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表达禽流感病毒HA蛋白及传染性法氏囊病毒VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒的构建
1
作者 唐猛 陈普成 +5 位作者 高立 柳金雄 潘俊慧 王笑梅 姜永萍 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期865-869,共5页
为构建同时表达禽流感病毒(AIV)HA蛋白及传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(r HVT),本研究以本实验室构建的连续覆盖火鸡疱疹病毒(HVT)全基因组的5个重组粘粒(p Fos A、p Fos B、p Fos C、p Fos D和p Fos E)为基础,利用... 为构建同时表达禽流感病毒(AIV)HA蛋白及传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(r HVT),本研究以本实验室构建的连续覆盖火鸡疱疹病毒(HVT)全基因组的5个重组粘粒(p Fos A、p Fos B、p Fos C、p Fos D和p Fos E)为基础,利用猪捷申病毒2A蛋白的编码序列,将HA基因和VP2基因串联,并克隆于p CAGGs载体中,构建重组质粒p CA-HA-2A-VP2。利用Gateway LR克隆技术,将重组质粒中的HA-2A-VP2的表达盒(Pec-HA-2A-VP2-POLYA)插入到p Fos C粘粒中HVT片段的复制非必需区HVT053与HVT054基因之间,构建重组粘粒p Fos C-5354-HA-VP2。将p Fos A、p Fos B、p Fos D、p Fos E和p Fos C-5354-HA-VP2 5个重组粘粒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),制备表达HA蛋白及VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(r HVT-5354-HA-VP2)。将重组病毒在CEF中连续传至20代后,通过PCR、间接免疫荧光和western blot鉴定分析,结果显示HA与VP2基因能够在重组病毒中稳定存在并正确表达;生长动力学结果表明,重组病毒在CEF中的增殖效率与野生型病毒HVT无显著差异。该重组病毒的制备为研制AIV-IBDV-马立克病毒三联苗奠定了基础。 展开更多
关键词 重组粘粒 重组火鸡疱疹病毒 三联苗
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重组粘粒pIXUR3502对甘蓝黑腐黄单胞菌胞外多糖生物合成的负调控
2
作者 姚仕义 黄迎春 王金生 《微生物学杂志》 CAS CSCD 1999年第2期14-16,共3页
通过三亲交配，XCCNAU-1基因文库中的重组粘粒可以从Ecoli转移到XCCNAU－R3中，绝大多数重组粘粒的转入对甘蓝黑腐菌胞外多糖（Eps）生物合成无明显影响，但导致菌株生长较慢。重组粘粒pIXUR3502（约50kb）对Eps生物合成有负调控，使产... 通过三亲交配，XCCNAU-1基因文库中的重组粘粒可以从Ecoli转移到XCCNAU－R3中，绝大多数重组粘粒的转入对甘蓝黑腐菌胞外多糖（Eps）生物合成无明显影响，但导致菌株生长较慢。重组粘粒pIXUR3502（约50kb）对Eps生物合成有负调控，使产量降低35.1％，发酵液粘度降低40．6％，其中，载体pIJ3200本身使产量降低6．7％，发酵液粘度降低9．4％，约28kb的外源DNA片段使产量降低28．4％，发酵液粘度降低31．2％。 展开更多
关键词 重组粘粒 甘蓝 黑腐黄单胞菌 胞外多糖 调控
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传染性软疣病毒MC148基因腺病毒重组粘粒构建 被引量：2
3
作者 孙星慧 吴军 +3 位作者 易绍萱 罗高兴 陈希炜 贺伟峰 《重庆医学》 CAS CSCD 2002年第8期654-656,共3页
目的　构建传染性软疣病毒 (MCV )MC14 8基因腺病毒重组粘粒。方法　从软疣小体中提取病毒DNA ,经PCR扩增后构建于 pUC19克隆载体上。对克隆产物测序后 ,与粘粒pAxCAwt定向重组。 结果　克隆出MC14 8基因并构建了 pAxCAwt MC14 8粘粒重... 目的　构建传染性软疣病毒 (MCV )MC14 8基因腺病毒重组粘粒。方法　从软疣小体中提取病毒DNA ,经PCR扩增后构建于 pUC19克隆载体上。对克隆产物测序后 ,与粘粒pAxCAwt定向重组。 结果　克隆出MC14 8基因并构建了 pAxCAwt MC14 8粘粒重组体。结论　本方法建立为研究MC14 8基因转染对趋化因子的拮抗作用奠定基础。 展开更多
关键词 传染性软疣病毒 MC148基因 腺病毒重组粘粒 趋化因子 免疫抑制 PCR
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