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基于氧碳平衡的重组巴氏毕赤酵母碳源代谢分析 被引量：7
1
作者 郭美锦 储炬 +2 位作者 庄英萍 杭海峰 张嗣良 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第12期1724-1728,共5页
基于氧元素和碳元素平衡对重组巴氏毕赤酵母 (Pichiapastoris)的不同碳源代谢进行了分析 .结果表明 :以甘油为惟一碳源 ,当比生长速率由 0 0 6 4h-1增大到 0 2 5 7h-1时 ,用于细胞生长的甘油代谢比速率由1 36mmol·g-1·h-1... 基于氧元素和碳元素平衡对重组巴氏毕赤酵母 (Pichiapastoris)的不同碳源代谢进行了分析 .结果表明 :以甘油为惟一碳源 ,当比生长速率由 0 0 6 4h-1增大到 0 2 5 7h-1时 ,用于细胞生长的甘油代谢比速率由1 36mmol·g-1·h-1增大到 5 4 6mmol·g-1·h-1,而用于细胞维持代谢流比例降低了 10 4 % ,同时甘油用于合成代谢和分解代谢的比速率均增大 ,但是分解代谢流比例逐渐下降 ,而合成代谢流比例却升高了 5 9% ;以甲醇为碳源进行表达重组人血清白蛋白恒化培养时 ,当比生长速率由 0 0 19h-1增大至 0 0 4 6h-1时 ,用于产物重组人血清白蛋白形成的比速率呈先增大后减少的趋势 ,在比生长速率为 0 0 2 7h-1时最大 ,为 0 31mmol·g-1·h-1,占甲醇总代谢流的 13 2 % . 展开更多
关键词 氧碳元素平衡 重组巴氏毕赤酵母 代谢流分析 恒化培养 重组人血清白蛋白
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基因工程菌Pichia pastoris高密度发酵表达重组人血清白蛋白 被引量：4
2
作者 郭美锦 庄英萍 +2 位作者 吴康华 储炬 张嗣良 《华东理工大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期101-103,116,共4页
在摇瓶条件下对基因工程菌 Pichia pastoris的发酵条件进行了实验 ,并根据摇瓶发酵的优化结果进行了补料分批高密度发酵。在分批发酵时 ,接种量为 1 0 %且种子细胞光密度 ( OD60 0 )为2 0左右时 ,细胞生长的延迟期约为 2 .1 1 h,细胞生... 在摇瓶条件下对基因工程菌 Pichia pastoris的发酵条件进行了实验 ,并根据摇瓶发酵的优化结果进行了补料分批高密度发酵。在分批发酵时 ,接种量为 1 0 %且种子细胞光密度 ( OD60 0 )为2 0左右时 ,细胞生长的延迟期约为 2 .1 1 h,细胞生长光密度与培养时间的关系模型为 :y=0 .7841 e0 .2 319t(线性相关系数 r=0 .9936) ;在补料发酵时细胞浓度可达 1 1 5 g/L～ 1 60 g/L (干重 ) ,在 1 2 0 h重组人血清白蛋白表达量达 3. 展开更多
关键词 重组巴氏毕赤酵母 高密度发酵 重组人血清蛋白 基因表达 分批发酵 补料发酵
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重组Pichia酵母(Mut^S)发酵过渡阶段关键酶活分析 被引量：3
3
作者 胡光星 郭美锦 +3 位作者 储炬 杭海峰 庄英萍 张嗣良 《华东理工大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期392-397,共6页
重组Pichia酵母表达系统的发酵存在从利用甘油为碳源生长到利用甲醇为碳源表达外源蛋白的发酵表达过渡阶段。Pichia酵母过渡阶段碳源代谢途径关键酶酶活分析表明:甲醇诱导3hAOX2酶活为0,4h时突然增加到0.05U,继续诱导,酶活缓慢增加;在... 重组Pichia酵母表达系统的发酵存在从利用甘油为碳源生长到利用甲醇为碳源表达外源蛋白的发酵表达过渡阶段。Pichia酵母过渡阶段碳源代谢途径关键酶酶活分析表明:甲醇诱导3hAOX2酶活为0,4h时突然增加到0.05U,继续诱导,酶活缓慢增加;在过渡阶段甲醛脱氢酶和6-P-葡萄糖脱氢酶分别增加了6.1倍、2.5倍,而丙酮酸脱氢酶和异柠檬酸脱氢酶分别下降为原酶活的29.4%及16.4%,表明甲醇诱导后甲醇完全氧化代谢途径得到强化,而糖酵解途径和三羧酸循环途径代谢作用减弱。 展开更多
关键词 重组巴氏毕赤酵母 代谢途径 过渡阶段 植酸酶
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重组巴氏毕赤酵母高密度发酵表达人乳铁蛋白的研究
4
作者 应革 吴淑华 +4 位作者 王静 赵小东 陈建明 张晓光 侯云德 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期181-185,共5页
目的　在保持生物学活性的前提下 ,实现人乳铁蛋白基因在巴氏毕赤酵母中的高密度发酵表达。方法　从人外周血中分离中性粒细胞 ,提取总RNA ,RT PCR方法获得人乳铁蛋白前体全长cDNA序列 ,适当改造后克隆至巴氏毕赤酵母表达载体pPIC 3 5K... 目的　在保持生物学活性的前提下 ,实现人乳铁蛋白基因在巴氏毕赤酵母中的高密度发酵表达。方法　从人外周血中分离中性粒细胞 ,提取总RNA ,RT PCR方法获得人乳铁蛋白前体全长cDNA序列 ,适当改造后克隆至巴氏毕赤酵母表达载体pPIC 3 5K上并转化酵母宿主KM71,双层滤膜法筛选高表达株进行补料分批发酵 ,对发酵产物的理化及生物学活性进行初步检测。结果　筛选到一株人乳铁蛋白表达量较高的重组巴氏毕赤酵母p3 5 k 7并对其进行了补料分批发酵。整个发酵历时约 9d ,菌浓吸光度A6 0 0 值最高达到 2 6 0以上 ,重组人乳铁蛋白最高表达量为 115mg L ,是摇瓶培养条件下的 7 6 7倍。结论　成功实现了人乳铁蛋白基因在巴氏毕赤酵母中的高密度发酵表达 ,并对发酵参数的优化进行了初步探索。 展开更多
关键词 重组巴氏毕赤酵母 高密度发酵 人乳铁蛋白 基因表达 发酵参数
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