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人组蛋白α-氨基乙酰基转移酶Nat11表达纯化、晶体生长及底物结合研究
被引量：
1
1
作者
黄嘉欣
李海涛
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第11期193-200,共8页
α-氨基乙酰基转移酶11(Nat11)催化组蛋白H4和H2A氨基端乙酰化修饰,发挥着重要的表观遗传调控功能。将人Nat11基因构建到原核表达载体p SUMO中,转化入大肠杆菌BL21(DE3)进行重组表达。通过镍柱亲和层析等一系列体外纯化步骤,获得高纯度N...
α-氨基乙酰基转移酶11(Nat11)催化组蛋白H4和H2A氨基端乙酰化修饰,发挥着重要的表观遗传调控功能。将人Nat11基因构建到原核表达载体p SUMO中,转化入大肠杆菌BL21(DE3)进行重组表达。通过镍柱亲和层析等一系列体外纯化步骤,获得高纯度Nat11。利用等温滴定量热法(ITC),测得Nat11与底物多肽微摩尔量级结合常数。利用质谱技术,发现纯化后的Nat11结合有大肠杆菌内源产生的乙酰辅酶A或辅酶A,在ITC滴定过程中可以产生对多肽底物的乙酰化修饰,表明纯化获得的Nat11在溶液中具有酶活力。随后,对Nat11进行晶体生长研究,通过初筛优化获得蛋白截短体及底物-酶融合蛋白单晶。
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关键词
α-氨基乙酰基转移
酶
11
重组蛋白表达
蛋白聚集
酶
-
底物
结合
晶体生长
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职称材料
题名
人组蛋白α-氨基乙酰基转移酶Nat11表达纯化、晶体生长及底物结合研究
被引量：
1
1
作者
黄嘉欣
李海涛
机构
清华大学医学院基础医学系
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第11期193-200,共8页
基金
科技部"973"项目(2011CB965303)
2012教育部新世纪优秀人才支持计划
文摘
α-氨基乙酰基转移酶11(Nat11)催化组蛋白H4和H2A氨基端乙酰化修饰,发挥着重要的表观遗传调控功能。将人Nat11基因构建到原核表达载体p SUMO中,转化入大肠杆菌BL21(DE3)进行重组表达。通过镍柱亲和层析等一系列体外纯化步骤,获得高纯度Nat11。利用等温滴定量热法(ITC),测得Nat11与底物多肽微摩尔量级结合常数。利用质谱技术,发现纯化后的Nat11结合有大肠杆菌内源产生的乙酰辅酶A或辅酶A,在ITC滴定过程中可以产生对多肽底物的乙酰化修饰,表明纯化获得的Nat11在溶液中具有酶活力。随后,对Nat11进行晶体生长研究,通过初筛优化获得蛋白截短体及底物-酶融合蛋白单晶。
关键词
α-氨基乙酰基转移
酶
11
重组蛋白表达
蛋白聚集
酶
-
底物
结合
晶体生长
Keywords
Recombinant protein expression
Protein aggregation
Enzyme-substrate binding
Crystallization
分类号
Q55 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人组蛋白α-氨基乙酰基转移酶Nat11表达纯化、晶体生长及底物结合研究
黄嘉欣
李海涛
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
1
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职称材料
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