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人IL-2信号肽基因增强柯萨奇病毒B3型VP1 DNA疫苗诱导的中和抗体应答 被引量：11
1
作者 方艳辉 金玉怀 +3 位作者 王永祥 于丹军 金士香 谢立新 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期202-205,共4页
目的　将人白细胞介素 2 (hIL 2 )信号肽基因与柯萨奇病毒B组 3型 (CVB3)的VP1基因融合 ,构建分泌型VP1真核表达质粒pcDNA3/sVP1;免疫小鼠后 ,通过测定血清特异性中和抗体效价及对致死量CVB3攻击的保护作用 ,评价疫苗的免疫效果。方法... 目的　将人白细胞介素 2 (hIL 2 )信号肽基因与柯萨奇病毒B组 3型 (CVB3)的VP1基因融合 ,构建分泌型VP1真核表达质粒pcDNA3/sVP1;免疫小鼠后 ,通过测定血清特异性中和抗体效价及对致死量CVB3攻击的保护作用 ,评价疫苗的免疫效果。方法　采用重叠区基因扩增法 ,将hIL 2信号肽基因连同其下游 11个氨基酸残基的基因与CVB3VP1基因拼接 ,获得分泌型VP1(sVP1)的基因 ;将sVP1基因克隆至真核表达载体pcDNA3,构建分泌型VP1真核表达质粒pcDNA3/sVP1;肌注免疫小鼠 ,测定血清中CVB3特异性中和抗体的效价 ;第 3次免疫后 2周 ,腹腔内注射 10 0 0TCID50 的CVB3,观察小鼠生存情况。结果　成功构建了分泌型VP1真核表达质粒pcDNA3/sVP1,插入的sVP1基因中含有hIL 2信号肽及其下游 11个氨基酸残基的基因以及VP1基因 ;pcDNA3/sVP1可比对照质粒pcDNA3/VP1诱导小鼠产生更高水平的中和抗体。结论　hIL 2信号肽基因增强了柯萨奇病毒B3型VP1DNA疫苗诱导的中和抗体应答 。 展开更多
关键词 DNA疫苗 柯萨奇病毒 信号肽 基因克隆 中和抗体 白细胞介素-2 重叠区基因扩增法
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抗菌肽Japonicin Ⅱ基因的克隆及其在Pichia pastoris中的表达 被引量：3
2
作者 尹佳 詹冬玲 +1 位作者 崔敬爱 陈晓平 《中国酿造》 CAS 北大核心 2009年第12期23-25,共3页
采用重叠区基因扩增法(SOE)人工设计和合成抗菌肽JaponicinⅡ基因。按正确的阅读框架定向克隆至真核表达载体pPICZαA上,构建出的重组质粒pPICZαA-Jap,经电击法转化至GS115宿主菌,Zeocin筛选的阳性克隆用甲醇诱导表达,用Tricine-SDS-P... 采用重叠区基因扩增法(SOE)人工设计和合成抗菌肽JaponicinⅡ基因。按正确的阅读框架定向克隆至真核表达载体pPICZαA上,构建出的重组质粒pPICZαA-Jap,经电击法转化至GS115宿主菌,Zeocin筛选的阳性克隆用甲醇诱导表达,用Tricine-SDS-PAGE确定了产物的正确性;利用琼脂孔穴扩散法证明了表达产物具有抗菌活性。 展开更多
关键词 抗菌肽Japonicin Ⅱ 重叠区基因扩增法 克隆 表达 毕赤酵母菌
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