⅠ和PstⅠ酶切位点的引物扩增出全长基因,用限制性内切酶Bam HⅠ和PstⅠ进行双酶切后与表达载体pCHF-3300连接。本研究成功构建了蓖麻HKT基因的表达载体,为进一步研究该基因的转化及功能验证提供参考。 展开更多
关键词 蓖麻 高亲和离子转运蛋白 基因克隆 生物信息学分析 表达载体
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栽培型与野生型辣椒HAK/KUP/KT基因家族的进化分析 被引量:5
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作者 司伟娜 孙毅 李晓玉 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 2018年第4期753-761,共9页
HAK/KUP/KT家族是一类重要的钾转运蛋白家族。利用生物信息学手段对栽培型及墨西哥野生型辣椒全基因组范围内的HAK/KUP/KT基因成员进行鉴定及分析,比较两者在数目、复制类型及组织表达模式等方面的差异。发现2种辣椒中HAK/KUP/KT家族成... HAK/KUP/KT家族是一类重要的钾转运蛋白家族。利用生物信息学手段对栽培型及墨西哥野生型辣椒全基因组范围内的HAK/KUP/KT基因成员进行鉴定及分析,比较两者在数目、复制类型及组织表达模式等方面的差异。发现2种辣椒中HAK/KUP/KT家族成员分别为24和22个,且在染色体上呈不均衡分布。基因复制类型分析发现,HAK/KUP/KT家族成员中存在片段重复和串联重复,且纯化选择是该家族进化的主要动力。组织表达分析显示,辣椒HAK/KUP/KT基因间的表达模式存在差异,暗示辣椒HAK/KUP/KT家族成员在功能上的多样性,并为后续发掘有益的钾转运基因提供了重要的理论依据。 展开更多
关键词 辣椒基因组 HAK/KUP/KT离子转运蛋白家族 进化分析
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三种盐生植物与三种甜土植物HKT1生物信息学比较分析 被引量:4
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作者 郭晓农 柴薇薇 +3 位作者 习思羽 郭鹏辉 柏家林 马忠仁 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第16期5263-5275,共13页
为研究三种盐生植物与三种甜土植物中高亲和性钾离子转运蛋白(HKT1)在结构和功能等方面的差异,本研究运用生物信息学方法预测并分析三种盐生植物与三种甜土植物HKT1的理化特性、氨基酸组成、亲/疏水性、N-糖基化位点、信号肽、跨膜结构... 为研究三种盐生植物与三种甜土植物中高亲和性钾离子转运蛋白(HKT1)在结构和功能等方面的差异,本研究运用生物信息学方法预测并分析三种盐生植物与三种甜土植物HKT1的理化特性、氨基酸组成、亲/疏水性、N-糖基化位点、信号肽、跨膜结构域及其同源进化关系等,对预测及分析数据进行分类对比,总结共性且筛选差异性。结果表明:三种盐生植物和三种甜土植物的HKT1氨基酸组成、亲/疏水性、N-糖基化位点差异不明显,但是信号肽、同源序列分析及多重序列比对分析存在明显的差异,上述差异可为改良和育种耐盐碱性基因工程作物提供一定的理论依据。 展开更多
关键词 盐生植物 甜土植物 高亲和性离子转运蛋白(HKT1) 序列分析
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