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应用核酸适配子检测细胞因子的新方法-ELONA法 被引量：7
1
作者 严馨蕊 高绪文 +1 位作者 姚立红 张智清 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期679-682,共4页
以人肿瘤坏死因子 (Humantumornecrosisfactor,hTNF α)特异性的核酸适配子为检测分子建立了酶联寡聚核苷酸吸附试验 (Enzyme linkedOligonucleotideassay ,ELONA)方法 ,用于hTNF α的检测。通过SELEX(SystematicEvolutionofLigandsbyEx... 以人肿瘤坏死因子 (Humantumornecrosisfactor,hTNF α)特异性的核酸适配子为检测分子建立了酶联寡聚核苷酸吸附试验 (Enzyme linkedOligonucleotideassay ,ELONA)方法 ,用于hTNF α的检测。通过SELEX(SystematicEvolutionofLigandsbyExponentialEnrichment)方法从随机RNA库中筛选到与hTNF α特异结合的RNA适配子。根据其序列 ,用体外转录方法合成生物素标记的RNA适配子 ,并对其进行了氨基修饰以增加其稳定性。以hTNF α的单克隆抗体为捕获分子 ,生物素标记的hTNF α特异性RNA适配子为检测分子建立了ELONA方法 ,并对这种检测方法的灵敏度、精密度和准确度等进行了分析。同时用ELONA和ELISA方法检测了正常人血清中的hTNF α水平 ,并对检测结果进行比较。结果显示 ,ELONA方法的灵敏度为 10 0pg mL ,具有较好的精密度和准确度。ELONA法的检测结果与ELISA法检测结果基本一致。该方法适用于血清。 展开更多
关键词 人肿瘤坏死因子 核酸适配子 细胞因子 酶联寡聚核苷酸吸附试验 生物素标记
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抗MRSA-PBP2a卵黄抗体的制备及酶联寡聚核苷酸吸附试验的建立 被引量：1
2
作者 孙誉芳 李宁 +3 位作者 孟祥英 王彰骄 张羽飞 乔晋娟 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第1期55-59,共5页
目的制备耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)青霉素结合蛋白2a(PBP2a)抗原的卵黄抗体IgY,建立检测MRSA的酶联寡聚核苷酸吸附试验(ELONA)方法。方法用大肠埃希菌原核表达并纯化PBP2a,采用胸部肌肉多点注射方式免疫产蛋母鸡,水稀释法粗提IgY,... 目的制备耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)青霉素结合蛋白2a(PBP2a)抗原的卵黄抗体IgY,建立检测MRSA的酶联寡聚核苷酸吸附试验(ELONA)方法。方法用大肠埃希菌原核表达并纯化PBP2a,采用胸部肌肉多点注射方式免疫产蛋母鸡,水稀释法粗提IgY,BCA法测定蛋白浓度,Western blot分析其特异性;以IgY抗体为捕获分子,以生物素标记的PBP2a特异性适配体为检测分子,建立检测MRSA的ELONA方法;对IgY包被量、生物素标记适配体用量及HRP标记链霉亲和素稀释度进行优化,测定该方法的灵敏度、特异性和重复性。结果成功表达和纯化PBP2a蛋白,Western blot显示IgY抗体能特异识别PBP2a蛋白。建立了检测MRSA的ELONA方法,其最佳包被用IgY稀释度为1∶1 600,生物素标记适配体用量为400nmol/L,HRP标记链霉亲和素稀释度为1∶2 000。优化的ELO-NA对MRSA的检测限为2.87×10~2 CFU/ml;重复性试验的变异系数为4.7%。用该方法检测34株临床分离的金黄色葡萄球菌,与梅里埃VITEK2Compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统分析结果一致性为100%。结论制备的抗MRSA PBP2a卵黄抗体具有较高特异性,基于该抗体建立的ELONA方法灵敏、特异、重复性好,可用于MRSA PBP2a的检测。 展开更多
关键词 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 青霉素结合蛋白2A 卵黄抗体 酶联寡聚核苷酸吸附试验
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