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胃食管反流性咳嗽患者气道黏膜与分泌物中神经肽含量的变化 被引量：34
1
作者 刘春丽 赖克方 +4 位作者 陈如冲 罗炜 曾运祥 姚卫民 钟南山 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期520-524,共5页
目的探讨气道神经源性炎症在胃食管反流性咳嗽(GERC)发病中的作用。方法20例GERC患者(GERC组),与10名正常人(正常对照组)和8例其他病因咳嗽伴有胃食管反流(GERD)患者(GERD组)分别作对比分析,观察GERC患者治疗前、后气道黏膜与分泌物中... 目的探讨气道神经源性炎症在胃食管反流性咳嗽(GERC)发病中的作用。方法20例GERC患者(GERC组),与10名正常人(正常对照组)和8例其他病因咳嗽伴有胃食管反流(GERD)患者(GERD组)分别作对比分析,观察GERC患者治疗前、后气道黏膜与分泌物中神经肽的变化。用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定痰上清液P物质(SP)、神经肽A(NKA)、神经肽B(NKB)的含量;用放射免疫法测定痰上清液降钙素基因相关肽(CGRP)的浓度。用免疫组化法检测气道黏膜、诱导痰细胞SP、NKA及SP受体(NK1)的表达,结果用半定量病理学方法表示。结果GERC组患者痰上清液SP、CGRP含量[(266±207)ng/L、(180±83)ng/L]显著高于正常对照组[(143±36)ng/L、(105±64)ng/L,P分别<0.05、<0.01]和GERD组[(130±11)ng/L、(89±16)ng/L,P分别<0.05、<0.01],NKA、NKB的含量各组间比较差异无统计学意义(P均>0.05);GERC组痰细胞SP、NK1和NKA的表达显著高于正常对照组(P分别<0.01、<0.05,<0.05)和GERD组(P均<0.05);GERC组气道黏膜SP的表达也显著高于GERD组(P<0.01)。治疗后,诱导痰细胞SP、NK1、NKA的表达较治疗前显著降低(P<0.01,<0.01或<0.05),痰上清液CGRP的含量也较治疗前显著降低(P<0.05)。结论GERC患者气道存在明显的神经源性炎症,治疗后神经肽趋于正常,提示神经源性炎症与GERC的发病密切相关。 展开更多
关键词 胃食管反流 慢性咳嗽 气道炎症 神经肽 发病机制 胃食管反流性咳嗽 气道神经源性炎症 气道黏膜 降钙素基因相关肽(CGRP) 酶联免疫吸附测定(elisa)
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重组人促红细胞生成素对小鼠视网膜光损伤的防护作用 被引量：24
2
作者 王红云 牛膺筠 +4 位作者 王培嵩 周占宇 刘夫玲 杨文毅 张跃红 《中华眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期434-438,共5页
目的　探讨重组人促红细胞生成素(rHEPO)通过小鼠血视网膜屏障的情况及其对视网膜光损伤的保护作用。方法　24只BALB/c小鼠腹腔注射rHEPO,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测小鼠视网膜中促红细胞生成素(EPO)的含量; 24只BALB/c小鼠建... 目的　探讨重组人促红细胞生成素(rHEPO)通过小鼠血视网膜屏障的情况及其对视网膜光损伤的保护作用。方法　24只BALB/c小鼠腹腔注射rHEPO,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测小鼠视网膜中促红细胞生成素(EPO)的含量; 24只BALB/c小鼠建立光损伤动物模型,通过光镜和核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口标记(TUNEL)法观察实验组小鼠(12只,腹腔注射rHEPO)和对照组小鼠( 12只,腹腔注射生理盐水)视网膜细胞的变化情况。结果　腹腔注射rHEPO后2、4、6及8h小鼠100μg视网膜蛋白中EPO的含量分别为(0 .68±0 .24)、(1 .87±0 .37)、(0. 96±0 .24)及(0. 47±0. 13)mU,差异有统计学意义(F=2 .113,P<0 .05),在腹腔注射药物后4h视网膜中EPO的浓度达到高峰。随光照时间延长,光镜下可见对照组视网膜杆细胞的内、外节破坏明显加重,外核层逐渐变薄,出现核固缩,甚至核碎裂;实验组各观察时间点损伤变化均较轻,仅见感光细胞内、外节排列紊乱,形成空泡,外核层细胞排列稍紊乱,厚度无明显变化。荧光显微镜下观察,对照组视网膜外核层的凋亡细胞随光照时间延长不断增多,至光照后7d凋亡细胞数量减少;实验组视网膜外核层仅见少量凋亡细胞,光照后72h凋亡细胞的数量明显减少,至光照后7d几乎无凋亡细胞。实验组视网膜外核层凋亡细胞的数量? 展开更多
关键词 重组人促红细胞生成素 视网膜光损伤 酶联免疫吸附测定(elisa) 防护作用 促红细胞生成素(EPO) BALB/c小鼠 RHEPO 血视网膜屏障 凋亡细胞 腹腔注射药物 显微镜下观察 保护作用 时间延长 视网膜细胞 外核层 实验组 对照组
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玉米赤霉醇人工抗原合成及其多克隆抗体的制备 被引量：17
3
作者 刘媛 刘贤进 +4 位作者 余向阳 张存政 陈育如 龚振明 周全 《分析科学学报》 CAS CSCD 2006年第1期1-4,共4页
对玉米赤霉醇（ZER）16-OH进行改造，设计合成了模拟玉米赤霉醇特征结构的半抗原——ZER-16-羧丙基丁醚。用混合酸酐法将其与载体蛋白BSA连接，用于免疫新西兰大白兔，制备的抗血清效价达1：102400。基于活性酯法合成的包被抗原建立了CI... 对玉米赤霉醇（ZER）16-OH进行改造，设计合成了模拟玉米赤霉醇特征结构的半抗原——ZER-16-羧丙基丁醚。用混合酸酐法将其与载体蛋白BSA连接，用于免疫新西兰大白兔，制备的抗血清效价达1：102400。基于活性酯法合成的包被抗原建立了CI-ELISA检测方法，该法对玉米赤霉醇检测的线性范围为18．39～1744．70ng／mL，检出限为8．61ng／mL。 展开更多
关键词 玉米赤霉醇 人工抗原 多克隆抗体 酶联免疫吸附测定(elisa)
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菊酯类农药酶联免疫吸附测定研究进展 被引量：14
4
作者 刘廷凤 杨敏娜 +2 位作者 刘亚子 顾颖 孙成 《环境科学与技术》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期100-102,共3页
介绍了菊酯类农药残留的酶联免疫分析(ELISA)的技术原理、关键技术环节,综述了国内外的酶联免疫测定菊酯类农药残留的研究动态,并展望了此技术的发展及应用前景。
关键词 酶联免疫吸附测定(elisa) 拟除虫菊酯 农药 进展
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慢性阻塞性肺疾病患者环氧合酶2和基质金属蛋白酶2的表达及其与气流阻塞的关系 被引量：17
5
作者 陈燕 陈平 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期324-327,共4页
目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者诱导痰中环氧合酶2(COX-2)及基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达及其与气流阻塞的关系。方法COPD组55例(COPD稳定期患者,其中0级12例、Ⅰ级10例、ⅡA级12例、ⅡB级11例和Ⅲ级10例)和正常对照组10名行痰诱... 目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者诱导痰中环氧合酶2(COX-2)及基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达及其与气流阻塞的关系。方法COPD组55例(COPD稳定期患者,其中0级12例、Ⅰ级10例、ⅡA级12例、ⅡB级11例和Ⅲ级10例)和正常对照组10名行痰诱导,对痰悬液进行细胞分类计数,应用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测诱导痰上清液中前列腺素E2(PGE2)和MMP2浓度,Westernblot法测定诱导痰细胞中COX-2蛋白表达。结果(1)COPD组诱导痰中细胞总数、肺泡巨噬细胞(AM)数和中性粒细胞(Neu)数较正常对照组显著增高(P<0.05或P<0.01)。AM、Neu与第一秒用力呼气容积占预计值%(FEV1占预计值%)、一秒率(FEV1/FVC)分别呈负相关(r=-0.280、P<0.05,r=-0.345、P<0.01;r=-0.677,r=-0.773,P均<0.01)。(2)Westernblot显示COPD组患者诱导痰细胞中COX-2蛋白表达(57±8)显著高于正常对照组(83±10,P<0.05)。(3)COPD各组诱导痰PGE2浓度[分别为(111±17)、(117±23)、(118±29)、(153±24)、(194±28)ng/L]显著高于正常对照组[(81±18)ng/L,P均<0.01],且与FEV1占预计值%、FEV-1/FVC呈负相关(r=-0.748,r=-0.750,P均<0.01),与MMP-2浓度呈正相关(r=0.775,P<0.01)。COPD各组诱导痰MMP2浓度[(4.0±0.9)、(4.5±1.5)、(7.7±3.1)、(11.9±3.5)、(18.5±5. 展开更多
关键词 慢性阻塞性肺疾病患者 气流阻塞 基质金属蛋白酶2 表达及 环氧合酶2 酶联免疫吸附测定(elisa) 慢性阻塞性肺疾病(COPD) 前列腺素E2(PGE2) FEV1/FVC 正常对照组 COX-2 Western MMP-2表达 肺泡巨噬细胞 用力呼气容积 COPD患者
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抗原刺激后外周血单个核细胞γ干扰素释放反应在结核分枝杆菌感染和结核病诊断中的意义 被引量：13
6
作者 谢莉 马玙 +9 位作者 高微微 李传友 张宗德 陈效友 古书香 邢爱英 郑素华 刘忠泉 陈曦 韩喜琴 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期545-549,共5页
目的探讨3种结核分枝杆菌抗原刺激后外周血单个核细胞(PBMC)γ干扰素(IFNγ)释放反应对结核性感染和结核病的诊断意义。方法获取活动性结核病患者(结核组,57例)、肺癌患者(肺癌组,29例)和健康人(健康对照组,27名)外周血单个核细胞。分... 目的探讨3种结核分枝杆菌抗原刺激后外周血单个核细胞(PBMC)γ干扰素(IFNγ)释放反应对结核性感染和结核病的诊断意义。方法获取活动性结核病患者(结核组,57例)、肺癌患者(肺癌组,29例)和健康人(健康对照组,27名)外周血单个核细胞。分别将结核分枝杆菌纯蛋白衍生物(PPD)、结核分枝杆菌早期分泌抗原靶6000蛋白(ESAT6)和38000抗原与PBMC共培养5d,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测培养上清液中IFNγ浓度。比较3种抗原PBMCIFNγ释放水平和PPD皮试(TST)结果。结果(1)健康对照组TST反应与BCG接种史及排菌患者接触密切程度经Logistic回归分析显示均呈正相关(P=0.047和P=0.041);以ESAT6为抗原的PBMCIFNγ释放水平与结核病患者接触密切程度相关(P=0.005),而与BCG接种史无明显相关性。(2)3组间TST结果差异无显著性。(3)以38000抗原刺激后IFNγ释放水平为观察指标,经受试者操作特性(ROC)曲线分析获得最佳域值为1000pg/ml,以此判断38000抗原刺激后IFNγ释放水平诊断结核病敏感性为64.9%,特异性为89.3%,准确性为77.0%,阳性预测值为86.0%,阴性预测值为71.0%。结论ESAT6抗原的IFNγ释放反应对结核分枝杆菌感染的诊断意义优于TST,38000抗原刺激后IFNγ释放反应对结核病的临床诊断有辅助意义。 展开更多
关键词 Γ干扰素 分枝杆菌 结核 抗原 细菌 结核菌素试验 结核分枝杆菌感染 外周血单个核细胞 结核病诊断 抗原刺激 释放反应 酶联免疫吸附测定(elisa)
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慢性阻塞性肺疾病患者诱导痰和血浆中白三烯B_4的变化以及茶碱对其的影响 被引量：13
7
作者 丁艳苓 姚婉贞 +1 位作者 刘政 王玉柱 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期441-444,共4页
目的探讨白三烯B4(LTB4)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者诱导痰和血浆的变化以及茶碱对其的影响。方法这个试验是前瞻性随机对照非盲法研究。40例COPD稳定期患者(C组),随机分为CA组(口服茶碱0·2g/次,每天2次,1个月)与CB组(不用任何... 目的探讨白三烯B4(LTB4)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者诱导痰和血浆的变化以及茶碱对其的影响。方法这个试验是前瞻性随机对照非盲法研究。40例COPD稳定期患者(C组),随机分为CA组(口服茶碱0·2g/次,每天2次,1个月)与CB组(不用任何茶碱类药物)。15名健康非吸烟者为正常对照组(H组)。评定各组基线水平以及C组随访1个月后的临床症状与生活质量评分,测定肺功能指标、诱导痰细胞计数与分类,并用酶联免疫吸附测定(ELISA)与酶免疫试验(EIA)方法分别测定诱导痰和血浆白细胞介素8(IL-8)与LTB4浓度。结果(1)C组诱导痰及血浆的LTB4水平分别为(794±305)pg/mg·pro、(5219±1185)ng/L,均显著高于H组[(155±64)pg/mg·pro、(2283±489)ng/L,P均<0·05]。(2)诱导痰的LTB4水平与中性粒细胞、IL-8水平呈显著正相关(r分别为0·453、0·364,P均<0·05)。(3)CA组在茶碱治疗前、后诱导痰LTB4水平分别为(812±592)、(657±459)pg/mg·pro,血浆水平为(5422±935)、(4589±1057)ng/L;CB组试验前、后诱导痰LTB4水平分别为(776±227)、(860±194)pg/mg·pro,血浆水平为(5074±1850)、(6063±2450)ng/L;这两组治疗前、后比较差异均无统计学意义(P均>0·05)。结论COPD患者LTB4水平增高,参与气道炎症过程。茶碱的治疗不能显著降低诱导痰与血浆的LTB4水平。 展开更多
关键词 慢性阻塞性肺疾病患者 诱导痰 白三烯B4 酶联免疫吸附测定(elisa) 慢性阻塞性肺疾病(COPD) 白细胞介素8(IL-8) LTB4 生活质量评分 IL-8水平 COPD患者 血浆水平 茶碱类药物 正常对照组 肺功能指标 酶免疫试验 中性粒细胞
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检测同型半胱氨酸的方法学进展和评价 被引量：14
8
作者 吕伟标 罗玲 《临床和实验医学杂志》 2008年第7期175-176,共2页
同型半胱氨酸是甲硫氨酸代谢过程中的主要中间产物,体内血浆半胱氨酸水平与心血管等疾病有着密切的关系。目前,有多种检测半胱氨酸的方法,其中以新推出的循环酶法测定血浆半胱氨酸最为方便、准确、便宜,值得推广使用。
关键词 同型半胱氨酸 高效液相色谱(HPLC) 荧光偏振免疫(FPIA) 酶联免疫吸附测定(elisa) 循环酶法
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缬沙坦对肺纤维化模型的干预作用及其对肝细胞生长因子表达的影响 被引量：11
9
作者 刘芳 徐启勇 叶燕青 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期479-483,共5页
目的研究血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂缬沙坦对肺纤维化模型的干预作用及其可能的机制。方法60只Wistar大鼠采用随机数字表法随机分成3组,每组20只:(1)缬沙坦组,经气管插管灌注博莱霉素(BLM)诱导肺纤维化,随后每日用缬沙坦16mg/kg灌胃进行干... 目的研究血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂缬沙坦对肺纤维化模型的干预作用及其可能的机制。方法60只Wistar大鼠采用随机数字表法随机分成3组,每组20只:(1)缬沙坦组,经气管插管灌注博莱霉素(BLM)诱导肺纤维化,随后每日用缬沙坦16mg/kg灌胃进行干预;(2)模型组,气管内灌注用BLM,灌胃用生理盐水;(3)对照组,气管内灌注和灌胃均用生理盐水。各组动物于气管内灌注后第7、14、28、42天分别处死5只。取肺组织经苏木精-伊红、Masson胶原染色及测定羟脯氨酸浓度来评价治疗效果。用免疫组化及原位杂交方法分别检测转化生长因子β(TGF-β)蛋白和肝细胞生长因子(HGF)mRNA在肺内的表达。用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测HGF蛋白在大鼠肺组织的含量。结果缬沙坦组肺泡炎程度在第14、28、42天分别为(0·88±0·12)、(0·79±0·21)、(0·75±0·17)分,低于同期模型组的(2·05±0·25)、(1·38±0·12)、(1·19±0·11)分,差异均有统计学意义(P均<0·01);缬沙坦组肺纤维化程度在第7、28、42天分别为(0·28±0·03)、(1·74±0·18)、(1·91±0·09)分,也低于同期模型组的(0·45±0·10)、(2·08±0·32)、(2·77±0·15)分,差异均有统计学意义(P均<0·05);缬沙坦组肺组织羟脯氨酸含量在第14、42天分别为(1·08±0·13)、(1·39±0·20)μg/mg·pro,低于同期模型组的(1·45±0·19)、(2·19±0·37)μg/mg·pro,差异均有统计学意义(P均<0·01);缬沙坦组肺组织中TGF-β蛋白表达在早、晚期分别为2·27±0·30、2·05±0·18,均低于同期模型组的3·99±0·43、2·71±0·46,差异均有统计学意义(P均<0·05)。缬沙坦组HGFmRNA表达在早、晚期分别为1·61±0·20、0·52±0·19,均高于同期模型组的1·98±0·23、0·28±0·14,差异均有统计学意义(P均<0·05);缬沙坦组蛋白含量在早、晚期分别为(203±18)、(129±20)pg/ml,均高于同期模型组的(260±21)、(100±20)pg/ml,差异均有统计学意义(P均<0·05)。结论缬沙坦� 展开更多
关键词 肝细胞生长因子 肺纤维化模型 缬沙坦 干预作用 酶联免疫吸附测定(elisa) 血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂 转化生长因子β(TGF Wistar大鼠 TGF-β MASSON 原位杂交方法 mRNA表达 生理盐水 统计学 大鼠肺组织 纤维化程度 气管内
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肺血栓栓塞症患者凝血纤溶系统及肺血管内皮功能的变化 被引量：12
10
作者 庞宝森 王辰 +4 位作者 翟振国 杨媛华 毛燕玲 黄秀霞 祝锦 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期714-716,共3页
目的探讨肺血栓栓塞症(PTE)患者体内凝血纤溶系统及肺血管内皮功能的变化及其临床意义。方法采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测80例PTE患者(急性大面积PTE组20例、非大面积PTE组60例)、40名正常人(对照组)的血D-二聚体(D-D)、组织型纤溶... 目的探讨肺血栓栓塞症(PTE)患者体内凝血纤溶系统及肺血管内皮功能的变化及其临床意义。方法采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测80例PTE患者(急性大面积PTE组20例、非大面积PTE组60例)、40名正常人(对照组)的血D-二聚体(D-D)、组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)、纤溶酶原激活剂抑制物1(PAI-1)、血浆蛋白S(Ps)、血浆蛋白C(Pc)、凝血酶调节蛋白(TM)、抗心磷脂抗体(ACA)、同型半胱氨酸(Hcy)含量;采用发色底物法检测抗凝血酶Ⅲ活性(AT-Ⅲ)。结果急性大面积PTE组患者血D-D、t-PA、PAI-1、Ps、TM、含量分别为(1.46±0.62)mg/L、(11.4±6.9)μg/L、(88.2±27.5)μg/L、(22.40±9.40)mg/L、(6.8±1.1)μg/L,非大面积PTE组分别是(0.92±0.27)mg/L、(6.6±1.5)μg/L、(60.1±26.1)μg/L、(23.90±10.70)mg/L、(6.3±1.5)μg/L,均显著高于正常对照组的(0.38±0.10)mg/L、(4.7±1.4)μg/L、(35.7±9.2)μg/L、(16.10±6.20)mg/L、(3.0±0.5)μg/L(分别P<0.01、<0.05)。急性大面积PTE组患者血AT-Ⅲ含量为(86.0±11.8)%,非大面积PTE组为(90.1±9.0)%,显著低于正常对照组的(102.6±9.20)%(P分别<0.01、0.05)。两PET组患者ACA-IgG、IgM、IgA显著高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PTE患者存在凝血纤溶系统功能失衡和肺血管内皮损伤。 展开更多
关键词 肺栓塞 组织型纤溶酶原激活剂 纤溶酶原激活物抑制物1 血液凝固因子 内皮 血管 肺血管内皮功能 凝血纤溶系统 肺血栓栓塞症 组织型纤溶酶原激活剂(t-PA) 酶联免疫吸附测定(elisa)
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辛伐他汀诱导嗜酸粒细胞凋亡的体外研究 被引量：11
11
作者 罗凤鸣 刘春涛 +1 位作者 李双庆 王曾礼 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期320-323,共4页
目的研究降脂药辛伐他汀对支气管哮喘(简称哮喘)外周血嗜酸粒细胞(EOS)凋亡的影响及其机制。方法分离10例患者外周血EOS,加入不同浓度辛伐他汀(1、5、10、20μmol/L)和甲羟戊酸(MVA,100μmol/L)进行体外培养,并以0μmol/L辛伐他汀作为... 目的研究降脂药辛伐他汀对支气管哮喘(简称哮喘)外周血嗜酸粒细胞(EOS)凋亡的影响及其机制。方法分离10例患者外周血EOS,加入不同浓度辛伐他汀(1、5、10、20μmol/L)和甲羟戊酸(MVA,100μmol/L)进行体外培养,并以0μmol/L辛伐他汀作为空白对照组,用流式细胞术检测EOS凋亡,用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测EOS活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase3)水平。结果(1)EOS与辛伐他汀(5μmol/L)共同孵育6、12、24、48h凋亡率分别为(32±4)%、(47±7)%、(62±9)%、(86±14)%,对照组分别为(23±3)%、(24±3)%、(41±6)%、(70±12)%,两组在同一时点比较差异有统计学意义(P=0.000)。(2)EOS体外培养12h,1μmol/L辛伐他汀即可促进EOS凋亡,此作用在5μmol/L时达最大效应。1、5、10、20μmol/L辛伐他汀共培养EOS凋亡率分别为(37±3)%、(51±3)%、(53±4)%、(52±4)%,与空白对照组[(24±3)%]比较差异也有统计学意义(P=0.000)。(3)活化caspase3水平变化与EOS凋亡率一致。EOS体外培养12h时1、5、10、20μmol/L辛伐他汀共培养分别为(14±4)μg/L、(22±4)μg/L、(24±4)μg/L、(23±5)μg/L,与空白对照组[(8±3)μg/L]比较,差异有统计学意义(P=0.000～0.003)。(4) 展开更多
关键词 辛伐他汀 嗜酸粒细胞凋亡 活化caspase-3 酶联免疫吸附测定(elisa) 体外研究 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 mol/L 流式细胞术检测 体外培养 血嗜酸粒细胞 EOS 支气管哮喘 类异戊二烯 RAS蛋白 对照组 凋亡率 统计学 不同浓度
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抗异丙隆多克隆抗体的研制 被引量：9
12
作者 李方实 孙峰 +1 位作者 刘贤进 崔恒华 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期298-303,共6页
【目的】为了建立测定脲类除草剂异丙隆残留的免疫分析方法(ELISA),对制备高效价抗异丙隆多克隆抗体的方法进行了研究。【方法】以对异丙基苯基异氰酸酯、N-甲基吡咯环酮和N-甲基己内酰胺为反应原料,经两步化学反应合成了两种异丙隆半抗... 【目的】为了建立测定脲类除草剂异丙隆残留的免疫分析方法(ELISA),对制备高效价抗异丙隆多克隆抗体的方法进行了研究。【方法】以对异丙基苯基异氰酸酯、N-甲基吡咯环酮和N-甲基己内酰胺为反应原料,经两步化学反应合成了两种异丙隆半抗原:1-(3-丙基羧基)-3-(4-异丙基苯基)-1-甲基脲(HAPTEN 4C)和1-(5-戊基羧基)-3-(4-异丙基苯基)-1-甲基脲(HAPTEN 6C)。通过活性酯法将半抗原与载体蛋白(BSA、OVA)偶联制备了两种异丙隆的人工抗原HAPTEN 6C-BSA和HAPTEN 4C-OVA。利用免疫抗原HAPTEN 6C-BSA免疫新西兰大白兔获得了高效价的异丙隆的多克隆抗体。建立了以HAPTEN 4C-OVA为包被原的间接竞争ELISA方法。【结果】合成的半抗原经薄层色谱、IR、1HNMR确证;人工抗原HAPTEN 6C-BSA和HAPTEN 4C-OVA的结合比分别为46﹕1和36﹕1。抗血清的最高效价为1.6×105。经优化确定的间接竞争ELISA分析方法中包被抗原的浓度为0.1μg.ml-1,抗血清的工作稀释倍数为1.0×105。根据异丙隆的标准抑制曲线,异丙隆对免疫反应的的IC50值为0.07μg.ml-1。抗体对氯溴隆、绿谷隆、特丁塞隆等6种取代脲类除草剂的交叉反应率都小于0.1%。【结论】异丙隆是小分子,本身没有免疫活性,也没有与载体蛋白偶联的活性基团。高效价、高特异性抗体的制备是利用免疫学方法进行异丙隆残留分析的最关键因素。本研究合成的两种异丙隆的相似物具有不同长度碳链的羧基,并且使异丙基和苯基充分暴露,具备了异丙隆半抗原的特点。将半抗原偶联到载体蛋白上获得的人工抗原经免疫兔子后获得了高效价、高特异性的抗异丙隆抗体。 展开更多
关键词 异丙隆 半抗原 人工抗原 多克隆抗体 酶联免疫吸附测定(elisa)
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不同流行程度下日本血吸虫病血清学诊断方法方法的Meta分析 被引量：9
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作者 王鑫瑶 杨坤 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期18-25,29,共9页
目的通过Meta分析,综合评价不同流行程度下间接血凝实验(IHA)、酶联免疫吸附测定(ELISA)和胶体染料试纸条法(DDIA)的日本血吸虫病诊断效果。方法通过文献检索,按照纳入和排除标准建立数据库,采用Meta-disc和R软件进行阈值检验、异质性... 目的通过Meta分析,综合评价不同流行程度下间接血凝实验(IHA)、酶联免疫吸附测定(ELISA)和胶体染料试纸条法(DDIA)的日本血吸虫病诊断效果。方法通过文献检索,按照纳入和排除标准建立数据库,采用Meta-disc和R软件进行阈值检验、异质性检验、效应量加权定量合并及SROC曲线拟合等Meta分析。结果共有60篇文献符合纳入标准。IHA在重、中度及低度流行区的灵敏度分别为0.84、0.76和0.94,特异度分别为0.73、0.64和0.73;ELISA在重、中度及低度流行区的灵敏度分别为0.88、0.80和0.93,特异度分别为0.59、0.59和0.62;DDIA在重、中度及低度流行区的灵敏度分别为0.93、0.81和0.93,特异度分别0.66、0.69和0.59。IHA、ELISA与DDIA的加权合并灵敏度分别为0.83、0.87和0.90;加权合并特异度为0.69、0.60和0.62。IHA、ELISA和DDIA的总体SROC曲线下面积分别为0.89、0.96和0.92。结论不同流行程度下,血吸虫病血清学诊断方法的检验效能存在一定差异。血吸虫病诊断试剂的灵敏度与特异度均需进一步提高。 展开更多
关键词 日本血吸虫病 间接血凝实验(IHA) 酶联免疫吸附测定(elisa) 胶体染料试纸条法(DDIA) 灵敏度 特异度 检验效能 META分析
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人参皂苷Rb1单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：7
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作者 赵寿经 侯春喜 +2 位作者 钱延春 徐立新 孙莉丽 《吉林大学学报（工学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第1期245-248,共4页
用人参皂苷Rb1分别与牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）反应合成了交联抗原GRb1-BSA（GRb1与BSA的结合比为10：1）和GRb1—OVA（GRb1与OVA的结合比为8：1）。以GRb1—BSA为免疫原，分5次免疫3只BAuyC小鼠，取免疫脾细胞与小鼠骨髓... 用人参皂苷Rb1分别与牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）反应合成了交联抗原GRb1-BSA（GRb1与BSA的结合比为10：1）和GRb1—OVA（GRb1与OVA的结合比为8：1）。以GRb1—BSA为免疫原，分5次免疫3只BAuyC小鼠，取免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合，Hat筛选，有限稀释法克隆。建立分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞系。采用ELISA（酶联免疫吸附测定）间接法和竞争法检测抗体的特异性。结果获得了一只小鼠分泌抗体效价达1：16000，并获得两株分泌GRb1的单克隆抗体的细胞系，分别命名为1F7和1G3，单抗检测显示在0．01～1μg／mL呈线性关系，GRb1的检测范围达50～350ng／mL，两株单抗针对相同的抗原决定簇，制备的单克隆抗体可用于GRb1含量的检测和分离。 展开更多
关键词 生物化学工程 单克隆抗体 人参皂苷RB1 酶联免疫吸附测定(elisa)
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抗甘草酸二铵抗血清的制备 被引量：6
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作者 曾华金 刘吉华 余伯阳 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期570-572,576,共4页
目的通过人工抗原的构建,制备抗甘草酸二铵(DG)的特异性抗血清。方法采用碳二亚胺法将DG与牛血清蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)共价偶联,分别合成免疫抗原DG-BSA和包被抗原DG-OVA。用合成的人工抗原免疫家兔,制得抗甘草酸二铵的特异性抗血... 目的通过人工抗原的构建,制备抗甘草酸二铵(DG)的特异性抗血清。方法采用碳二亚胺法将DG与牛血清蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)共价偶联,分别合成免疫抗原DG-BSA和包被抗原DG-OVA。用合成的人工抗原免疫家兔,制得抗甘草酸二铵的特异性抗血清,并通过酶联免疫方法(ELISA)对抗血清进行鉴定。结果制备了抗甘草酸二铵的多克隆抗体,获知理想的包被抗原的浓度为200ng/mL,抗血清的工作浓度为1∶10000,雌、雄家兔抗血清的效价分别为1∶51200和1∶25600。结论采用化学反应构建人工抗原的方法,可以制备出针对甘草酸二铵的特异性抗血清,从而为甘草酸二铵的鉴定及体内代谢的免疫学分析研究奠定了基础。 展开更多
关键词 甘草酸二铵 抗血清 酶联免疫吸附测定(elisa)
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高血压合并肾损害患者血清抗β1和α1受体自身抗体与血清肌酐水平的相互性分析 被引量：6
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作者 赵林双 廖玉华 +5 位作者 王敏 向光大 周子华 候洁 乐岭 蒋文 《高血压杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期549-551,共3页
目的探讨高血压合并肾损害患者血清β1肾上腺素受体(β1受体)和α1胆碱能受体(α1受体)自身抗体与血清肌酐水平的关系。方法以合成的α1受体和β1受体多肽片段为抗原,应用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术检测了118例(高血压并肾损害60例,... 目的探讨高血压合并肾损害患者血清β1肾上腺素受体(β1受体)和α1胆碱能受体(α1受体)自身抗体与血清肌酐水平的关系。方法以合成的α1受体和β1受体多肽片段为抗原,应用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术检测了118例(高血压并肾损害60例,高血压无肾损害58例,正常对照40例)。结果高血压病并肾损害组抗β1和α1受体自身抗体阳性率分别为(67·9%、46·4%)明显高于高血压无肾损害组的19%和20·7%及正常对照组17·5%和15%(P<0·01)。结论抗G-蛋白偶联型受体自身抗体可能与高血压合并肾损害有关,与血清肌酐水平有关。 展开更多
关键词 高血压合并肾损害 受体 自身抗体 高血压病 血清肌酐 Α1受体 肾损害 酶联免疫吸附测定(elisa) 水平 患者
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融合蛋白ProteinA残留检测方法的建立 被引量：6
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作者 毕华 范文红 +3 位作者 史新昌 丁有学 刘兰 饶春明 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期297-300,共4页
目的:建立一种融合蛋白的Protein A(ProA)残留检测方法。方法:利用Cygnus公司的F400检测试剂盒,用酶联免疫吸附测定(ELISA)法进行残留量检测,通过基质干扰试验、校正标准曲线法和非校正标准曲线的对比及加标回收率试验考察基质的干扰。... 目的:建立一种融合蛋白的Protein A(ProA)残留检测方法。方法:利用Cygnus公司的F400检测试剂盒,用酶联免疫吸附测定(ELISA)法进行残留量检测,通过基质干扰试验、校正标准曲线法和非校正标准曲线的对比及加标回收率试验考察基质的干扰。用校正标准曲线法对3批融合蛋白原液进行残余ProA检测,并对该方法进行精密性和准确性验证。结果:产品基质对试验检测有干扰,应用校正标准曲线法可以消除这种干扰。3批供试品原液经3次测定,残余ProA的平均值分别为(0.24±0.03)、(0.29±0.03)和(0.36±0.03)ng·mL-1,RSD均小于15%。1批原液经3次测定,回收率为(99.92±8.28)%。结论:已成功建立该融合蛋白的ProA残留量检测方法,重复性好,准确性高,可作为该融合蛋白ProA残留量的常规检测方法,也为融合蛋白及单抗类制品的ProA残留量检测提供借鉴。 展开更多
关键词 融合蛋白 ProA残留检测 酶联免疫吸附测定(elisa) 校正标准曲线 验证
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果蔬和谷物制品中多菌灵的免疫检测 被引量：6
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作者 柳双 谢春花 +2 位作者 王敏思 张志军 宋洋 《天津师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2019年第6期35-40,61,共7页
基于多菌灵多克隆抗体,建立快速、高效、灵敏的直接竞争酶联免疫吸附测定(CD-ELISA)方法检测果蔬和谷物中的多菌灵残留,对反应条件进行优化,绘制CD-ELISA标准曲线.以橙子、橙汁、黄瓜、小麦和香菇为检测材料,经酸化乙腈(醋酸和乙腈体积... 基于多菌灵多克隆抗体,建立快速、高效、灵敏的直接竞争酶联免疫吸附测定(CD-ELISA)方法检测果蔬和谷物中的多菌灵残留,对反应条件进行优化,绘制CD-ELISA标准曲线.以橙子、橙汁、黄瓜、小麦和香菇为检测材料,经酸化乙腈(醋酸和乙腈体积比为1∶99)提取,提取液用PBSB缓冲液稀释20倍即可用于CD-ELISA方法检测.分别利用CD-ELISA法和高效液相色谱法对香菇和小麦进行检测,比较二者的检测结果.利用CD-ELISA法对橙子、橙汁、黄瓜、小麦和香菇的30个样品进行多菌灵残留检测.结果表明:优化反应条件并消除基质影响后,CD-ELISA校正曲线的检测限为(0.30±0.15)μg/L,灵敏度为(2.70±0.30)μg/L.采用有机试剂提取和PSA净化的简单前处理后,用CD-ELISA法检测5种果蔬和谷物样品中的多菌灵含量,其添加回收率为84.3%~112.7%,变异系数小于12.3%.CD-ELISA法对香菇和小麦的多菌灵检测结果与高效液相色谱法的检测结果呈线性正相关,相关系数为0.993 3.30个样品CD-ELISA检测结果显示,多菌灵检出率为30%,超标率为3.33%.这些结果表明,构建的CD-ELISA法具有较高的灵敏度、精密度及准确度,可以作为快速检测食品中多菌灵残留的方法. 展开更多
关键词 酶联免疫吸附测定(elisa) 多菌灵 免疫检测
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鼠青光眼模型中热休克蛋白27的表达及其作用(英文) 被引量：6
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作者 吕红彬 袁援生 +2 位作者 罗清礼 李燕 刘强 《国际眼科杂志》 CAS 2006年第2期264-270,共7页
目的:探讨热休克蛋白27(HSP27)在鼠青光眼模型视网膜神经节细胞(RGCs)中的表达以及眼压对抗HSP27自身抗体的影响。方法:使用SPSS12.0软件将55只Wistar大鼠随机分为高眼压组(25只鼠)、sham对照(假手术)组(25只鼠)及正常对照组(5只鼠)。... 目的:探讨热休克蛋白27(HSP27)在鼠青光眼模型视网膜神经节细胞(RGCs)中的表达以及眼压对抗HSP27自身抗体的影响。方法:使用SPSS12.0软件将55只Wistar大鼠随机分为高眼压组(25只鼠)、sham对照(假手术)组(25只鼠)及正常对照组(5只鼠)。采用电凝鼠巩膜表面至少3组静脉及角膜缘周围血管,建立鼠青光眼模型。采用免疫组化和酶联免疫吸附测定(ELISA)方法分别检测术后1,2,3,4及8wk视网膜中RGCs以及神经纤维层(RNFL)HSP27的表达、分布以及血清中抗HSP27抗体水平。结果:随着眼压升高及高眼压持续时间延长,高眼压组右眼RGCs中HSP27表达逐渐增强,与其左眼、sham对照组右、左眼和正常对照组右、左眼比较,差异均有统计学意义(P<0.001),且RNFL中也出现HSP27的表达。高眼压组血清中抗HSP27抗体水平在术后1wk轻度升高(P>0.05),随着眼压升高及高眼压持续至术后8wk,血清中HSP27抗体水平逐渐升高并稳定于较高水平,与sham对照组和正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:内源性HSP27表达增强可能在青光眼视神经病变中具有重要作用。 展开更多
关键词 青光眼 视网膜神经节细胞 热休克蛋白27(HSP27) 酶联免疫吸附测定(elisa)
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重组人乳头瘤病毒双价(16/18型)疫苗免疫原性评价方法的研究 被引量：5
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作者 周朝明 马新兴 +3 位作者 周婧怡 刘佳骅 王洪芳 雷建强 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1743-1749,共7页
目的:探讨重组人乳头瘤病毒双价(16/18型)候选疫苗免疫原性评价方法。方法:对以假病毒为基础的中和实验(Zs-Green法)测定血清中和滴度,以微球为基础建立的Luminex法测定中和滴度和ELISA法测定抗体滴度的3种方法进行相关性研究以及体内... 目的:探讨重组人乳头瘤病毒双价(16/18型)候选疫苗免疫原性评价方法。方法:对以假病毒为基础的中和实验(Zs-Green法)测定血清中和滴度,以微球为基础建立的Luminex法测定中和滴度和ELISA法测定抗体滴度的3种方法进行相关性研究以及体内效价测定(ED50法)和体外相对效力测定(IVRP法)的相关性分析,同时对5种免疫原性的评价方法进行重复性验证。结果:ZsGreen法、Luminex法测定的中和滴度和ELISA法测定的抗体滴度检测结果表明:滴度值呈明显的剂量效应以及侯选疫苗具有良好的免疫原性。采用SPSS统计软件分析,对于HPV 16L1 ZsGreen法、Luminex法和ELISA法的相关系数分别为0.791,0.800,0.747(Spearman相关系数)和HPV 18L1的相关系数分别为0.734,0.625,0.634(Spearman相关系数)。并且ED50法和IVRP法具有一定的相关性。5种方法重复性验证的RSD分别为:5.3%(ZsGreen)、5.2%(Luminex)、8.0%(ELISA)、32.3%(ED50)、6.3%(IVRP)。结论:建立的HPV 16和HPV 18型疫苗评价方法为快速准确地评价免疫原性提供了多种解决方法。 展开更多
关键词 生物制品 重组疫苗 人乳头瘤病毒 免疫原性 纽扣珊瑚绿色荧光蛋白法(ZsGreen) 液相芯片法(Luminex) 酶联免疫吸附测定(elisa) 体内效价测定 体外相对效力测定
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