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尼罗罗非鱼整胚原位杂交技术的建立和初步应用
被引量：
3
1
作者
曹建萌
卢迈新
+2 位作者
叶星
曾祖聪
高风英
《水产学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第11期1847-1854,共8页
为了研究尼罗罗非鱼胚胎发育和器官形成过程中基因功能和基因表达图式,本研究建立了尼罗罗非鱼的整胚原位杂交流程。尼罗罗非鱼的胚胎具有卵黄大、不透明、色素出现早等特点,因此现有鱼类整胚原位杂交方法不能完全适用于尼罗罗非鱼的胚...
为了研究尼罗罗非鱼胚胎发育和器官形成过程中基因功能和基因表达图式,本研究建立了尼罗罗非鱼的整胚原位杂交流程。尼罗罗非鱼的胚胎具有卵黄大、不透明、色素出现早等特点,因此现有鱼类整胚原位杂交方法不能完全适用于尼罗罗非鱼的胚胎,故本研究做了相应的调整和优化:通过提高H2O2的浓度和添加KOH,改良了尼罗罗非鱼胚胎的色素去除方法;使用冷丙酮代替蛋白酶K在提高胚胎通透性的同时保持胚胎完整;减少了探针回收和抗体回收后的洗涤次数,完善了结果的图像采集和胚胎保存方案。使用尼罗罗非鱼的重组激活基因Rag1作为探针基因,整胚原位杂交结果显示Rag1基因表达的位置与已报道的斑马鱼和日本青鳉的Rag1基因在胚胎中的表达位置高度保守,胚胎完整,基因表达位置清晰可见,表明此套尼罗罗非鱼的整胚原位杂交技术流程成功有效。
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关键词
尼罗罗非鱼
整胚原位杂交
胚胎发育
重组
激活
基因
(
rag
1)
下载PDF
职称材料
Rag1、Rag2基因缺陷小鼠的构建及在异种肿瘤移植中的应用
2
作者
沈如凌
石嘉豪
+3 位作者
盛哲津
冯晓龙
吴文婷
费俭
《实验动物与比较医学》
CAS
2016年第4期263-269,279,共8页
目的 建立重组激活基因,Rag1和Rag2基因缺陷小鼠模型,并对其表型和异种肿瘤移植的成瘤性进行分析.方法 通过传统的胚胎干细胞（ES）细胞打靶、囊胚注射方式,分别构建Rag1和Rag2基因缺陷小鼠模型;通过流式细胞术对缺陷小鼠外周血T/B淋巴...
目的 建立重组激活基因,Rag1和Rag2基因缺陷小鼠模型,并对其表型和异种肿瘤移植的成瘤性进行分析.方法 通过传统的胚胎干细胞（ES）细胞打靶、囊胚注射方式,分别构建Rag1和Rag2基因缺陷小鼠模型;通过流式细胞术对缺陷小鼠外周血T/B淋巴细胞含量进行检测;通过外源异种肿瘤细胞移植实验,对移植肿瘤细胞的成瘤性进行评价.结果 建立了Rag1和Rag2基因缺陷小鼠模型,两种基因突变纯合子小鼠模型外周血中T、B淋巴细胞含量较野生型小鼠显著降低;人源肿瘤细胞A549在上述两种基因突变纯合子小鼠中较BALB/c-nu（裸小鼠）或（NOD-SCID）非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷小鼠表现出更强的成瘤性.结论 分别成功建立了Rag1和Rag2基因缺陷小鼠模型,两种小鼠模型均发生了T、B淋巴细胞生成障碍,导致免疫系统严重缺陷,可作为异种外源肿瘤移植的受体,用于小鼠荷瘤模型的建立.
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关键词
重组
激活
基因
(
rag
1
基因
)
rag
2
基因
基因
缺陷
免疫缺陷
Recombination-activating
GENES
(
rag
l
gene)
下载PDF
职称材料
外源性重组激活基因在人类细胞中的表达研究
3
作者
曾艳
孙洪海
+5 位作者
王敏
刘旭
严丹丹
孙龙飞
刘志超
韦星呈
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第16期2001-2005,共5页
目的:通过恢复RAG-1、RAG-2分子的表达挽救功能性淋巴细胞的分化、发育,探讨从基因水平上根治RAG-免疫缺陷病的技术方法,为进一步进行基因治疗打下基础。方法:(1)采用RT-PCR方法克隆人类RAG-1、RAG-2编码基因,同时构建RAG-1、RAG-2真核...
目的:通过恢复RAG-1、RAG-2分子的表达挽救功能性淋巴细胞的分化、发育,探讨从基因水平上根治RAG-免疫缺陷病的技术方法,为进一步进行基因治疗打下基础。方法:(1)采用RT-PCR方法克隆人类RAG-1、RAG-2编码基因,同时构建RAG-1、RAG-2真核表达载体;(2)采用转染方法得到转染细胞体,使目的基因在人类细胞得到表达。结果:阳性克隆的测序结果与人类RAG-1、RAG-2基因完全相同,并且分别在获得重组细胞中检测到782 bp的人类RAG-1 mRNA转录产物和378 bp的人类RAG-2 mRNA转录产物,而pcDNA3.1空白对照未检测到任何hRAG-1 mRNA。结论:成功克隆了人类RAG-1、RAG-2基因,并在转染的人类细胞中获得了外源RAG-1、RAG-2的mRNA表达。
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关键词
重组
激活
基因
-1(
rag
-1)
重组
激活
基因
-2(
rag
-2)
真核表达载体
基因
表达
下载PDF
职称材料
题名
尼罗罗非鱼整胚原位杂交技术的建立和初步应用
被引量：
3
1
作者
曹建萌
卢迈新
叶星
曾祖聪
高风英
机构
中国水产科学研究院珠江水产研究所
上海海洋大学水产与生命学院
出处
《水产学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第11期1847-1854,共8页
基金
现代农业产业技术体系专项(CARS-49)
国家自然科学基金(31272688)
广东省科技计划项目(2012A020602017)
文摘
为了研究尼罗罗非鱼胚胎发育和器官形成过程中基因功能和基因表达图式,本研究建立了尼罗罗非鱼的整胚原位杂交流程。尼罗罗非鱼的胚胎具有卵黄大、不透明、色素出现早等特点,因此现有鱼类整胚原位杂交方法不能完全适用于尼罗罗非鱼的胚胎,故本研究做了相应的调整和优化:通过提高H2O2的浓度和添加KOH,改良了尼罗罗非鱼胚胎的色素去除方法;使用冷丙酮代替蛋白酶K在提高胚胎通透性的同时保持胚胎完整;减少了探针回收和抗体回收后的洗涤次数,完善了结果的图像采集和胚胎保存方案。使用尼罗罗非鱼的重组激活基因Rag1作为探针基因,整胚原位杂交结果显示Rag1基因表达的位置与已报道的斑马鱼和日本青鳉的Rag1基因在胚胎中的表达位置高度保守,胚胎完整,基因表达位置清晰可见,表明此套尼罗罗非鱼的整胚原位杂交技术流程成功有效。
关键词
尼罗罗非鱼
整胚原位杂交
胚胎发育
重组
激活
基因
(
rag
1)
Keywords
Oreochromis niloticus
whole mount in situ hybridization
embryonic development
recombination activating gene
1
(
rag
1
)
分类号
S917.4 [农业科学—水产科学]
下载PDF
职称材料
题名
Rag1、Rag2基因缺陷小鼠的构建及在异种肿瘤移植中的应用
2
作者
沈如凌
石嘉豪
盛哲津
冯晓龙
吴文婷
费俭
机构
同济大学生命科学与技术学院
上海南方模式生物研究中心
出处
《实验动物与比较医学》
CAS
2016年第4期263-269,279,共8页
基金
上海市科委科研计划项目（14431904600,13DZ2280600）
文摘
目的 建立重组激活基因,Rag1和Rag2基因缺陷小鼠模型,并对其表型和异种肿瘤移植的成瘤性进行分析.方法 通过传统的胚胎干细胞（ES）细胞打靶、囊胚注射方式,分别构建Rag1和Rag2基因缺陷小鼠模型;通过流式细胞术对缺陷小鼠外周血T/B淋巴细胞含量进行检测;通过外源异种肿瘤细胞移植实验,对移植肿瘤细胞的成瘤性进行评价.结果 建立了Rag1和Rag2基因缺陷小鼠模型,两种基因突变纯合子小鼠模型外周血中T、B淋巴细胞含量较野生型小鼠显著降低;人源肿瘤细胞A549在上述两种基因突变纯合子小鼠中较BALB/c-nu（裸小鼠）或（NOD-SCID）非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷小鼠表现出更强的成瘤性.结论 分别成功建立了Rag1和Rag2基因缺陷小鼠模型,两种小鼠模型均发生了T、B淋巴细胞生成障碍,导致免疫系统严重缺陷,可作为异种外源肿瘤移植的受体,用于小鼠荷瘤模型的建立.
关键词
重组
激活
基因
(
rag
1
基因
)
rag
2
基因
基因
缺陷
免疫缺陷
Recombination-activating
GENES
(
rag
l
gene)
Keywords
Recombination-activating genes （
rag
l gene）
rag
2 gene
Gene defect
Immunodeficiency
分类号
R73-3 [医药卫生—肿瘤]
下载PDF
职称材料
题名
外源性重组激活基因在人类细胞中的表达研究
3
作者
曾艳
孙洪海
王敏
刘旭
严丹丹
孙龙飞
刘志超
韦星呈
机构
沈阳医学院
辽宁省残疾人服务中心
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第16期2001-2005,共5页
基金
国家自然科学基金项目(30571694)
辽宁省教育厅科学研究一般项目(L2011180)。
文摘
目的:通过恢复RAG-1、RAG-2分子的表达挽救功能性淋巴细胞的分化、发育,探讨从基因水平上根治RAG-免疫缺陷病的技术方法,为进一步进行基因治疗打下基础。方法:(1)采用RT-PCR方法克隆人类RAG-1、RAG-2编码基因,同时构建RAG-1、RAG-2真核表达载体;(2)采用转染方法得到转染细胞体,使目的基因在人类细胞得到表达。结果:阳性克隆的测序结果与人类RAG-1、RAG-2基因完全相同,并且分别在获得重组细胞中检测到782 bp的人类RAG-1 mRNA转录产物和378 bp的人类RAG-2 mRNA转录产物,而pcDNA3.1空白对照未检测到任何hRAG-1 mRNA。结论:成功克隆了人类RAG-1、RAG-2基因,并在转染的人类细胞中获得了外源RAG-1、RAG-2的mRNA表达。
关键词
重组
激活
基因
-1(
rag
-1)
重组
激活
基因
-2(
rag
-2)
真核表达载体
基因
表达
Keywords
Recombination activating gene-
1
(
rag
-
1
)
Recombination activating gene-2(
rag
-2)
Eukaryotic expression vector
Gene expression
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
尼罗罗非鱼整胚原位杂交技术的建立和初步应用
曹建萌
卢迈新
叶星
曾祖聪
高风英
《水产学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
3
下载PDF
职称材料
2
Rag1、Rag2基因缺陷小鼠的构建及在异种肿瘤移植中的应用
沈如凌
石嘉豪
盛哲津
冯晓龙
吴文婷
费俭
《实验动物与比较医学》
CAS
2016
0
下载PDF
职称材料
3
外源性重组激活基因在人类细胞中的表达研究
曾艳
孙洪海
王敏
刘旭
严丹丹
孙龙飞
刘志超
韦星呈
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022
0
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职称材料
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