为了建立热带螨重组Blo t 5(rBlo t 5)变应原诱导小鼠过敏模型,试验对热带螨Blo t 5基因序列进行优化与全基因合成,构建了原核表达载体PQE80L-Blo t 5,并在大肠杆菌中进行表达。利用镍柱亲和层析法纯化了rBlo t 5蛋白,Western blotting...为了建立热带螨重组Blo t 5(rBlo t 5)变应原诱导小鼠过敏模型,试验对热带螨Blo t 5基因序列进行优化与全基因合成,构建了原核表达载体PQE80L-Blo t 5,并在大肠杆菌中进行表达。利用镍柱亲和层析法纯化了rBlo t 5蛋白,Western blotting结果显示,纯化的rBlo t 5蛋白能与Blo t 5鼠单克隆抗体结合。随后将12只BALB/c小鼠随机均分为对照组(PBS组)与诱导组(rBlo t 5组),通过腹腔注射致敏与气道诱导后,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清总IgE水平;鼠尾静脉注射变应原诱发应激性过敏反应;HE染色观察小鼠肺部炎症严重程度。诱导小鼠过敏后发现,与PBS组相比,rBlo t 5组小鼠血清总IgE水平显著升高(P<0.05),应激性过敏反应引起体温显著下降(P<0.05),肺部组织细胞浸润显著增加(P<0.05)。本研究结果表明,原核表达纯化的rBlo t 5蛋白能够成功建立小鼠过敏模型。展开更多
为了建立热带螨重组变应原Blo t 21(rBlo t 21)诱导小鼠变态反应气道炎症模型,笔者利用从NCBI Gen Bank库里获得的热带螨Blo t 21基因序列,进行了序列优化与全基因合成,构建了原核表达载体PQE80LrBlo t 21,在大肠杆菌内诱导表达rBlo t ...为了建立热带螨重组变应原Blo t 21(rBlo t 21)诱导小鼠变态反应气道炎症模型,笔者利用从NCBI Gen Bank库里获得的热带螨Blo t 21基因序列,进行了序列优化与全基因合成,构建了原核表达载体PQE80LrBlo t 21,在大肠杆菌内诱导表达rBlo t 21,利用镍柱亲和层析纯化rBlo t 21蛋白。12只BALB/c小鼠随机分为对照组(PBS组)与诱导组(rBlo t 21组),每组6只,通过腹腔注射致敏与气道诱导后,分别通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清总IgE水平;鼠尾静脉注射变应原诱发应激性过敏反应;HE染色观察小鼠肺部炎症严重程度。本试验成功表达与纯化了重组热带螨变应原Blo t 21。利用纯化的rBlo t 21诱导小鼠变态反应气道炎症模型,与PBS组相比,rBlo t 21组的小鼠血清总IgE水平显著升高,肺部组织细胞侵润明显增加(P<0.05)。原核表达纯化的重组Blo t 21变应原能够诱导小鼠产生变态反应气道炎症。展开更多
文摘为了建立热带螨重组Blo t 5(rBlo t 5)变应原诱导小鼠过敏模型,试验对热带螨Blo t 5基因序列进行优化与全基因合成,构建了原核表达载体PQE80L-Blo t 5,并在大肠杆菌中进行表达。利用镍柱亲和层析法纯化了rBlo t 5蛋白,Western blotting结果显示,纯化的rBlo t 5蛋白能与Blo t 5鼠单克隆抗体结合。随后将12只BALB/c小鼠随机均分为对照组(PBS组)与诱导组(rBlo t 5组),通过腹腔注射致敏与气道诱导后,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清总IgE水平;鼠尾静脉注射变应原诱发应激性过敏反应;HE染色观察小鼠肺部炎症严重程度。诱导小鼠过敏后发现,与PBS组相比,rBlo t 5组小鼠血清总IgE水平显著升高(P<0.05),应激性过敏反应引起体温显著下降(P<0.05),肺部组织细胞浸润显著增加(P<0.05)。本研究结果表明,原核表达纯化的rBlo t 5蛋白能够成功建立小鼠过敏模型。
文摘为了建立热带螨重组变应原Blo t 21(rBlo t 21)诱导小鼠变态反应气道炎症模型,笔者利用从NCBI Gen Bank库里获得的热带螨Blo t 21基因序列,进行了序列优化与全基因合成,构建了原核表达载体PQE80LrBlo t 21,在大肠杆菌内诱导表达rBlo t 21,利用镍柱亲和层析纯化rBlo t 21蛋白。12只BALB/c小鼠随机分为对照组(PBS组)与诱导组(rBlo t 21组),每组6只,通过腹腔注射致敏与气道诱导后,分别通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清总IgE水平;鼠尾静脉注射变应原诱发应激性过敏反应;HE染色观察小鼠肺部炎症严重程度。本试验成功表达与纯化了重组热带螨变应原Blo t 21。利用纯化的rBlo t 21诱导小鼠变态反应气道炎症模型,与PBS组相比,rBlo t 21组的小鼠血清总IgE水平显著升高,肺部组织细胞侵润明显增加(P<0.05)。原核表达纯化的重组Blo t 21变应原能够诱导小鼠产生变态反应气道炎症。
