表达PCV2 CAP蛋白和猪IL-18重组PRV PGO18株的生物学特性 被引量：2

1

作者 郭晓庆 郑兰兰 +5 位作者 付朋飞 杨兴武 乔涵 朱前磊 王淑娟 陈红英 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期707-711,717,共6页

为了探讨表达猪圆环病毒2型(PCV2)CAP蛋白和猪IL-18的重组猪伪狂犬病病毒PGO18作为疫苗候选株的潜在价值,对其在ST细胞上的培养特性,ST、VERO、IBRS-2、PK-15和IPEC细胞上增殖情况,生长特性,遗传稳定性,对小鼠安全性及其理化特性等生物... 为了探讨表达猪圆环病毒2型(PCV2)CAP蛋白和猪IL-18的重组猪伪狂犬病病毒PGO18作为疫苗候选株的潜在价值,对其在ST细胞上的培养特性,ST、VERO、IBRS-2、PK-15和IPEC细胞上增殖情况,生长特性,遗传稳定性,对小鼠安全性及其理化特性等生物学特性进行了研究。结果表明,重组病毒PGO18株与亲本株猪伪狂犬病病毒HB98具有相似的培养特性和生长特性,在ST、VERO和IBRS-2细胞上的增殖滴度TCID50与亲本株(107.75/0.1mL)相当,遗传稳定性良好,安全性试验表明对小鼠是安全的;理化特性试验说明该病毒具有猪伪狂犬病病毒的通性。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 猪IL-18 重组猪伪狂犬病病毒 生物学特性

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痘病毒疫苗载体 被引量：6

2

作者 庞乐君 刁天喜 《国外医学（药学分册）》 2004年第3期154-157,共4页

1798年 ,Jenner的发现奠定了免疫学的基础并最终导致天花病毒在地球上根除。尽管天花病毒已被消灭 ,在 2 0世纪 80年代仍引起一场研究痘苗病毒的高潮 ,其中部分原因是分子遗传学应用于对重组牛痘病毒外源基因的克隆和表达 ,而生物恐怖... 1798年 ,Jenner的发现奠定了免疫学的基础并最终导致天花病毒在地球上根除。尽管天花病毒已被消灭 ,在 2 0世纪 80年代仍引起一场研究痘苗病毒的高潮 ,其中部分原因是分子遗传学应用于对重组牛痘病毒外源基因的克隆和表达 ,而生物恐怖又重新引起人们对牛痘的关注。这些重组病毒在研究和疫苗学中均有多方面用途 ,并促进载体疫苗的发展 ,例如重组牛痘狂犬病疫苗在西欧及最近在美国被用来消除狂犬病 ;选择性的痘病毒载体 ,例如禽痘病毒用于非禽类动物时被证明是安全有效的非复制型载体。 展开更多

关键词 重组痘病毒载体 痘苗病毒 重组牛痘狂犬病病毒 禽痘病毒

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表达多个外源基因的重组伪狂犬病病毒的构建及其细胞培养特性研究 被引量：5

3

作者 刘燕 田志军 +2 位作者 周艳君 仇华吉 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期81-85,共5页

将SV40启动子控制下的LacZ报告基因表达盒与分别在CMV启动子控制下的含有猪瘟病毒(CSFV)E2基因及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) GP5基因的表达盒插入到伪狂犬病病毒(PRV)Bartha-K61株TK基因中,通过蓝斑筛选获得了一株插入CSFV E2、PRRS... 将SV40启动子控制下的LacZ报告基因表达盒与分别在CMV启动子控制下的含有猪瘟病毒(CSFV)E2基因及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) GP5基因的表达盒插入到伪狂犬病病毒(PRV)Bartha-K61株TK基因中,通过蓝斑筛选获得了一株插入CSFV E2、PRRSV GP5与LacZ基因的重组伪狂犬病病毒,命名为rPRV-E2-GP5。经Westernblot、间接免疫荧光试验证实E2、GP5基因在重组病毒感染细胞中获得了表达。重组病毒感染Vero、PK-15、IBRS2和CEF细胞后的增殖滴度和致细胞病变特征与亲本病毒比较,无显著差异。本试验结果表明在PRV基因组中可以插入多个外源基因,为进一步研究多价基因工程载体疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 重组伪狂犬病病毒 猪瘟病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒

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伪狂犬病病毒通用转移载体的构建及应用 被引量：3

4

作者 钱平 李祥敏 +3 位作者 陈焕春 肖少波 仇华吉 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期16-20,共5页

将来自质粒pFSV40的 3 0 0bpBamHI/PstI片段〔其中含有SV40poly(A)和部分多克隆位点〕插入到质粒pUSK相应的酶切位点中 ,获得重组质粒pUSKSV40 ,该重组质粒中gG基因 5’端编码区缺失了 42 8bp。将来自质粒pcDNA3 .1( +)的 946bpBglIIEc... 将来自质粒pFSV40的 3 0 0bpBamHI/PstI片段〔其中含有SV40poly(A)和部分多克隆位点〕插入到质粒pUSK相应的酶切位点中 ,获得重组质粒pUSKSV40 ,该重组质粒中gG基因 5’端编码区缺失了 42 8bp。将来自质粒pcDNA3 .1( +)的 946bpBglIIEcoRI片段 (其中含CMV启动子及部分多克隆位点 )插入到质粒pUSKSV40的BamHIEcoRI位点 ,构建了通用载体pPRVCMV_uni,其中含有CMV启动子、SV40poly(A)以及NheI、Pmel、BamHI、BstXI、EcoRI、StuI、XbaI等 7个单一克隆位点。将eGFP基因插入到该通用载体的BamHI和EcoRI之间 ,用所获得的转移载体与TK_/gG_/LacZ+ PRV基因组共转染PK_1 5细胞 ,经检测eGFP基因在重组伪狂犬病病毒中获得表达 ,从而证实该通用载体的构建是可行的。本研究研制以伪狂犬病病毒为载体的二价或多价基因工程疫苗奠定了物质基础。 展开更多

关键词 伪狂犬病 伪狂犬病病毒 通用转移载体 重组伪狂犬病病毒 基因工程疫苗

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重组伪狂犬病病毒TK^-/FMDV VP1的构建 被引量：3

5

作者 卜春玲 罗满林 +2 位作者 刘镇明 黄毓茂 贺东生 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期241-244,269,共5页

以伪狂犬病病毒 (PRV)为载体表达其他病原体抗原蛋白是伪狂犬病疫苗研究的一个重要方向。本文以广东地方分离株 (以下简称YA)为亲本株 ,用PCR方法得到同源左右臂 ,然后将重组转移载体和PRVYA的基因组共转染 ,用BUDR筛选出了表达口蹄疫病... 以伪狂犬病病毒 (PRV)为载体表达其他病原体抗原蛋白是伪狂犬病疫苗研究的一个重要方向。本文以广东地方分离株 (以下简称YA)为亲本株 ,用PCR方法得到同源左右臂 ,然后将重组转移载体和PRVYA的基因组共转染 ,用BUDR筛选出了表达口蹄疫病毒 (Foot_and_MouthDiseaseVirus ,FMDV)结构蛋白VP1的TK_重组病毒 ,用PCR和SDS -PAGE的方法对VP1蛋白进行了初步鉴定 。 展开更多

关键词 重组伪狂犬病病毒 TK基因缺失疫苗 FMDV VP1

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OX40L通过激活树突状细胞促进重组狂犬病病毒免疫早期抗体的产生

6

作者 王玉芳 高婷 +6 位作者 邢潇 王勇 字绍美 刘亚萍 胡杨 李康 李莹莹 《免疫学杂志》 CAS CSCD 2024年第5期425-432,共8页

目的明确重组狂犬病病毒(LBNSE-OX40L)过表达的OX40L能否通过激活树突状细胞增强先天性免疫反应进而激活早期抗体的产生。方法体外研究:从Balb/c小鼠股骨提取骨髓源树突状细胞(bone marrow dendritic cells,BMDCs)培养6 d,用感染复数(MO... 目的明确重组狂犬病病毒(LBNSE-OX40L)过表达的OX40L能否通过激活树突状细胞增强先天性免疫反应进而激活早期抗体的产生。方法体外研究:从Balb/c小鼠股骨提取骨髓源树突状细胞(bone marrow dendritic cells,BMDCs)培养6 d,用感染复数(MOI)=1的亲本病毒LBNSE和重组病毒LBNSE-OX40L感染培养好的BMDCs,通过流式细胞术分析各病毒对BMDCs成熟情况的影响和ELISA方法检测感染BMDCs上清中与先天性免疫相关细胞因子α干扰素(interferon-α,IFN-α)和白细胞介素12p40(interleukin-12p40,IL-12p40)的表达情况。体内研究:Balb/c雌鼠双后肢肌肉注射106 FFU的亲本病毒LBNSE和重组病毒LBNSE-OX40L,免疫后第6天收集小鼠腹股沟淋巴结,经流式细胞术检测成熟DCs比例,在免疫后第6天收集小鼠血清,通过抗病毒中和抗体滴定法检测病毒中和抗体(virus neutralizing antibody,VNA)含量,通过ELISA检测小鼠血清中IgG抗体;在免疫后第2、4、6天通过ELISA检测IgM抗体亚类含量。结果与亲本病毒LBNSE相比,重组病毒LBNSE-OX40L能够在体外激活显著多的BMDCs,并产生显著高水平的IFN-α和IL-12p40,且重组病毒LBNSE-OX40L能刺激体内DCs成熟分化,迅速产生高水平的VNA和RABV特异性IgG和IgM抗体亚类。结论LBNSE-OX40L能激活树突状细胞促进机体先天性免疫反应,进而增强早期抗体的产生,可以作为早期有效的狂犬病疫苗候选。 展开更多

关键词 重组狂犬病病毒 OX40L 树突状细胞 先天性免疫反应 抗体免疫

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重组伪狂犬病病毒介导的siRNA对高致病性PRRSVN蛋白基因表达的抑制作用 被引量：2

7

作者 曹素芳 王岩 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1142-1149,1153,共9页

构建表达HP-PRRSV河南分离株HN1N蛋白基因的siRNA重组伪狂犬病病毒3株,将其感染PK-15细胞,在细胞水平上评价重组伪狂犬病病毒介导的siRNA对N蛋白表达的抑制效果。PCR扩增带CMV-siRNA-poly(A)片段和新霉素基因,通过酶切将CMV-siRNA-poly... 构建表达HP-PRRSV河南分离株HN1N蛋白基因的siRNA重组伪狂犬病病毒3株,将其感染PK-15细胞,在细胞水平上评价重组伪狂犬病病毒介导的siRNA对N蛋白表达的抑制效果。PCR扩增带CMV-siRNA-poly(A)片段和新霉素基因,通过酶切将CMV-siRNA-poly(A)片段和新霉素基因分别插入伪狂犬病病毒转移载体pUSKBH中,构建重组伪狂犬病病毒通用转移载体pUsiRNA。分别用BamHⅠ和HindⅢ酶切pUsiRNA,回收后与HPPRRSV河南分离株HN1N蛋白基因的3个siRNA分子连接,构建表达N蛋白基因siRNA的重组伪狂犬病病毒表达载体。将鉴定正确的重组伪狂犬病病毒表达载体与伪狂犬病病毒DNA共转染PK-15细胞,经同源重组及噬斑纯化获得表达N蛋白基因siRNA的重组伪狂犬病病毒株,应用PCR及Southern blot鉴定重组病毒。将HN1株N蛋白基因的真核表达质粒pAcGFP1-N转染PK-15,经筛选获得稳定表达N蛋白基因的细胞。将鉴定正确的表达N蛋白基因siRNA的重组伪狂犬病病毒接种于稳定表达N蛋白基因的细胞,利用绿色荧光蛋白基因及半定量RT-PCR检测重组伪狂犬病病毒介导的N蛋白基因siRNA对N蛋白表达的抑制效果。结果显示,PCR扩增到的CMV-siRNA-poly(A)片段约为0.7kb,新霉素基因约1.5kb。经酶切、PCR及测序鉴定,构建了表达siRNA的通用伪狂犬病病毒转移载体pUsiRNA。经PCR及Southern blot检测,获得了3株表达HP-PRRSV河南分离株HN1N蛋白基因siRNA的重组伪狂犬病病毒gG-/siRNAN1、gG-/siRNAN2和gG-/siRNAN3;经荧光显微镜观察和半定量RT-PCR检测表明,重组伪狂犬病病毒介导的N蛋白基因siRNA能够显著抑制N蛋白在PK-15细胞中表达,其中gG-/siRNAN2抑制效果最好。这为深入研究N蛋白基因siRNA抑制HP-PRRSV复制奠定基础,并为HP-PRRSV的防制提供新的思路。 展开更多

关键词 高致病性 PRRS N蛋白基因 SIRNA 重组伪狂犬病病毒

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重组狂犬病病毒抗体中和试验方法的建立 被引量：1

8

作者 姜人文 张莹辉 +5 位作者 杜吉革 李启红 朱真 陈小云 唐丽杰 印春生 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期332-338,共7页

为了构建一种使用重组狂犬病病毒的抗体中和试验方法(FAVN-GFP),将8种兽用狂犬病灭活疫苗(含标准参考疫苗)分别5倍梯度稀释4个稀释度后免疫小鼠,分别在首次免疫后的第14、28天采集小鼠血清,以表达绿色荧光蛋白的重组狂犬病病毒作为抗原... 为了构建一种使用重组狂犬病病毒的抗体中和试验方法(FAVN-GFP),将8种兽用狂犬病灭活疫苗(含标准参考疫苗)分别5倍梯度稀释4个稀释度后免疫小鼠,分别在首次免疫后的第14、28天采集小鼠血清,以表达绿色荧光蛋白的重组狂犬病病毒作为抗原,使用FAVN-GFP方法测定中和抗体效价,并与中国兽药典中的经典NIH方法进行对比分析。结果显示,首次免疫后第28天1∶25稀释组对8种疫苗的检测结果与NIH法的结果在斜率/差分上显著相关,证明在该条件下两种方法具有相同的变化趋势。结果表明,本实验所建立的FAVN-GFP法可以在兽用狂犬病灭活疫苗的效力评价中替代现有的NIH方法,能够大量减少实验动物的使用,更加安全、准确和经济。 展开更多

关键词 重组狂犬病病毒 中和试验 效力评价 灭活疫苗

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重组伪狂犬病病毒rPRV/eGFP/rgp活疫苗免疫幼犬的最小免疫剂量及攻毒保护试验 被引量：1

9

作者 袁子国 张秀香 +4 位作者 王晓虎 徐慧娟 张守峰 刘云方 扈荣良 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2008年第8期92-94,共3页

关键词 重组伪狂犬病病毒 保护试验 最小免疫剂量 疫苗免疫 EGFP β-半乳糖苷酶 攻毒 幼犬

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靶向HP-PRRSV ORF7基因的siRNA重组伪狂病病毒的体外复制抑制效果 被引量：1

10

作者 曹素芳 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期2044-2050,共7页

为了评价靶向高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV）ORF7的siRNA重组伪狂犬病病毒（rPRV）对HP-PRRSV复制的体外抑制效果。将500MOI的siRNA rPRV：rPRV gG-/siRNA N1、rPRV gG-/siRNA N2、rPRV gG-/siRNA N3分别感染Marc-145细胞,... 为了评价靶向高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV）ORF7的siRNA重组伪狂犬病病毒（rPRV）对HP-PRRSV复制的体外抑制效果。将500MOI的siRNA rPRV：rPRV gG-/siRNA N1、rPRV gG-/siRNA N2、rPRV gG-/siRNA N3分别感染Marc-145细胞,24h后再分别接种10 MOI PRRSV,感染病毒48h后,观察其抑制HPPRRSV HN1株复制效果;待细胞感染病毒72h后,应用间接免疫荧光试验（IFA）、实时荧光定量PCR及Western blot检测重组rPRV介导的siRNA对HP-PRRSV在细胞中复制的抑制作用。结果显示,与表达突变siRNA的rPRV gG-/siRNA Neg及接毒对照组相比,HP-PRRSV在细胞中的复制均可被3个siRNA rPRV有效抑制,其中重组病毒rPRV gG-/siRNA N2抑制效果最佳;进一步检测siRNA重组rPRV在Marc-145细胞中抑制HP-PRRSV HN1株的复制效果,结果显示,与对照组相比,重组病毒rPRV gG-/siRNA N1和rPRV gG-/siRNA N3抑制作用不明显,而rPRV gG-/siRNA N2不但能够有效抑制HP-PRRSV引起的细胞病变,而且能够消减HP-PRRSV N蛋白的表达,明显降低ORF7mRNA的表达水平（P〈0.05）,且其抑制作用具有剂量依赖性,其抑制效果至少可持续5d,但随着时间的延长逐渐减弱。结果提示siRNA rPRV在体外能抑制HP-PRRSV的复制。 展开更多

关键词 高致病性PRRSV 重组伪狂犬病病毒 RNA干扰 SIRNA

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CDV-N重组狂犬病病毒的毒力及其免疫原性测定 被引量：1

11

作者 文兆海 周海滢 +3 位作者 翟少华 陈凯云 胡远 简子健 《动物医学进展》 北大核心 2019年第4期21-27,共7页

为了探究CDV-N重组狂犬病病毒的毒力及对小鼠的免疫效果,将CDV-N重组狂犬病病毒于BSR细胞上扩毒培养、浓缩后测定其FFD_(50)及LD_(50);将浓缩后的重组病毒液与复合佐剂按一定比例混匀,按不同免疫剂量、不同免疫方式分组免疫接种小鼠,利... 为了探究CDV-N重组狂犬病病毒的毒力及对小鼠的免疫效果,将CDV-N重组狂犬病病毒于BSR细胞上扩毒培养、浓缩后测定其FFD_(50)及LD_(50);将浓缩后的重组病毒液与复合佐剂按一定比例混匀,按不同免疫剂量、不同免疫方式分组免疫接种小鼠,利用ELISA试剂盒对狂犬病、犬瘟热的特异性抗体进行定性/定量检测。结果显示,重组病毒浓缩后的FFD_(50)值为7.85logFFD_(50)/0.1 mL,LD_(50)值为7.67logLD_(50)/0.03mL;免疫接种后第14天抗体阳性率达100%,小鼠血清中的特异性抗体IgG水平随着免疫剂量的递增而递增。试验结果可为CDV-N重组狂犬病病毒制备口服弱毒疫苗的进一步研究提供试验数据。 展开更多

关键词 重组狂犬病病毒 半数荧光灶形成量 半数致死量 免疫 抗体

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表达猫衣原体momp蛋白的重组狂犬病病毒SRV9-MOMP的构建与鉴定 被引量：1

12

作者 阮晓凤 齐宇 +4 位作者 张艳艳 陈腾 周鑫涛 张守峰 扈荣良 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期904-909,共6页

为构建表达猫衣原体主要外膜蛋白(momp)的重组狂犬病病毒,以狂犬病病毒SRV9株反向遗传质粒pUC57-SRV9为骨架,在P/M基因间隔序列处插入MOMP基因,获得正确的重组全长转录质粒pUC57-SRV9-MOMP(P/M)。再将全基因组质粒与pUC57-N(SRV9)、pUC5... 为构建表达猫衣原体主要外膜蛋白(momp)的重组狂犬病病毒,以狂犬病病毒SRV9株反向遗传质粒pUC57-SRV9为骨架,在P/M基因间隔序列处插入MOMP基因,获得正确的重组全长转录质粒pUC57-SRV9-MOMP(P/M)。再将全基因组质粒与pUC57-N(SRV9)、pUC57-P(SRV9)、pUC57-G(SRV9)、pUC57-L(SRV9)4个辅助质粒共转染BSR-T7细胞系。经直接免疫荧光法验证,成功拯救出病毒SRV9-MOMP。Western-blot和RT-PCR检测表明,momp在重组病毒SRV9-MOMP感染的细胞内被稳定表达。本研究证明狂犬病病毒SRV9株具有作为载体表达外源蛋白的潜力,为研制高效、安全、经济的猫衣原体病疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 猫衣原体 主要外膜蛋白 重组狂犬病病毒

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犬瘟热病毒N基因重组狂犬病病毒的拯救与鉴定

13

作者 文兆海 毛丽萍 +5 位作者 胡远 程瑶 周海莹 陈凯云 翟少华 简子健 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期2334-2338,共5页

探究犬瘟热病毒N基因重组狂犬病病毒的拯救及鉴定,为后期犬瘟热-狂犬病二联口服弱毒活疫苗的研制奠定基础。采用脂质体转染的方法,将纯化后的重组质粒(pcDNA-N-G-EGFP-CDVN-PM-L)与辅助性表达质粒(pcDNAN、pcDNA-G、pcDNA-P、pcDNA-L)... 探究犬瘟热病毒N基因重组狂犬病病毒的拯救及鉴定,为后期犬瘟热-狂犬病二联口服弱毒活疫苗的研制奠定基础。采用脂质体转染的方法,将纯化后的重组质粒(pcDNA-N-G-EGFP-CDVN-PM-L)与辅助性表达质粒(pcDNAN、pcDNA-G、pcDNA-P、pcDNA-L)共转染BSR细胞,通过RT-PCR和间接免疫荧光技术进行检测并鉴定。结果显示,对盲传至第6代、第9代病毒液进行RT-PCR检测,均出现与预期相符的目的片段(狂犬病病毒N基因片段大小为1 315bp,犬瘟热病毒CDV-N基因片段大小为1 653bp)。间接免疫荧光试验后在激光共聚焦显微镜下,试验组均可观察到大量绿色荧光表达。RT-PCR结果与间接免疫荧光试验结果相吻合,表明犬瘟热病毒N基因重组狂犬病病毒拯救成功。 展开更多

关键词 重组狂犬病病毒 犬瘟热病毒N基因 反向遗传学 RT-PCR 间接免疫荧光

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表达H3N2亚型猪流感病毒HA的重组伪狂犬病病毒对仔猪的免疫效力评价 被引量：7

14

作者 郑宝亮 田志军 +3 位作者 李若 崔红玉 仇华吉 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期115-119,共5页

利用猪流感病毒(Swineinfluenza virus,SIV)与伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)血清学阴性的4周龄断奶仔猪,对此前构建的表达SIVA/Swine/Inner Mogolian/547/2001(H3N2)血凝素(HA)基因的重组伪狂犬病病毒(rPRV-HA)进行了免疫效力... 利用猪流感病毒(Swineinfluenza virus,SIV)与伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)血清学阴性的4周龄断奶仔猪,对此前构建的表达SIVA/Swine/Inner Mogolian/547/2001(H3N2)血凝素(HA)基因的重组伪狂犬病病毒(rPRV-HA)进行了免疫效力评价。按每头105.0PFU rPRV-HA肌肉注射断奶仔猪(n=12),同时设Bartha-K61免疫对照组(n=5)和非免疫攻毒对照组(n=5)。免疫后35d用2×105.0TCID50的SIVA/Swine/Heilongjiang/74/2000(H3N2)进行强毒攻击。rPRV-HA免疫组免疫后7d均可检测到高滴度针对SIV的血凝抑制(HI)抗体,而所有对照组小猪仅在攻毒后7d才开始产生针对SIV的HI抗体;rPRV-HA免疫组在病理学保护方面明显优于对照组,支气管和肺泡冲洗液病毒分离结果显示,攻毒后7d rPRV-HA免疫组没有检测到病毒,而两个对照组可检测到病毒。以上试验结果表明,rPRV-HA免疫猪对同亚型SIV的攻击具有很好的保护作用。 展开更多

关键词 重组伪狂犬病病毒 H3N2亚型 猪流感病毒 断奶仔猪 免疫效力

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IL-33基因重组和表达不影响重组狂犬病病毒体外表型特征

15

作者 高婷 米执中 +3 位作者 孙明 唐洗敏 王勇 李莹莹 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期586-591,共6页

目的 构建白细胞介素33(IL-33)基因重组的狂犬病病毒,明确表达IL-33对重组病毒体外表型特征的影响。方法从狂犬病强毒株感染的小鼠脑内扩增获得的IL-33基因,通过反向遗传操作技术插入亲本病毒LBNSE基因组的G、 L基因之间,并拯救过表达IL... 目的 构建白细胞介素33(IL-33)基因重组的狂犬病病毒,明确表达IL-33对重组病毒体外表型特征的影响。方法从狂犬病强毒株感染的小鼠脑内扩增获得的IL-33基因,通过反向遗传操作技术插入亲本病毒LBNSE基因组的G、 L基因之间,并拯救过表达IL-33的重组病毒;将重组狂犬病毒rLBNSE-IL33和亲本毒株LBNSE感染BSR仓鼠肾细胞或NA小鼠神经瘤细胞;在感染复数=0.01的情况下,测序和荧光抗体病毒中和试验检测重组病毒在传代过程中的稳定性;检测病毒滴度病灶形成单位(FFU)绘制多步生长曲线(感染复数=0.01);细胞毒性检测试剂盒检测细胞活性;ELISA检测不同感染复数感染细胞上清中IL-33的含量。结果 拯救获得过表达IL-33的rLBNSE-IL33,rLBNSE-IL33能够稳定连续传代至少10代,且毒价约为108FFU/mL;rLBNSE-IL33能够以剂量依赖的形式高水平表达IL-33,但检测被LBNSE感染的细胞上清,没有检测到IL-33的高表达;检查rLBNSE-IL33和亲本毒株LBNSE在BSR和NA细胞中5 d内的滴度,显示无明显差别,具有相似的生长动力学特性;过表达IL-33对感染细胞增殖及活性无显著影响。结论 IL-33基因重组和表达对狂犬病病毒体外表型特征无显著影响。 展开更多

关键词 白细胞介素33(IL-33) 重组狂犬病病毒rLBNSE-IL33 体外表型

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