期刊文献+
共找到15篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
钙依赖的蛋白激酶与植物抗逆性 被引量:12
1
作者 万丙良 查中萍 戚华雄 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期7-10,共4页
植物钙依赖的蛋白激酶(Calcium-dependent protein kinases,CDPKs)是细胞Ca2+信号的受体,同时具有Ca2+受体蛋白和Ser/Thr蛋白激酶的功能。许多植物CDPKs基因受环境胁迫刺激发生表达水平的改变,这些基因在植物逆境胁迫的Ca2+信号转导中... 植物钙依赖的蛋白激酶(Calcium-dependent protein kinases,CDPKs)是细胞Ca2+信号的受体,同时具有Ca2+受体蛋白和Ser/Thr蛋白激酶的功能。许多植物CDPKs基因受环境胁迫刺激发生表达水平的改变,这些基因在植物逆境胁迫的Ca2+信号转导中起着十分重要的作用,为植物CDPKs抗逆功能的研究和植物的抗逆遗传改良提供了理论基础和基因资源。 展开更多
关键词 依赖蛋白激酶 环境胁迫 Ca2+信号转导 抗逆性
下载PDF
拟南芥CPK10/CPK30双突变体的构建及表型分析 被引量:2
2
作者 谢鑫 孙宁 魏凤菊 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2016年第4期94-99,共6页
CDPKs是植物细胞内一类重要的钙感受器,拟南芥CPK10属于CDPK家族成员。为研究CPK10及与其同源性较高的CPK30是否共同参与逆境响应。首先构建了cpk10×cpk30双突变体,然后进行多种逆境下的生理表现检测,并利用RT-PCR方法分析2个基因... CDPKs是植物细胞内一类重要的钙感受器,拟南芥CPK10属于CDPK家族成员。为研究CPK10及与其同源性较高的CPK30是否共同参与逆境响应。首先构建了cpk10×cpk30双突变体,然后进行多种逆境下的生理表现检测,并利用RT-PCR方法分析2个基因的表达情况。结果显示,模拟干旱、盐、ABA处理拟南芥幼苗后,双突变体与野生型无差异;成苗期双突变体与单突变体对干旱敏感程度类似。转录水平检测到,在干旱胁迫时双突变体中RD29A的表达与野生型及单突变体趋势相反,呈下降趋势;响应ABA的OST1在双突变体中受干旱诱导后0.5 h明显表达上调。成功获得了cpk10×cpk30双突变体,由生理表型和表达分析结果推测CPK10与CPK30可能共同参与了依赖ABA的干旱逆境信号转导过程,且二者之间存在功能冗余。 展开更多
关键词 依赖蛋白激酶 双突变体 逆境胁迫 表型分析
下载PDF
大黄素甲醚对抑郁大鼠海马ERK、cAMP、CaMK的影响 被引量:9
3
作者 童妍 郝安辉 +1 位作者 李坤伦 金钊 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期73-76,共4页
目的:观察大黄素甲醚对大鼠抑郁模型海马ERK、c AMP、Ca MK的影响。方法:将60只SD大鼠随机分成6组:空白组、模型组、百优解组、大黄素甲醚高中低剂量组,采用CUMS大鼠抑郁模型,进行开场实验和糖水消耗实验,用ELISA法测定海马ERK、cA MP、... 目的:观察大黄素甲醚对大鼠抑郁模型海马ERK、c AMP、Ca MK的影响。方法:将60只SD大鼠随机分成6组:空白组、模型组、百优解组、大黄素甲醚高中低剂量组,采用CUMS大鼠抑郁模型,进行开场实验和糖水消耗实验,用ELISA法测定海马ERK、cA MP、CaM K的蛋白含量,对大鼠脑组织病理形态学的观察。结果:与模型组比较,大黄素甲醚200mg/kg能增加模型大鼠爬行格子数、站立次数及糖水消耗量,增加海马ERK、cA MP的蛋白含量,减少CaM K的蛋白含量,改善损伤的脑组织。结论:大黄素甲醚抗抑郁作用可能是通过调节与抑郁症相关的3条信号通路。 展开更多
关键词 大黄素甲醚 细胞外信号调节激酶 环磷腺苷 离子依赖蛋白激酶
原文传递
Arabidopsis calcium-dependent protein kinase CPK28 is potentially involved in the response to osmotic stress 被引量:5
4
作者 Anli Gao Qingyang Wu +2 位作者 Yu Zhang Yuchen Miao Chunpeng Song 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2014年第11期1113-1122,共10页
As calcium sensors, plant calcium-dependent protein kinases(CDPKs) play important roles in plants' responses to various abiotic stresses. Here, we report the functional characterization of CPK28, a member of the C... As calcium sensors, plant calcium-dependent protein kinases(CDPKs) play important roles in plants' responses to various abiotic stresses. Here, we report the functional characterization of CPK28, a member of the CDPK family in Arabidopsis, in response to osmotic stress.The cpk28 mutant, a loss-of-function mutant, exhibited an NaCl- and mannitol-sensitive phenotype in green cotyledons, while CPK28-overexpressing plants displayed stronger tolerance to NaCl and mannitol stresses than wildtype plants. Reverse transcriptase-polymerase chain reaction and beta-glucuronidase staining assays showed that NaCl and mannitol stresses induced CPK28. CPK28-overexpressing lines accumulated significantly more proline relative to wild-type plants and mutant plants under NaCl and mannitol stresses. Transient expression of CPK28-GFP in mesophyll cell protoplasts, as well as stable transgenic lines expressing CPK28-GFP, showed that CPK28 was localized in the plasma membrane. Expression levels of known stress-responsive genes were not significantly altered in the null mutant and overexpression lines,suggesting that CPK28 possibly mediated the stress response via the regulation of target proteins rather than via regulation at the level of transcription. Meanwhile, CPK28could autophosphorylate. Taken together, these data demonstrated that CPK28, a potential positive regulator, is involved in the response to osmotic stress in Arabidopsis. 展开更多
关键词 依赖蛋白激酶 渗透胁迫 拟南芥 聚合酶链反应 CDPK 应激反应 转录水平 非生物胁迫
原文传递
陆地棉钙依赖蛋白激酶GhCDPK28-A10参与抗黄萎病的功能分析 被引量:3
5
作者 邵武奎 赵准 +6 位作者 胡文冉 郝晓燕 高升旗 李建平 陈果 刘晓东 黄全生 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2023年第1期17-28,共12页
【目的】解析GhCDPK28-A10在棉花黄萎病反应中的作用机制,并为棉花抗病育种提供基因资源。【方法】从棉花基因组数据库获得Gh CDPK28-A10基因同源序列,进行生物信息学分析。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative poly... 【目的】解析GhCDPK28-A10在棉花黄萎病反应中的作用机制,并为棉花抗病育种提供基因资源。【方法】从棉花基因组数据库获得Gh CDPK28-A10基因同源序列,进行生物信息学分析。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)方法检测在经大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)、茉莉酸甲酯(methyl jasminate,MeJA)、水杨酸(salicylic acid,SA)或H_(2)O_(2)处理的棉株中GhCDPK28-A10基因的表达量变化。通过病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术验证GhCDPK28-A10在棉花抗黄萎病中的作用。【结果】进化树和基因结构分析表明,陆地棉中GhCDPK28-A10的6个同源蛋白具有相似数量的基序和CDPK家族典型的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶结构域;启动子区域的序列分析发现GhCDPK28-A10包含响应茉莉酸(jasmonic acid,JA)的顺式作用元件。组织特异性表达分析表明GhCDPK28-A10在根、茎和真叶中均表达,且在真叶中表达水平最高。在大丽轮枝菌、MeJA和H_(2)O_(2)胁迫下,GhCDPK28-A10的表达量显著升高。VIGS沉默Gh CDPK28-A10的棉株中抗病相关基因PR1、NPR1、PR4表达增强;JA合成负调控基因JAZ1表达量降低,说明随着CDPK28-A10表达水平的降低,JAZ1对JA合成的抑制作用减弱,活性氧富集,进而增强棉株的黄萎病抗性。【结论】GhCDPK28-A10通过调控防御相关基因的表达,负向调控棉花对黄萎病的抗性反应,是提高棉花黄萎病抗性的候选基因。 展开更多
关键词 棉花 黄萎病 依赖蛋白激酶 抗病基因 病毒诱导基因沉默
下载PDF
棉纤维细胞发育过程中钙离子内流和钙依赖蛋白激酶活性的动态变化 被引量:4
6
作者 肖光辉 梅文倩 朱玉贤 《中国科学:生命科学》 CSCD 北大核心 2013年第10期886-896,共11页
随着大规模棉花纤维细胞发育的表达谱分析以及系统性生理和生化研究,维持纤维细胞快速伸长的机制也逐渐被阐明,超长链脂肪酸和植物激素乙烯在该过程中发挥重要作用.本研究检测到在棉花纤维发育初期细胞外钙离子内流增加.棉花cDNA芯片及Q... 随着大规模棉花纤维细胞发育的表达谱分析以及系统性生理和生化研究,维持纤维细胞快速伸长的机制也逐渐被阐明,超长链脂肪酸和植物激素乙烯在该过程中发挥重要作用.本研究检测到在棉花纤维发育初期细胞外钙离子内流增加.棉花cDNA芯片及QRT-PCR的数据均显示,CPK1,CPK32和CRK5的表达在纤维伸长期显著升高.系统研究发现,随着纤维细胞的伸长,CPK总活性显著增加,在开花后10~15天达到最高,提示CPK类激酶在纤维发育过程中扮演重要角色.体外胚珠培养加入CPK的抑制剂TFP或W-7导致纤维不能伸长.在体外胚珠培养中加入外源的乙烯或者超长链脂肪酸可以刺激钙离子的瞬时内流和CPK的活性.因此推断,乙烯或者超长链脂肪酸通过促进CPK的活性增强钙离子内流,从而调控纤维细胞的发育. 展开更多
关键词 陆地棉 离子 离子依赖蛋白激酶 乙烯 超长链脂肪酸
原文传递
钙依赖性蛋白激酶34在小麦籽粒淀粉合成的功能 被引量:2
7
作者 徐梦军 高天 +2 位作者 王鹏飞 李鸽子 康国章 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期26-33,共8页
钙依赖性蛋白激酶在调控植物发育与物质合成中发挥重要功能。为探讨一个钙依赖性蛋白激酶-TaCPK34在小麦淀粉合成中的功能,利用大麦条纹花叶病介导的基因沉默技术(barley stripe mosaic virus-virus induced gene-silencing,BSMV-VIGS)... 钙依赖性蛋白激酶在调控植物发育与物质合成中发挥重要功能。为探讨一个钙依赖性蛋白激酶-TaCPK34在小麦淀粉合成中的功能,利用大麦条纹花叶病介导的基因沉默技术(barley stripe mosaic virus-virus induced gene-silencing,BSMV-VIGS)将该基因沉默,并在田间条件下测定灌浆期间沉默植株籽粒内TaCPK34基因的表达量及成熟籽粒的淀粉性状。结果表明,在花后15 d、20 d、26 d和30 d,BSMV-VIGS-TaCPK34沉默植株中TaCPK34基因表达量受到显著抑制(63.8%~97.8%); BSMV-VIGS-TaCPK34沉默植株成熟籽粒淀粉含量、千粒重、粒长和粒宽均显著降低(降幅分别为6.0%、7.1%、4.4%和11.0%);扫描电镜观察发现BSMVVIGS-TaCPK34沉默植株成熟籽粒内淀粉粒排列疏松且数量减少。这些研究结果表明TaCPK34在小麦籽粒灌浆期间对籽粒淀粉的合成有重要影响。 展开更多
关键词 小麦 淀粉合成 依赖蛋白激酶 大麦条纹花叶病介导基因沉默
原文传递
基于CRISPR/Cas9技术对刚地弓形虫假定蛋白TGGT1_310420的研究 被引量:2
8
作者 贾永根 闫爱霞 +2 位作者 黄敏君 邹洋 谷俊朝 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期150-154,160,共6页
目的鉴定刚地弓形虫假定蛋白TGGT1_310420在速殖子阶段的功能及其蛋白N端序列的亚细胞定位作用。方法在线设计针对TGGT1_310420的sgRNA,通过定点突变弓形虫CRISPR/Cas9载体pSAG1::CAS9-GFP-U6::sgUPRT上的sgRNA序列获得针对TGGT1_310420... 目的鉴定刚地弓形虫假定蛋白TGGT1_310420在速殖子阶段的功能及其蛋白N端序列的亚细胞定位作用。方法在线设计针对TGGT1_310420的sgRNA,通过定点突变弓形虫CRISPR/Cas9载体pSAG1::CAS9-GFP-U6::sgUPRT上的sgRNA序列获得针对TGGT1_310420的CRISPR/Cas9载体。利用CRISPR/Cas9编辑技术将含有荧光蛋白mCherry和弓形虫次黄嘌呤-黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HXGPRT)的PCR片段m CherryTy_HXGPRT插入至TGGT1_310420内源基因编码N端前20个氨基酸残基之后。通过PCR鉴定片段是否正确插入;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹分析检测融合蛋白的表达情况。间接免疫荧光分析和共聚焦显微镜观察融合蛋白亚细胞定位;空斑实验检测基因缺失株虫体表型的变化。结果 PCR和测序结果显示,成功构建了针对TGGT1_310420的CRISPR/Cas9载体, mCherry-Ty_HXGPRT序列定点插入至靶点位置。蛋白质印迹分析结果显示, mCherry融合蛋白的相对分子质量(Mr)约为36 000;间接免疫荧光实验表明mCherry融合蛋白与弓形虫滑行相关蛋白45 (Tg GAP45)共定位于虫体的表膜。空斑实验检测结果显示, TGGT1_310420的缺失并未引起虫体出现可测的表型变化。结论 TGGT1_310420编码蛋白前20个氨基酸残基序列具有定位到弓形虫表膜的功能, TGGT1_310420在弓形虫速殖子阶段为非必需基因。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 TGGT1_310420 离子依赖蛋白激酶 CRISPR/Cas9
原文传递
EGFP介导的小鼠心肌病模型心脏L-型钙电流的变化
9
作者 徐林 李绪勇 《河南医学研究》 CAS 2012年第1期8-11,共4页
目的:本研究拟探讨绿色荧光蛋白转染是否可导致心脏L-型钙电流发生变化。方法:在小鼠心脏上注射表达增强型GFP(EGFP)的腺病毒,一周后分离心肌细胞,用膜片钳记录ICa的大小及通道动力学过程。结果:转染EGFP可显著增大细胞膜电容。与对照... 目的:本研究拟探讨绿色荧光蛋白转染是否可导致心脏L-型钙电流发生变化。方法:在小鼠心脏上注射表达增强型GFP(EGFP)的腺病毒,一周后分离心肌细胞,用膜片钳记录ICa的大小及通道动力学过程。结果:转染EGFP可显著增大细胞膜电容。与对照组相比,EGFP组ICa的电流密度、激/失活动力学参数没有明显变化,但ICa的失活后恢复时间加快。结论:转染EGFP可导致心肌细胞肥大,但对ICa的大小、激/失活动力学过程不产生影响,其加快ICa失活后恢复的作用可能与CaMKII的磷酸化无关。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白 L-型电流 /调素依赖蛋白激酶2
下载PDF
补肾化痰方药对阿尔茨海默病模型大鼠脑组织钙/钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱ-α活性的影响 被引量:10
10
作者 胡慧 王平 +1 位作者 孔明望 丁凤敏 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期786-788,共3页
目的:观察补肾化痰法对AD模型大鼠CaMKⅡ-α活性的影响并探讨其可能机制。方法:应用脑立体定向技术给大鼠BNM注射凝聚态Aβ25-35+IBO构建AD模型。注射2周后,高、中、低量组分别给大鼠该药水煎液灌胃;西药组用哈伯因混悬液灌胃;正常组、... 目的:观察补肾化痰法对AD模型大鼠CaMKⅡ-α活性的影响并探讨其可能机制。方法:应用脑立体定向技术给大鼠BNM注射凝聚态Aβ25-35+IBO构建AD模型。注射2周后,高、中、低量组分别给大鼠该药水煎液灌胃;西药组用哈伯因混悬液灌胃;正常组、空白组、模型组均给予等容积的生理盐水灌胃。28d后采用原位杂交法检测海马神经元CaMKⅡ-α水平的变化。结果在正常大鼠的脑海马部位少见CaMKⅡ-α免疫阳性表达,正常组与空白组无明显差异(P>0.05),而在模型组可见大量的棕黄色CaMKⅡ-α免疫阳性表达,与正常组相比,具有统计学差异(P<0.01)。西药组与模型组比较无差异(P>0.05),中药中高量组阳性表达较模型组均有所减少(P<0.01)。低量组与模型组无差异(P>0.05),但与西药组有一定差异(P<0.05)。结论:补肾化痰法可以可能通过抑制CaMKⅡ-α的活性,降低Tau蛋白异常磷酸化水平。 展开更多
关键词 补肾化痰法 ALZHEIMER /调素依赖蛋白激酶Ⅱ-α TAU蛋白
原文传递
钙/钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱ-α在Alzheimer病老年斑的表达 被引量:2
11
作者 陈贵海 王月菊 周江宁 《中国神经科学杂志》 CSCD 2004年第6期441-445,共5页
目的  探讨钙 /钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱ (CaMKⅡ ) α在Alzheimer病 (AD)老年斑形成中的作用。方法  选择 10例女性AD患者及 10例年龄、性别等匹配的正常老年人的海马切片 ,进行CaMKⅡ α免疫组织化学和CaMKⅡ α与β 淀粉样蛋白 (A... 目的  探讨钙 /钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱ (CaMKⅡ ) α在Alzheimer病 (AD)老年斑形成中的作用。方法  选择 10例女性AD患者及 10例年龄、性别等匹配的正常老年人的海马切片 ,进行CaMKⅡ α免疫组织化学和CaMKⅡ α与β 淀粉样蛋白 (Aβ)或胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)双标免疫荧光组织化学研究。 结果 CaMKⅡ α正常分布于神经元胞质、轴突 ,但在AD患者的海马 ,CaMKⅡ α沉积于神经元外并形成大小不等的斑块样结构。其中 ,大部分CaMKⅡ α斑块样沉积存在于主要由Aβ组成的老年斑中 ,只有那些很小的CaMKⅡ α沉积斑不含Aβ。在弥散型斑块中 ,CaMKⅡ α沉积撒落在未融合的Aβ沉积中。在经典型斑块中 ,交互出现的CaMKⅡ α和Aβ沉积围绕着均质融合的Aβ核心。老年斑周围反应增生性星形胶质细胞不过度表达CaMKⅡ α ,且与CaMKⅡ α沉积间无明确关联。结论 CaMKⅡ α沉积可能参与了AD患者老年斑形成 ,星形胶质细胞可能不参与CaMKⅡ α沉积。 展开更多
关键词 ALZHEIMER病 老年斑 -调素依赖蛋白激酶Ⅱ-α Β-淀粉样蛋白 星形胶质细胞
下载PDF
发动蛋白对心脏收缩-频率反应的调控作用 被引量:1
12
作者 叶江川 刘班 +1 位作者 李俊 陈义汉 《同济大学学报(医学版)》 CAS 2012年第4期7-12,共6页
目的观察DNM2在心脏收缩-频率反应(force-frequency response,FFR)中的作用。方法分离培养大鼠心脏细胞。构建包含DNM2显性失活突变体的腺病毒载体,将其转染成年大鼠心室肌细胞,并分析DNM2功能失活对心肌细胞FFR的影响。通过免疫印迹方... 目的观察DNM2在心脏收缩-频率反应(force-frequency response,FFR)中的作用。方法分离培养大鼠心脏细胞。构建包含DNM2显性失活突变体的腺病毒载体,将其转染成年大鼠心室肌细胞,并分析DNM2功能失活对心肌细胞FFR的影响。通过免疫印迹方法检测受磷蛋白与钙—钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱδ(CaMKⅡδ)的活性变化。用选择性药物抑制DNM2的GTP酶活性,观察离体心脏FFR的变化情况。结果 DNM2显性失活减弱了心肌细胞频率依赖的缩短分数和钙瞬变变化,这与细胞钙水平升高及CaMKⅡδ活性上调有关。器官层面的研究显示,抑制DNM2活性还可导致心脏FFR受到明显的损伤。结论 DNM2活性对心脏正常FFR的维持是必需的;作为调控FFR的重要分子,DNM2可能成为心力衰竭等心脏疾病的药物干预靶点。 展开更多
关键词 发动蛋白 收缩-频率反应 水平 受磷蛋白 -调素依赖蛋白激酶Ⅱδ
下载PDF
牡荆素调节环磷酸腺苷激活的交换蛋白1/钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ信号对大鼠心肌梗死后心肌肥大与纤维化的作用
13
作者 赵天昊 袁慧 +3 位作者 麻祖青 陶星宇 张宇 董六一 《心脑血管病防治》 2024年第2期10-15,共6页
目的探讨牡荆素调控环磷酸腺苷激活的交换蛋白1(Epac1)/钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)信号通路抑制大鼠心肌梗死(MI)后心肌细胞肥大与纤维化的作用。方法24只SD大鼠随机分为:假手术组、MI组、牡荆素组。大鼠进行心脏左前降支结扎建... 目的探讨牡荆素调控环磷酸腺苷激活的交换蛋白1(Epac1)/钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)信号通路抑制大鼠心肌梗死(MI)后心肌细胞肥大与纤维化的作用。方法24只SD大鼠随机分为:假手术组、MI组、牡荆素组。大鼠进行心脏左前降支结扎建立MI模型,假手术组只穿线不结扎。检测大鼠心功能变化;苏木精-伊红(HE)染色观察心脏病理学变化,天狼星红染色观察心脏纤维化,电镜观察心肌线粒体损伤情况;Western Blot检测Epac1、CaMKⅡ等蛋白变化。结果(1)大鼠MI 4周后,与假手术组比较MI组大鼠左心室短轴缩短率(LVFS)和左心室射血分数(LVEF)均降低(P<0.01),左心室收缩末期内径(LVIDs)、左心室舒张末期内径(LVIDd)和舒张末期左心室后壁厚度(LVPWd)、收缩末期左心室后壁厚度(LVPWs)增加(P<0.01),牡荆素组大鼠心脏LVIDs、LVIDd、LVPWs和LVPWd较MI组降低,LVFS和LVEF均升高,差异有统计学意义(P<0.05);(2)牡荆素可降低大鼠心脏重量指数(P<0.01),并减小MI组大鼠心肌细胞横截面积,同时减轻大鼠左心室壁心肌纤维化程度(P<0.01),牡荆素组大鼠心肌胞浆内线粒体肿胀较MI组减轻,线粒体形态较完整,空泡形成较少;(3)Western Blot结果显示牡荆素抑制大鼠MI后Epac1激活(P<0.01),抑制其下游CaMKⅡ激活与细胞外调节激酶的磷酸化(P<0.01),同时可抑制B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)上调(P<0.05),上调Bcl-2(P<0.01),抑制凋亡蛋白裂解半胱天冬酶3(Cleaved-Caspase 3)的活化(P<0.05)。结论牡荆素可通过抑制Epac1/CaMKⅡ通路,改善大鼠MI后心脏功能,抑制心肌肥大和纤维化。 展开更多
关键词 牡荆素 心肌缺血 凋亡 环磷酸腺苷激活交换蛋白1 /调素依赖蛋白激酶
下载PDF
CaMKⅡ在收缩促进骨骼肌细胞GLUT4转位中的作用 被引量:2
14
作者 于俊娜 牛文彦 《天津医药》 CAS 北大核心 2011年第6期536-538,共3页
目的:探讨钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在收缩促进骨骼肌细胞葡萄糖转运子4(GLUT4)转位机制中的作用。方法:将接种在培养板中的C2C12GLUT4myc小鼠肌管随机分为对照组和氨乙酰胆碱(Cch)组,各组分为抑制剂亚组和对照亚组。分别用1... 目的:探讨钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在收缩促进骨骼肌细胞葡萄糖转运子4(GLUT4)转位机制中的作用。方法:将接种在培养板中的C2C12GLUT4myc小鼠肌管随机分为对照组和氨乙酰胆碱(Cch)组,各组分为抑制剂亚组和对照亚组。分别用10μmol/LCaMKⅡ的特异性抑制剂KN93或KN62预孵育,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞膜上GLUT4myc的含量(转位);用KN93预孵育后,免疫印迹法测定蛋白激酶CaMKⅡ的磷酸化。结果:氨乙酰胆碱使细胞膜上GLUT4myc的水平显著增加。KN93和KN62抑制氨乙酰胆碱刺激的GLUT4myc转位。氨乙酰胆碱可增加CaMKⅡ的磷酸化,KN93不影响对照组CaMKⅡ的磷酸化水平,但可以抑制Cch刺激的CaMKⅡ磷酸化。结论:CaMKⅡ位于Ca2+下游并有介导收缩促进骨骼肌细胞GLUT4myc转位的作用。 展开更多
关键词 -调素依赖蛋白激酶 骨骼 葡萄糖转运体型 肌收缩 细胞 培养 酶联免疫吸附测定 印迹法 蛋白 氨乙酰胆碱
下载PDF
CaMKⅡα/β稳定表达的PC12细胞株的构建及其功能的初步研究
15
作者 张蕊 苑玉和 +1 位作者 赵明 陈乃宏 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1765-1770,共6页
目的建立稳定表达CaMKⅡα/β的PC12稳定细胞株,以便进一步研究钙/钙调素依赖性蛋白激酶CaMKⅡα/β不同亚型的生理功能。方法通过脂质体介导的方法将构建的表达载体pEGFP-CaMKⅡα/β转染入PC12细胞中,然后用含G418抗生素的选择性培养... 目的建立稳定表达CaMKⅡα/β的PC12稳定细胞株,以便进一步研究钙/钙调素依赖性蛋白激酶CaMKⅡα/β不同亚型的生理功能。方法通过脂质体介导的方法将构建的表达载体pEGFP-CaMKⅡα/β转染入PC12细胞中,然后用含G418抗生素的选择性培养基进行长期筛选,挑取耐药单克隆,培养并收集耐药的单克隆细胞;通过MTT法检测转染细胞在体外对PC12细胞增殖与活性的影响;Westernblot分析稳定表达的pEGFP-CaMKⅡα/β不同亚型对PC12细胞中相关突触囊泡蛋白表达的影响;并用高效液相色谱法(HPLC)检测过表达的CaMKⅡα/β对PC12细胞神经递质多巴胺DA释放的影响。结果 MTT细胞活性检测结果显示,转染重组质粒pEGFP-N1-CaMKⅡα/β的PC12细胞稳定株的生长活性与对照组相接近。应用Western blot方法对融合蛋白CaMKⅡα/β-GFP在PC12细胞内的表达进行鉴定,结果显示在PC12-CaMKⅡα/β组中,分子量82/89 ku处检测到该目的基因的大量表达,而在对照组的相应位置则没有任何条带,表明外源性目的基因已在细胞内过表达。West-ern blot方法检测突触囊泡蛋白结果显示CaMKⅡα/β不同亚型的过表达对囊泡蛋白的影响并无差异。HPLC检测结果显示过表达的CaMKⅡα/β对PC12细胞中DA的释放差异具有显著性。结论该实验获得稳定表达pEGFP-CaMKⅡα/β的PC12细胞株。初步探讨了该激酶的不同亚型对细胞功能的影响。 展开更多
关键词 -调素依赖蛋白激酶CaMKⅡα/β 稳定细胞株 突触囊泡蛋白表达 神经递质DA释放 融合蛋白 高效液相检测
下载PDF
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部