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胰岛素样生长因子-1对糖尿病勃起功能障碍大鼠的治疗作用研究 被引量：1
1
作者 潘卫兵 朱琳 +4 位作者 何朝辉 朱斌 曹石金 谢礼仁 金岩 《现代生物医学进展》 CAS 2016年第35期6831-6834,共4页
目的：研究携有胰岛素样生长因子-1（IGF-1）基因的重组单纯疱疹病毒-1（HSV-1）载体对糖尿病大鼠勃起功能障碍（erectile dysfunction,ED）病变的治疗作用。方法：选用8周龄雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠,应用链脲佐菌素（Streptozotoc... 目的：研究携有胰岛素样生长因子-1（IGF-1）基因的重组单纯疱疹病毒-1（HSV-1）载体对糖尿病大鼠勃起功能障碍（erectile dysfunction,ED）病变的治疗作用。方法：选用8周龄雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠,应用链脲佐菌素（Streptozotocin,STZ）诱导糖尿病8周,阿朴吗啡（apomorphine,APO,80 ug/kg）皮下注射进行阴茎勃起试验,筛选出糖尿病ED大鼠模型。随机选取SPF级雄性SD大鼠10只为CN组,从筛选出DMED大鼠模型中随机选取40只,分为DM组,IGF-1组,INS组,IGF-1＋INS组,每组10只。DM组、IGF-1组、INS组、IGF-1＋INS组分别或同时每只给予胰岛素6 U/d和（或）5×10^8 pfu单纯HSV-1-IGF-1载体。基因治疗21天后,对各组大鼠的阴茎海绵体内压（ICP）进行测定。结果：电刺激诱导ICP值在CN组为（43.40±3.26）cm H2O,DM组为（13.46±1.70）cm H2O,IGF-1组（25.34±1.93）cm H2O,INS组（28.79±2.01）cm H2O,IGF-1＋INS组（42.21±2.13）cm H2O。各组的IGF-1阳性细胞百分比分别为CN组为（68.24±7.16）,DM组为（55.74±5.02）,IGF-1组（71.08±7.08）,INS组（70.35±3.89）,IGF-1＋INS组（72.90±2.64）。结论：糖尿病大鼠ED的发生与发展可能与大鼠阴茎中IGF-1表达水平降低有关,通过引入可表达的IGF-1基因和INS治疗可在一定程度上改善大鼠阴茎勃起功能。 展开更多
关键词 胰岛素样生长因子-1 重组单纯疱疹病毒-1载体 糖尿病 勃起功能障碍
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重组复制型溶瘤单纯疱疹病毒人细胞巨噬细胞集落刺激因子的质量研究 被引量：5
2
作者 高凯 付志浩 +4 位作者 李永红 王兰 陶磊 毕华 饶春明 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第19期1520-1525,共6页
目的研究建立重组复制型溶瘤单纯疱疹病毒人细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF,HSV1/GM-CSF)的质控方法与质量标准。方法采用限制性内切酶酶切与PCR法,对GM-CSF基因、单纯疱疹病毒载体ICP 34.5、ICP6、ICP47等改造结构进行鉴定。采用A26... 目的研究建立重组复制型溶瘤单纯疱疹病毒人细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF,HSV1/GM-CSF)的质控方法与质量标准。方法采用限制性内切酶酶切与PCR法,对GM-CSF基因、单纯疱疹病毒载体ICP 34.5、ICP6、ICP47等改造结构进行鉴定。采用A260紫外吸收法检测病毒颗粒数;pfu法测定HSV1/GM-CSF感染活性。HSV1/GM-CSF体外感染Vero细胞后,分别测定感染上清中GM-CSF表达量以及表达产物的生物学活性;测定HSV1/GM-CSF对肿瘤细胞MCF7的体外杀伤活性;HSV1/GM-CSF分别以相同MOI感染MCF7与二倍体人胚肺成纤维细胞MRC5后,分别测定细胞裂解上清中子代病毒的感染活性,并以子代病毒的感染活性比值来分析该制品在肿瘤细胞中的增殖复制能力。采用PCR法控制野生型单纯疱疹病毒等外源因子的残留。结果对重组HSV1/GM-CSG基因组的酶切、以及对所携带的GM-CSF基因、ICP 34.5、ICP6、ICP47基因改造区的PCR鉴定结果与理论值相符。病毒载体颗粒数为4.5×1010VP.mL-1,感染活性为4.3×107pfu.mL-1。HSV1/GM-CSF以MOI 0.01感染Vero细胞72 h后,ELISA检测上清中GM-CSF表达量为228 ng.mL-1,表达产物的生物学活为4.3×103U.mL-1。该基因治疗制剂对人乳腺癌肿瘤细胞MCF7体外杀伤的MOIIC50为0.08。以相同MOI感染并经pfu法检测,HSV1/GM-CSF在人乳腺癌肿瘤细胞MCF7与人胚肺成纤维二倍体细胞MRC5的增殖比值为308。未检出野生型单纯疱疹病毒。其他各项指标均符合《人基因治疗研究和制剂质量控制技术指导原则》及2005年版《中国药典》(三部)要求。结论初步建立了HSV1/GM-CSF的质控方法和质量标准,并已用于该制品的质量控制。 展开更多
关键词 重组单纯疱疹病毒载体 肿瘤溶瘤基因治疗 GM—CSF 质量控制
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