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抑郁模型大鼠海马组织中内质网应激调控因子的表达及β-细辛醚的干预作用 被引量：5
1
作者 金铭 蔡珍珍 +9 位作者 韩俊岩 顾福灵 林岩 董海影 宋晓明 帅智峰 何宝国 沈云虹 肖薇 张晓杰 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期124-129,共6页
目的:研究抑郁模型大鼠海马组织中内质网应激调控因子的表达及β-细辛醚的干预作用,并探讨其相关的作用机制。方法:建立慢性轻度不可预见性应激刺激(CUMS)大鼠模型,将100只大鼠随机分为5组,分别为正常组,模型组,氟西汀组(10 mg·kg-... 目的:研究抑郁模型大鼠海马组织中内质网应激调控因子的表达及β-细辛醚的干预作用,并探讨其相关的作用机制。方法:建立慢性轻度不可预见性应激刺激(CUMS)大鼠模型,将100只大鼠随机分为5组,分别为正常组,模型组,氟西汀组(10 mg·kg-1),β-细辛醚低剂量组(25 mg·kg-1)和高剂量组(50 mg·kg-1),每组20只,从造模第8天开始每天灌胃1次给药,连续21 d。于实验的第0天和第29天进行旷场实验;采用Nissl染色法观察各组大鼠海马组织神经元尼氏体的变化;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术检测各组大鼠海马组织蛋白激酶R样内质网激酶(PERK),CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP),钙网蛋白(CRT)mRNA表达情况;蛋白质免疫印迹(Western blot)技术检测各组大鼠海马组织PERK,CHOP,CRT蛋白表达。结果:经28 d慢性不可预见性温和刺激后,模型组大鼠与正常组大鼠比较,水平运动和垂直运动得分明显减少(P<0.05);β-细辛醚低、高剂量组和氟西汀组大鼠与模型组比较,水平运动和垂直运动得分明显增加(P<0.05)。尼氏染色结果显示,模型组大鼠海马组织神经元细胞浆着色变浅,尼氏小体颗粒明显减少;β-细辛醚低、高剂量组大鼠海马区神经元形态相对较好,尼氏小体颗粒较模型组增多。模型组与正常组大鼠比较,PERK,CHOP,CRT mRNA表达上调(P<0.05),与模型组比较,β-细辛醚低、高剂量组和氟西汀组中PERK,CHOP,CRT mRNA表达明显下调(P<0.05)。与正常组比较,模型组大鼠PERK,CHOP,CRT蛋白表达均明显升高(P<0.05);与模型组大鼠比较,氟西汀组、β-细辛醚低、高剂量组PERK,CHOP,CRT蛋白表达明显减少(P<0.05)。结论:β-细辛醚可能是通过调节海马内质网功能发挥抗抑郁作用。 展开更多
关键词 Β-细辛醚 抑郁 内质网应激蛋白激酶R样内质网激酶(PERK) CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP) 钙网蛋白(crt)
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miR-101-3p通过靶向抑制斯坦尼钙调节蛋白1(STC1)促进巨噬细胞对人肝癌细胞的吞噬作用
2
作者 张静 张晓 +1 位作者 张瑞 杨安钢 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期339-344,共6页
目的 探究miR-101-3p能否促进THP-1巨噬细胞对HCCLM3人肝癌细胞的吞噬作用及其机制。方法 通过慢病毒包装、感染和抗性筛选,获得绿色荧光蛋白(GFP)标记并过表达miR-101-3p的HCCLM3人肝癌细胞稳转系(HCCLM3^(GFP)-miR-101-3p),同时使用... 目的 探究miR-101-3p能否促进THP-1巨噬细胞对HCCLM3人肝癌细胞的吞噬作用及其机制。方法 通过慢病毒包装、感染和抗性筛选,获得绿色荧光蛋白(GFP)标记并过表达miR-101-3p的HCCLM3人肝癌细胞稳转系(HCCLM3^(GFP)-miR-101-3p),同时使用佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞贴壁分化为M0型巨噬细胞。将两者共培养24 h后收集细胞,运用荧光激活细胞分选法(FACS)检测巨噬细胞吞噬效率。实时定量PCR检测斯坦尼钙调节蛋白1(STC1)、钙网蛋白(CRT)的mRNA表达水平,免疫荧光染色法检测CRT的表达和分布,Western blot法检测STC1、 CRT的蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验分析miR-101-3p与靶基因的靶向调控关系。结果 过表达miR-101-3p促进THP-1巨噬细胞对HCCLM3肝癌细胞的吞噬作用,miR-101-3p通过靶向STC1进而上调HCCLM3细胞膜表面CRT的表达。结论 miR-101-3p通过靶向抑制STC1进而促进HCCLM3细胞膜表面CRT的表达,增强巨噬细胞对肝癌细胞的吞噬作用。 展开更多
关键词 miR-101-3p 钙网蛋白(crt) 斯坦尼钙调节蛋白1(STC1) 巨噬细胞 吞噬作用
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多柔比星诱导人前列腺癌细胞免疫原性死亡
3
作者 吴红艳 曹春雨 +1 位作者 杨建林 王艳林 《生命科学研究》 CAS CSCD 2015年第5期426-431,共6页
钙网蛋白(calreticulin,CRT)是介导肿瘤细胞发生免疫原性死亡的关键性信号分子,在某些理化因素诱导肿瘤细胞发生凋亡的过程中,内质网上的CRT迅速转位到细胞膜上。作为一种特异的信号分子,凋亡肿瘤细胞膜上的CRT能介导吞噬细胞对凋亡肿... 钙网蛋白(calreticulin,CRT)是介导肿瘤细胞发生免疫原性死亡的关键性信号分子,在某些理化因素诱导肿瘤细胞发生凋亡的过程中,内质网上的CRT迅速转位到细胞膜上。作为一种特异的信号分子,凋亡肿瘤细胞膜上的CRT能介导吞噬细胞对凋亡肿瘤细胞的识别和吞噬。目前有关免疫原性肿瘤细胞死亡的实验数据大多由动物细胞和动物活体实验得到,人肿瘤细胞在发生免疫原性细胞死亡时,是否也具有CRT膜转位这样的分子事件还需要进一步探讨。研究分析了3种临床常用的肿瘤化疗药物(柔红霉素、长春新碱、顺铂)对人前列腺癌PC3细胞CRT亚细胞定位的影响,及其在介导肿瘤细胞免疫原性死亡中的作用。在对比分析的3种临床抗肿瘤药物中,柔红霉素和顺铂可诱导人前列腺癌PC3细胞发生凋亡,但仅柔红霉素处理的PC3细胞膜上CRT的表达量显著增加。膜上高表达CRT的PC3细胞能更有效地被吞噬细胞吞噬。结果表明,柔红霉素作为抗肿瘤药物,能诱导敏感人肿瘤细胞的免疫原性细胞死亡。 展开更多
关键词 钙网蛋白(crt) 多柔比星 免疫原性细胞死亡
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稳定高表达人ERP57基因A549细胞株的建立及其对CRT表达的影响
4
作者 杨建林 韩钰 +1 位作者 王艳林 张伟 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期198-200,共3页
建立稳定高表达人ERP57蛋白的A549细胞株,并观察对CRT表达的影响。采用巢式RT-PCR从人非小细胞肺腺癌A549细胞总RNA中克隆人ERP57 cDNA,构建ERP57真核表达质粒(pcDNA3.1(+)/ERP57)脂质体转染A549细胞。经G418筛选,获得高表达人ERP57蛋白... 建立稳定高表达人ERP57蛋白的A549细胞株,并观察对CRT表达的影响。采用巢式RT-PCR从人非小细胞肺腺癌A549细胞总RNA中克隆人ERP57 cDNA,构建ERP57真核表达质粒(pcDNA3.1(+)/ERP57)脂质体转染A549细胞。经G418筛选,获得高表达人ERP57蛋白的A549细胞株。通过Western blotting检测细胞中ERP57及CRT蛋白表达情况。成功获得稳定高表达ERP57蛋白的人A549细胞株,CRT表达量无明显改变。成功获得稳定高表达ERP57蛋白的人A549细胞株,证实细胞中高表达ERP57对CRT表达量无明显影响。 展开更多
关键词 ERP57 钙网蛋白(crt) 真核表达 A549细胞
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钙网织蛋白重组腺病毒载体构建及体外表达
5
作者 赵丹 刘新莉 马萍 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期2561-2563,共3页
目的构建钙网织蛋白(CRT)基因重组腺病毒载体,并检测其在293LP细胞中的表达。方法根据Genbank中提供的CRT基因序列,设计并合成引物,以人乳腺癌组织cDNA文库为模板采用RT-PCR技术扩增人CRT基因片段,测序后将CRT基因片段定向克隆至pShuttl... 目的构建钙网织蛋白(CRT)基因重组腺病毒载体,并检测其在293LP细胞中的表达。方法根据Genbank中提供的CRT基因序列,设计并合成引物,以人乳腺癌组织cDNA文库为模板采用RT-PCR技术扩增人CRT基因片段,测序后将CRT基因片段定向克隆至pShuttle-CMV重组穿梭载体,进而将穿梭载体克隆至PacⅠ限制性内切酶线性化的腺病毒载体pAdxsi。结果重组穿梭载体pShuttle-CRT经EcoRI/KpnⅠ酶切鉴定连接成功。酶切穿梭载体将CRT片段克隆至腺病毒载体pAdxsi得到Ad-CRT,鉴定证实Ad-CRT载体构建成功。Ad-CRT转染293LP细胞并通过Western印迹法和Real-time PCR法证实其体外表达。结论成功构建CRT重组腺病毒载体Ad-CRT并证实其在293LP细胞中表达。 展开更多
关键词 钙网织蛋白(crt) 腺病毒载体 基因治疗
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糖蛋白折叠质量的监控机制 被引量：1
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作者 王丽影 查锡良 《生命的化学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期289-291,共3页
内质网是一种重要的真核细胞器,糖蛋白的糖基化开始于其中。在内质网中永久性折叠错误糖蛋白或幼稚型糖链糖蛋白,以及突变的糖蛋白被阻止进入高尔基体,而是选择性地被运到胞质,然后在蛋白酶体中被降解。至少两大分子伴侣家族结合蛋白(B... 内质网是一种重要的真核细胞器,糖蛋白的糖基化开始于其中。在内质网中永久性折叠错误糖蛋白或幼稚型糖链糖蛋白,以及突变的糖蛋白被阻止进入高尔基体,而是选择性地被运到胞质,然后在蛋白酶体中被降解。至少两大分子伴侣家族结合蛋白(BiP)和钙联结蛋白(CNX)/钙网蛋白(CRT)参与了糖蛋白折叠的质量控制过程。 展开更多
关键词 糖蛋白 钙联接蛋白/钙网蛋白(CNX/crt)循环 结合蛋白(BiP) 内质网缔合的蛋白质降解(ERAD)
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