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重组人成骨蛋白-1在大肠杆菌中的高效表达及复性 被引量：8
1
作者 车婧 韩金祥 +1 位作者 王世立 梁浩 《中国药学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第13期1023-1026,共4页
目的研究重组人成骨蛋白-1(rhOP-1)的发酵、纯化和复性。方法将构建好的重组质粒pBV221转化EscherichiacoliBL21,迅速升温至42℃诱导rhOP-1以包涵体的形式高效表达。裂菌后利用6mol·L-1尿素溶解目的蛋白,经SP-FastFlow离子交换色... 目的研究重组人成骨蛋白-1(rhOP-1)的发酵、纯化和复性。方法将构建好的重组质粒pBV221转化EscherichiacoliBL21,迅速升温至42℃诱导rhOP-1以包涵体的形式高效表达。裂菌后利用6mol·L-1尿素溶解目的蛋白,经SP-FastFlow离子交换色谱纯化后,利用cysteine/cystine对单体rhOP-1透析复性。结果rhOP-1的表达量占菌体总蛋白质量的33%,纯化后纯度可达98%,活性得到有效恢复。结论建立了rhOP-1发酵、纯化与复性的方法,获得高表达、高纯度、有活性的rhOP-1。 展开更多
关键词 重组人成骨蛋白 纯化 复性
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重组人成骨蛋白-1的离子交换及分子排阻色谱法纯化及其复性研究 被引量：1
2
作者 赵甜娜 王世立 韩金祥 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期70-74,共5页
经发酵大量表达重组人成骨蛋白-1(rhOP-1)。SDS-PAGE发现rhOP-1表达量占细菌总蛋白的35%。菌体经裂解、洗涤后,用8mol/L尿素溶解包涵体,离心后提取目的蛋白。经离子交换色谱法对变性状态下的目的蛋白进行纯化,绝大部分杂蛋白被去除,目... 经发酵大量表达重组人成骨蛋白-1(rhOP-1)。SDS-PAGE发现rhOP-1表达量占细菌总蛋白的35%。菌体经裂解、洗涤后,用8mol/L尿素溶解包涵体,离心后提取目的蛋白。经离子交换色谱法对变性状态下的目的蛋白进行纯化,绝大部分杂蛋白被去除,目的蛋白纯度达93%以上。为进一步提高目的蛋白浓度,采用分子排阻色谱法对目的蛋白进行再次纯化,纯度达98%以上。利用降低尿素梯度的方法对纯化的蛋白进行复性,二聚体的含量在50%以上。Westernblot证明了复性后的目的蛋白以单体和有活性的二聚体的形式存在。 展开更多
关键词 重组人成骨蛋白-1 包涵体 离子交换色谱分子排阻色谱复性
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纳米羟基磷灰石纤维蛋白凝胶复合重组人成骨蛋白1修复骨缺损 被引量：3
3
作者 赵玉驰 王大平 +5 位作者 赖苑威 熊建义 王力刚 朱伟民 黄仁辉 袁杰 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1360-1364,共5页
背景:纳米级的羟基磷灰石纤维蛋白凝胶材料与人体内组织成分更为相似,具有良好的生物与力学性能,但缺乏骨诱导作用。目的:观察纳米羟基磷灰石纤维蛋白凝胶/重组人成骨蛋白1复合人工骨的骨缺损修复能力。方法:制备新西兰大白兔单侧桡骨... 背景:纳米级的羟基磷灰石纤维蛋白凝胶材料与人体内组织成分更为相似,具有良好的生物与力学性能,但缺乏骨诱导作用。目的:观察纳米羟基磷灰石纤维蛋白凝胶/重组人成骨蛋白1复合人工骨的骨缺损修复能力。方法:制备新西兰大白兔单侧桡骨缺损模型后,以数字表法随机分为3组,分别植入不同材料行骨缺损修复:纳米羟基磷灰石纤维蛋白凝胶/重组人成骨蛋白1人工骨组、纳米羟基磷灰石/纤维蛋白凝胶组、空白对照组(未植入任何材料)。术后4,8,12周行大体标本观察、X射线、扫描电镜、放射性核素骨扫描及生物力学测试,比较各组材料修复骨缺损的能力。结果与结论:术后4,8,12周,纳米羟基磷灰石纤维蛋白凝胶/重组人成骨蛋白1人工骨组X射线评分、成骨效果、放射性核素聚集强度、生物力学强度均高于纳米羟基磷灰石/纤维蛋白凝胶组(P < 0.05)。空白对照组骨缺损区无骨性连接,骨端硬化,骨缺损未能修复。说明纳米羟基磷灰石纤维蛋白凝胶/重组人成骨蛋白1复合人工骨具有良好的骨缺损修复能力,有望成为一种理想的骨缺损修复材料。 展开更多
关键词 纤维蛋白凝胶 羟基磷灰石 重组人成骨蛋白1 人工骨 骨缺损
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重组人成骨蛋白-1的纯化及其生物学活性研究 被引量：1
4
作者 王国栋 王世立 +4 位作者 韩金祥 孙杰 车婧 赵甜娜 李俊玲 《山东医药》 CAS 北大核心 2006年第14期1-3,共3页
目的 获得高纯度的重组人成骨蛋白-1（rhOP-1），探讨大肠杆菌表达rhOP-1的生物学活性。方法 表达rhOP-1工程菌经发酵后，裂菌、提取包涵体，层析法纯化蛋白并逐步降低尿素浓度透析复性。采用改良MTT法检测rhOP-1对NIH3T3细胞增殖和对... 目的 获得高纯度的重组人成骨蛋白-1（rhOP-1），探讨大肠杆菌表达rhOP-1的生物学活性。方法 表达rhOP-1工程菌经发酵后，裂菌、提取包涵体，层析法纯化蛋白并逐步降低尿素浓度透析复性。采用改良MTT法检测rhOP-1对NIH3T3细胞增殖和对硝基苯酚法（PNPP）检测rhOP-1对细胞碱性磷酸酶（ALP）活性的影响，同时在体内通过小鼠肌袋埋植实验测定rhOP-1活性。结果 经纯化的rhOP-1纯度可达98％。体外rhOP-1浓度在0．06～6μg／ml可明显促进细胞生长和ALP活性；体内rhOP-1埋植剂植入小鼠肌间隙2周后，可明显提高体内钙含量，且成骨趋势明显。结论 原核表达的rhOP-1具有良好的生物学活性。 展开更多
关键词 重组人成骨蛋白-1 纯化 细胞增殖 碱性磷酸酶 生物学活性
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不同载体对重组人成骨蛋白-1骨诱导活性的影响(英文) 被引量：1
5
作者 王敏 韩金祥 宋长征 《中国临床康复》 CSCD 2004年第5期963-965,T004,共4页
背景:重组人成骨蛋白-1(rhOP-1)的载体目前仅限于胶原,不同载体对其骨诱导活性的影响还未被证实。目的:通过不同材料作为rhOP-1载体的异位骨诱导活性的比较研究,筛选一种较为理想的载体材料。设计:完全随机、自身和相互对照研究。地点... 背景:重组人成骨蛋白-1(rhOP-1)的载体目前仅限于胶原,不同载体对其骨诱导活性的影响还未被证实。目的:通过不同材料作为rhOP-1载体的异位骨诱导活性的比较研究,筛选一种较为理想的载体材料。设计:完全随机、自身和相互对照研究。地点和对象:实验在本中心动物实验室完成,实验对象为96只雄性昆明种小鼠。干预:将rhOP-1分别与无活性脱钙骨基质(DBM)、羟基磷灰石(HA)、3种α-聚酯类(PLA,PLA-PEG,PLGA)复合,植入小鼠股部内侧肌间隙,3周后取材,比较5种载体对rhOP-1骨诱导活性的影响。主要观察指标:通过组织学检查、碱性磷酸酶(ALP)及钙含量的测定比较新骨的成熟度和成骨率。结果:rhOP-1/DBM(A)组、单独植入rhOP-1(F)组和真核表达OP-1注入(对照Ⅵ)组均有骨组织生成。A组可见大量骨小梁、骨髓腔和板层骨,血管和骨髓丰富;F组出现编织骨;对照组Ⅵ见成熟的致密骨组织;其余4组复合组可见间充质细胞增生,未见骨组织;载体部分吸收。ALP水平和Ca含量,各复合组均高于对照组,A组高于其他复合组(F=6.250,P<0.05);F组与对照Ⅵ差异无显著性意义(F=2.704,P>0.05);除rhOP-1/DBM组以外,其他各复合组与F组之间差异均无显著性意义(F=0.590,P>0.05)。结论:DBM为rhOP-1的良好载体;DBM/rhOP-1对临床上促进骨缺损的修复是十分有利的? 展开更多
关键词 载体 重组人成骨蛋白-1 骨诱导活性 无活性脱钙骨基质 羟基磷灰石 d-聚酯类 生物相容性
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重组人成骨蛋白-1骨修复材料的毒性研究
6
作者 赵甜娜 韩金祥 +3 位作者 王世立 贾金秋 张维东 栾中华 《山东医药》 CAS 北大核心 2006年第29期15-17,共3页
目的探讨重组人成骨蛋白-1(rhOP-1)明胶海绵骨修复材料的体内毒性反应,为其临床应用奠定基础。方法选用昆明种小鼠80只,雌雄各半。随机分成对照组和观察Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,每组20只,均予乙醚麻醉,无菌条件下将rhOP-1/明胶海绵复合物置于观察... 目的探讨重组人成骨蛋白-1(rhOP-1)明胶海绵骨修复材料的体内毒性反应,为其临床应用奠定基础。方法选用昆明种小鼠80只,雌雄各半。随机分成对照组和观察Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,每组20只,均予乙醚麻醉,无菌条件下将rhOP-1/明胶海绵复合物置于观察Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组小鼠股部肌间隙,剂量分别为3、10、25 m g,术后不用抗生素。正常饲养2、4周时观察各组血液、血生化指标改变及主要脏器的组织形态和脏器系数变化。结果各观察组术后3 d活动力差,食欲减少,7 d后恢复。观察组与对照组各血液学指标结果无统计学差异;血生化指标中除蛋白含量、ALT、A ST观察组与对照组差异有统计学意义(P<0.05)外,其余指标未见异常;4周时两组血液、血生化指标及组织学形态、脏器系数差异无统计学意义(P均>0.05)。结论rhOP-1明胶海绵骨修复材料体内使用无毒、安全、可靠。 展开更多
关键词 重组人成骨蛋白-1 毒理学 骨修复材料
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重组人成骨蛋白-1复性条件的优化
7
作者 李俊玲 王世立 +2 位作者 韩金祥 王国栋 赵甜娜 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第6期442-446,共5页
目的优化重组人成骨蛋白-1(rhOP-1)包涵体蛋白的复性条件。方法将表达rhOP-1的大肠杆菌菌体在冰浴下超声裂解,分离提取包涵体,用8mol/L尿素溶解,纯化后进行梯度透析复性。利用TotalLab软件分析目的蛋白二聚体的含量,用体内法和体外法测... 目的优化重组人成骨蛋白-1(rhOP-1)包涵体蛋白的复性条件。方法将表达rhOP-1的大肠杆菌菌体在冰浴下超声裂解,分离提取包涵体,用8mol/L尿素溶解,纯化后进行梯度透析复性。利用TotalLab软件分析目的蛋白二聚体的含量,用体内法和体外法测定其生物学活性。结果经纯化后,目的蛋白纯度达97%以上。最佳复性条件为4℃,pH9.0,蛋白浓度为0.4～0.8mg/ml,尿素浓度为2mol/L,L-Arg浓度为0.4mol/L;目的蛋白复性率达75%以上,复性后蛋白具有较高的生物学活性。结论已确定了rhOP-1包涵体梯度透析复性的最佳条件。 展开更多
关键词 重组人成骨蛋白-1 包涵体 复性
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可溶性重组人成骨蛋白-1的制备
8
作者 王素红 韩金祥 +3 位作者 王世立 张翠 葛鲁娜 丁宁 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第7期605-607,共3页
目的制备可溶性重组人成骨蛋白-1(rhOP-1),并尝试制备注射制剂。方法rhOP-1工程菌经发酵表达,收集菌体,提取包涵体,用SP-FF阳离子层析柱纯化。取纯度达95%以上的rhOP-1蛋白,透析复性,加入L-精氨酸作为复性助溶剂,制备成冻干粉末,以不加... 目的制备可溶性重组人成骨蛋白-1(rhOP-1),并尝试制备注射制剂。方法rhOP-1工程菌经发酵表达,收集菌体,提取包涵体,用SP-FF阳离子层析柱纯化。取纯度达95%以上的rhOP-1蛋白,透析复性,加入L-精氨酸作为复性助溶剂,制备成冻干粉末,以不加助溶剂的rhOP-1为对照。将制备的冻干粉末复溶后,观察rhOP-1溶解性,并检测其活性。结果复性液中加入L-精氨酸的复性rhOP-1蛋白浓度为0.5mg/ml,回收率可达60%,冻干粉末复溶后,溶解性及rhOP-1活性良好。结论用此复性方法制备的rhOP-1溶液作为注射剂,有较好的应用前景。 展开更多
关键词 重组人成骨蛋白-1 L-精氨酸 复性 注射剂
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原核表达重组人OP-1促进拔牙创愈合的实验研究
9
作者 肖水清 卞翠荣 刘萍 《中国口腔种植学杂志》 2004年第4期155-159,共5页
目的 :检测原核表达基因工程重组人OP -1 (rhop-1)促进拔牙创愈合 ,减少牙槽嵴吸收的的效能。方法 :采用大白兔建立拔牙创的动物模型 ,以明胶海绵作为载体 ,将大肠杆菌原核表达的重组人OP -1与之复合后植入即刻拔除牙齿的牙槽窝内进行... 目的 :检测原核表达基因工程重组人OP -1 (rhop-1)促进拔牙创愈合 ,减少牙槽嵴吸收的的效能。方法 :采用大白兔建立拔牙创的动物模型 ,以明胶海绵作为载体 ,将大肠杆菌原核表达的重组人OP -1与之复合后植入即刻拔除牙齿的牙槽窝内进行干预治疗 ,通过观察其组织学改变、钙含量及碱性磷酸酶活性测定的变化 ,探讨原核表达的基因工程重组产品rhOP -1是否促进拔牙创的愈合修复。结果 :大体观察结果显示 :两组牙槽嵴高度的吸收差异有显著性 ;组织学HE切片显示 :实验组的骨创愈合比对照组大约提前4～6周;碱性磷酸酶 (ALP)活性及钙含量测定均显示实验组均明显高于对照组 ,差异有统计学意义。结论 :原核表达基因工程重组人骨形态发生蛋白具有良好的促进骨创愈合。 展开更多
关键词 原核表达 重组人成骨蛋白-1 拔牙创
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明胶海绵复合重组人成骨蛋白-1的骨修复材料免疫原性及肌肉刺激性实验研究
10
作者 赵甜娜 韩金祥 +1 位作者 王世立 吴坚美 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 2006年第4期212-214,共3页
目的考察以明胶海绵为载体的重组人成骨蛋白-1(rhOP-1)骨修复材料的免疫原性及肌肉刺激性。方法以明胶海绵为载体制备rhOP-1骨修复材料,间接ELISA方法观察该骨修复材料植入小鼠体内的免疫原性反应,病理切片观察其对周围肌肉的影响及形... 目的考察以明胶海绵为载体的重组人成骨蛋白-1(rhOP-1)骨修复材料的免疫原性及肌肉刺激性。方法以明胶海绵为载体制备rhOP-1骨修复材料,间接ELISA方法观察该骨修复材料植入小鼠体内的免疫原性反应,病理切片观察其对周围肌肉的影响及形态变化。结果ELISA结果表明,此法制备的以明胶海绵为载体的rhOP-1骨修复材料未引起小鼠的特异性抗体产生。植入部位肌肉虽出现炎细胞浸润现象,但炎症反应呈可逆性,未发现肌肉组织的坏死,且组织钙化现象明显。结论明胶海绵复合rhOP-1的骨修复材料在免疫原性和肌肉刺激性方面安全可靠。 展开更多
关键词 重组人成骨蛋白-1 免疫原性 肌肉刺激性
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