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酶联免疫分析方法测定动物性食品中西马特罗残留 被引量:4
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作者 张燕 陈启镌 +3 位作者 罗美芬 孙魁魁 曾道平 杨金易 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2021年第8期3090-3097,共8页
目的建立检测西马特罗药物残留的酶联免疫分析方法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)。方法对主要影响因素,包括包被原稀释倍数、抗体稀释倍数、竞争时间、标准品稀释液pH等参数进行优化,对样品进行前处理,经提取净化后进行检测... 目的建立检测西马特罗药物残留的酶联免疫分析方法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)。方法对主要影响因素,包括包被原稀释倍数、抗体稀释倍数、竞争时间、标准品稀释液pH等参数进行优化,对样品进行前处理,经提取净化后进行检测,并对ELISA检测结果与仪器方法进行对比。结果西马特罗ELISA方法的最佳反应条件为:抗原稀释倍数为100000,抗体稀释倍数为150000,标品稀释液pH为7.5,竞争反应时间为20 min。在最佳反应条件下,绘制标准曲线,西马特罗的IC50为1.32μg/L,线性范围为0.16~6.95μg/L,检出限为0.09μg/L。西马特罗在0.16、0.32、1.6μg/kg添加水平的回收率分别为80.31%~113.81%,变异系数低于10%,且实际样品的测定结果与超高效液相串联质谱法的相关性良好(r2=0.9962)。结论本研究建立的ELISA方法具有较高的灵敏性,适合西马特罗残留检测。 展开更多
关键词 动物性食品 免疫分析方法 西马特罗
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6项肿瘤标志物联合检测对卵巢癌的诊断价值 被引量:3
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作者 翁彬 陈才生 +2 位作者 王雷萍 雷厉 段纯 《广州医药》 2005年第2期53-55,共3页
目的探讨糖链抗原(CA125)、糖链抗原199(CA199)、癌胚抗原(CEA)、前列腺特异性抗原(PSA)、卵巢癌组(CA125)、游离前列腺特异性抗原(f PSA)6种肿瘤标志物联合检测对卵巢癌的诊断价值。方法用酶联免疫分析方法联合检测了30例良性卵巢疾病... 目的探讨糖链抗原(CA125)、糖链抗原199(CA199)、癌胚抗原(CEA)、前列腺特异性抗原(PSA)、卵巢癌组(CA125)、游离前列腺特异性抗原(f PSA)6种肿瘤标志物联合检测对卵巢癌的诊断价值。方法用酶联免疫分析方法联合检测了30例良性卵巢疾病患者,22例卵巢癌患者和26例健康对照者,分析各指标组间的统计学差异和单项、联合检测对卵巢癌患者的检出率。结果卵巢癌组单项阴性率由高至低依次为:CA12563.63%(14/22)、CA19954.54%(12/22)、CEA31.8%(7/22)、AFP13.63%(3/22)、f PSA9.09%(2/22)、PSA0(0/22)。经卡方检验,良性疾病组和卵巢癌组有显著性差异。6种指标联合检测,阳性率达到90.90%(20/22)。结论肿瘤标志物CA199、CA125、CEA、AFP、f PSA联合检测可提高卵巢癌诊断的阳性率,对早期诊断有一定价值。 展开更多
关键词 肿瘤标志物 合检测 诊断价值 前列腺特异性抗原(PSA) 游离前列腺特异性抗原 癌胚抗原(CEA) 免疫分析方法 卵巢癌患者 糖链抗原 统计学差异 显著性差异 CA199 CA125 F-PSA 疾病患者 卡方检验 良性疾病 早期诊断 阳性率
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探究酶联免疫分析方法在食药安全检测中的应用前景
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作者 郭伟国 崔磊 +2 位作者 冯西娟 杨梦瑶 陈欢 《中文科技期刊数据库(全文版)自然科学》 2023年第6期196-198,共3页
酶联免疫吸附分析作为一种新型检验检测分析技术,具有高效、快速、高通量等优点,因此在食药安全监测、环境污染控制、医疗卫生等领域得到广泛应用,主要用于食药中农兽药残留的测定,关键控制点(半抗原的制备、人工抗原的合成、抗体的制备... 酶联免疫吸附分析作为一种新型检验检测分析技术,具有高效、快速、高通量等优点,因此在食药安全监测、环境污染控制、医疗卫生等领域得到广泛应用,主要用于食药中农兽药残留的测定,关键控制点(半抗原的制备、人工抗原的合成、抗体的制备)。本文着重介绍酶联免疫分析技术的原理和方法建立,分析酶联免疫分析技术在食药安全检测中的现状,并就酶联免疫分析技术检测农药残留存在的现实问题和应用前景。 展开更多
关键词 免疫分析方法 食药安全检测 农药残留
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达氟沙星残留免疫学检测方法的研究 被引量:3
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作者 魏东 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第1期113-115,共3页
为了建立达氟沙星(DFLX)残留的免疫学检测方法,试验以前期获得的DFLX抗体和达氟沙星与卵清白蛋白的偶联物(DFLX-OVA)为基础,优化并建立了间接竞争ELISA检测方法。结果表明:该方法对DFLX最低检出限达29.24 ng/mL,且能对盐酸环丙沙星、氧... 为了建立达氟沙星(DFLX)残留的免疫学检测方法,试验以前期获得的DFLX抗体和达氟沙星与卵清白蛋白的偶联物(DFLX-OVA)为基础,优化并建立了间接竞争ELISA检测方法。结果表明:该方法对DFLX最低检出限达29.24 ng/mL,且能对盐酸环丙沙星、氧氟沙星、沙拉沙星和恩诺沙星进行特异性识别。说明试验所建立的检测方法可用于DFLX药物残留的筛选检测。 展开更多
关键词 达氟沙星 残留 检测 免疫分析方法
原文传递
区域性二噁英筛选-确认技术研究与实践 被引量:3
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作者 李康 戎志毅 +2 位作者 邓芸芸 贾丽娟 殷浩文 《环境科学研究》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第7期799-804,共6页
以酶联免疫分析(EIA)方法筛选和同位素稀释、高分辨气相色谱、高分辨质谱联用(HRGC-HRMS)技术确认相结合的方式,对上海地区土壤二噁英水平进行了研究.以w(二噁英)的区域筛选值19.0 ng/kg(以EIA-TEQ计)作为筛选标准,以文献上限值... 以酶联免疫分析(EIA)方法筛选和同位素稀释、高分辨气相色谱、高分辨质谱联用(HRGC-HRMS)技术确认相结合的方式,对上海地区土壤二噁英水平进行了研究.以w(二噁英)的区域筛选值19.0 ng/kg(以EIA-TEQ计)作为筛选标准,以文献上限值10.0 ng/kg作为确认标准,对超过筛选标准的样品进行确认,并对高于确认标准的样品进行了化学组分分析.共筛选了包括农业土壤、林地、绿地在内的145个样品,其中高于筛选标准的样品有7个,经HRGC-HRMS确认后有3个样品高于确认标准,其w(二噁英)为10.2-61.2 ng/kg(以I-TEQ计).这些样品来自工业区和垃圾焚烧厂周围.组成模式分析结果显示,它们可能受到焚烧输入源的影响,但是否直接由潜在排放源引起还需进一步研究.研究结果表明,相对快速和成本较低的筛选-评估体系适用于较大范围区域性二噁英污染的快速诊断. 展开更多
关键词 PCDD/FS 筛选-评估体系 免疫分析方法 HRGC-HRMS 土壤 上海
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单克隆抗体酶联免疫方法检测人血清胰岛素原及其应用 被引量:1
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作者 贾恩志 李爱香 徐振霞 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第13期1562-1566,共5页
目的:建立灵敏、特异的检测人血清中胰岛素原的酶联免疫吸附试验并应用于临床与流行病学研究. 方法:选择2种mAb并引入生物素与亲和素放大系统来建立酶联免疫分析方法,一种抗C肽mAb结合到酶反应板上作为固相抗体,另一种生物素标记的抗胰... 目的:建立灵敏、特异的检测人血清中胰岛素原的酶联免疫吸附试验并应用于临床与流行病学研究. 方法:选择2种mAb并引入生物素与亲和素放大系统来建立酶联免疫分析方法,一种抗C肽mAb结合到酶反应板上作为固相抗体,另一种生物素标记的抗胰岛素抗体作为液相抗体,将该检测方法应用于流行病学研究(n=1196). 结果:本法灵敏度0.83 pmol/L,与1 200 pmol/L胰岛素、3 960 pmol/L C肽无交叉反应,线性标准范围0.83-142 pmol/L.批内变异系数小于11.4%,批间变异系数小于11.2%.流行病学研究结果显示胰岛素原的含量与体重指数、腰围、收缩压、舒张压、胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、危险因素数目呈正相关, 与高密度脂蛋白胆固醇呈负相关. 结论:本法适用于在临床研究及流行病学研究中检测人血清中胰岛素原的含量.β细胞功能受损与纤溶功能的紊乱可能是高胰岛素原与心血管危险因素关联的原因. 展开更多
关键词 胰岛素原 人血清 免疫方法 单克隆抗体 检测 流行病学研究 低密度脂蛋白胆固醇 高密度脂蛋白胆固醇 mol/L 免疫分析方法 免疫吸附试验 心血管危险因素 抗胰岛素抗体 变异系数 生物素标记 放大系统 固相抗体
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层粘连蛋白酶联免疫分析方法的建立及初步应用 被引量:1
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作者 陈铁河 柴明胜 +1 位作者 彭武林 朱伟 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期275-276,共2页
目的 建立酶联免疫吸附试验 ,对层粘连蛋白进行定量检测。方法 将鼠抗人层粘连蛋白单克隆抗体包被于聚苯乙烯微孔板 ,兔抗人层粘连蛋白抗体作第一抗体 ,酶标羊抗兔抗体作为第二抗体 ,在对有关试验条件进行优化后 ,检测 73份献血员标... 目的 建立酶联免疫吸附试验 ,对层粘连蛋白进行定量检测。方法 将鼠抗人层粘连蛋白单克隆抗体包被于聚苯乙烯微孔板 ,兔抗人层粘连蛋白抗体作第一抗体 ,酶标羊抗兔抗体作为第二抗体 ,在对有关试验条件进行优化后 ,检测 73份献血员标本。结果 本法的标准曲线为 2 5~ 16 0 0ng/ml,但在 5 0~ 80 0ng/ml范围内线性理想 ,其线性回归系数大于 0 .95。批内和批间变异系数分别为 8.6 %和 9.3% ,灵敏度为 2 5ng/ml,平均回收率为 98.1%。 17份样品用本方法与放射免疫法同时检测 ,其相关系数为 0 92 96。 73例献血员血清层粘连蛋白水平为 (115 .7± 17.3)ng/ml。结论 本方法可替代放射免疫法 。 展开更多
关键词 层粘连蛋白 免疫分析方法 纤维化 临床应用 定量检测
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磺胺二甲嘧啶抗体的制备及酶联免疫分析方法的建立
8
作者 李子颖 刘一兵 +3 位作者 袁志刚 许文革 冯婷婷 郑婷 《原子能科学技术》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第B09期63-67,共5页
应用人工合成免疫原免疫动物、杂交瘤融合技术制备出抗磺胺二甲嘧啶的单抗及多抗。抗体亲和常数均大于1.0×108L/mol。利用多抗2510建立酶联免疫分析方法。该方法测量范围为0.1^30 ng/mL,灵敏度为0.08 ng/mL,批内变异〈15%,批间变异... 应用人工合成免疫原免疫动物、杂交瘤融合技术制备出抗磺胺二甲嘧啶的单抗及多抗。抗体亲和常数均大于1.0×108L/mol。利用多抗2510建立酶联免疫分析方法。该方法测量范围为0.1^30 ng/mL,灵敏度为0.08 ng/mL,批内变异〈15%,批间变异〈21%。不同样品回收率在80.5%^137.8%之间,稀释实验测定值与稀释度呈线性相关,相关系数为0.997。 展开更多
关键词 免疫分析方法 磺胺二甲嘧啶 抗体
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酶联免疫在洗衣机除尘螨过敏原中的浅析
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作者 罗寨洪 《日用电器》 2020年第9期18-20,55,共4页
尘螨广泛存在于人类家庭环境中,能够引起过敏性哮喘、过敏性荨麻疹、特应性皮炎等过敏性疾病,对于人类健康有着较为广泛的危害,尘螨过敏原也是人们生活中最为常见的过敏原之一。尘螨变应原是诱导产生特异性免疫球蛋白E(IgE)的抗原物质,... 尘螨广泛存在于人类家庭环境中,能够引起过敏性哮喘、过敏性荨麻疹、特应性皮炎等过敏性疾病,对于人类健康有着较为广泛的危害,尘螨过敏原也是人们生活中最为常见的过敏原之一。尘螨变应原是诱导产生特异性免疫球蛋白E(IgE)的抗原物质,可以引发机体的I型超敏反应。酶联免疫分析方法是一种基于特异抗原抗体的反应,具有灵敏、简便,且成本低廉的免疫分析技术。本文主要阐述了酶联免疫分析方法在洗衣机除尘螨过敏原检测上的应用,通过酶联免疫方法,对具有除过敏功能的洗衣机进行去除尘螨过敏原的实验探索。 展开更多
关键词 尘螨 尘螨过敏原 免疫分析方法
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间接竞争酶联免疫分析方法检测花生中黄曲霉毒素B1 被引量:16
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作者 潘明飞 李诗洁 +2 位作者 郭丹丹 王俊平 王硕 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第9期255-261,共7页
目的:针对花生中强毒性污染物黄曲霉毒素B1(AFB1)建立了一种准确、灵敏的间接竞争酶联免疫分析方法(ic-ELISA)。方法:制备了AFB1包被抗原,包被量为0.1μg/孔;抗体稀释64000倍;选用0.1%脱脂乳粉为方法封闭液,0.01mol/L磷酸盐缓冲液(PBS,p... 目的:针对花生中强毒性污染物黄曲霉毒素B1(AFB1)建立了一种准确、灵敏的间接竞争酶联免疫分析方法(ic-ELISA)。方法:制备了AFB1包被抗原,包被量为0.1μg/孔;抗体稀释64000倍;选用0.1%脱脂乳粉为方法封闭液,0.01mol/L磷酸盐缓冲液(PBS,pH7.4)为样品稀释液;结果:在最优的试验条件下,建立的ic-ELISA对目标物AFB1的检测线性范围为0.0097~0.088μg/L(R2=0.999);灵敏度(IC50)和检出限(IC15)分别达到0.027μg/L和0.0066μg/L。板内变异系数(n=6)为0.29%~16.9%,板间变异系数(n=6)为0.22%~21.19%。在花生样品中AFB1的检测灵敏度(IC50)为1.04μg/kg,回收率为96.67%~106.51%。结论:本研究建立的ic-ELISA方法操作相对简便,检测灵敏度高、准确性好,可稳定地用于花生样品中AFB1污染物的定量分析检测。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素B1 间接竞争免疫分析方法 花生
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间接竞争酶联免疫分析用于薏苡仁中杂色曲霉毒素的快速检测研究
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作者 黄惠强 黄雨心 +4 位作者 廖梦瑶 林懿 王淑美 王峰 张磊 《化学试剂》 CAS 2024年第8期84-90,共7页
杂色曲霉毒素(Sterigmatocystin,ST)是一种主要由杂色曲霉和构巢曲霉等真菌产生的次级代谢产物,其结构与黄曲霉毒素相似,具有潜在的致癌性和毒性,严重危害人类生命健康。研究发现部分中药易ST污染,但目前针对中药中ST的快速检测研究相... 杂色曲霉毒素(Sterigmatocystin,ST)是一种主要由杂色曲霉和构巢曲霉等真菌产生的次级代谢产物,其结构与黄曲霉毒素相似,具有潜在的致癌性和毒性,严重危害人类生命健康。研究发现部分中药易ST污染,但目前针对中药中ST的快速检测研究相对较少。通过系统优化样品前处理条件及影响检测灵敏度的关键参数,建立了简便的间接竞争酶联免疫分析法(ic-ELISA),用于消费量较大的药食同源薏苡仁中ST的快速筛查。所建立ic-ELISA的半数抑制浓度(Half-Maximal Inhibitory Concentration,IC 50)为0.11 ng/mL,线性范围为6.25~100μg/kg,加标回收率在79.27%~99.95%之间,相对标准偏差(RSD)<12%。此外,该方法可抗基质干扰,只需利用溶剂标准曲线即可进行定量。用所建立的ic-ELISA对96批薏苡仁样品进行了检测,并用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)对阳性样品进行了确证。该ic-ELISA快速、准确、经济,可作为薏苡仁中ST高通量快筛的技术手段,同时为其他中药中ST的快速检测提供参考。 展开更多
关键词 杂色曲霉毒素 间接竞争免疫分析方法 样品前处理 快速筛查 薏苡仁
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氟乐灵抗体的制备及其酶联免疫分析方法的建立 被引量:4
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作者 黄惠威 刘凤银 +7 位作者 曾思敏 曾羲 钱振杰 施迪燊 聂玉丹 江海超 袁学文 穆洪涛 《现代食品科技》 CAS 北大核心 2022年第1期345-354,共10页
该研究针对农(水)产品中氟乐灵农药残留的问题,建立了间接竞争酶联免疫分析方法,快速检测氟乐灵农药。利用3,5-二硝基-4-氯-三氟甲苯与仲胺侧链氨基反应合成半抗原2C,采用碳二亚胺法将半抗原2C与牛血清白蛋白/卵清蛋白偶联合成完全抗原... 该研究针对农(水)产品中氟乐灵农药残留的问题,建立了间接竞争酶联免疫分析方法,快速检测氟乐灵农药。利用3,5-二硝基-4-氯-三氟甲苯与仲胺侧链氨基反应合成半抗原2C,采用碳二亚胺法将半抗原2C与牛血清白蛋白/卵清蛋白偶联合成完全抗原。通过免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体Pc Ab-2C,基于间接竞争酶联免疫分析方法原理对包被原和抗体的稀释倍数、包被温度、抗体和标准品稀释液等7个因素进行系统优化,最终建立间接竞争酶联免疫分析方法。结果表明:该方法的IC_(50)为54.07 ng/mL,最低检测限为7.22 ng/mL,线性范围为12.56~282.62 ng/mL,与20种氟乐灵结构类似物进行交叉反应,只有2种药物的交叉反应率大于15%,方法特异性良好;对大豆、大豆油和鳗鱼等样品进行检测,添加回收率为89.8%~106.4%,变异系数小于10%。采用气相色谱法进行验证,添加回收率为89%~108.2%,变异系数小于10%,两种方法测定结果呈现良好的线性关系(R^(2)=0.99)。该研究所建立的方法具有灵敏度强、特异性强、准确度高等优点,适用于农(水)产品中氟乐灵农药残留的高通量快速检测。 展开更多
关键词 氟乐灵 间接竞争免疫分析方法 快速检测 农产品 水产品
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基于QuEChERS样品前处理的间接竞争酶联免疫分析法快速检测薏苡仁中黄曲霉毒素B_(1) 被引量:1
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作者 张磊 关凯仪 +1 位作者 黄雨心 王淑美 《广东药科大学学报》 CAS 2023年第6期37-43,共7页
目的解决间接竞争酶联免疫分析法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA)检测薏苡仁中黄曲霉毒素B_(1)(Aflatoxin B_(1),AFB_(1))的基质干扰问题,建立一种简便的高通量检测方法,用于薏苡仁中AFB_(1)的快速... 目的解决间接竞争酶联免疫分析法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA)检测薏苡仁中黄曲霉毒素B_(1)(Aflatoxin B_(1),AFB_(1))的基质干扰问题,建立一种简便的高通量检测方法,用于薏苡仁中AFB_(1)的快速筛查。方法以ic-ELISA的显色值和抑制率为评价指标优化样品前处理过程,重点考察QuEChERS萃取净化技术、不同稀释溶剂和稀释方式消除基质效应的效果,并对建立的方法进行方法学考察,最后应用于薏苡仁实际样品检测,检测结果用液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)进行确证。结果建立了一种无需任何校正,可用溶剂标准曲线进行定量分析的ic-ELISA。方法的半数抑制浓度为0.074 ng/mL,线性范围为1.37~20.0μg/kg,加标回收率在75.12%~84.46%之间,RSD小于6%。122批薏苡仁及其相关样品中AFB_(1)的阳性率为20.5%,阳性样品的超标率为24.0%,污染水平为1.76~27.56μg/kg。ic-ELISA与LC-MS/MS检测结果的相关系数(r)为0.98。结论QuEChERS萃取净化技术能够有效去除薏苡仁中的干扰成分,对快速样品前处理方法的建立具有重要应用价值,结合本研究所建立的ic-ELISA,为薏苡仁中AFB_(1)的检测和监测提供简便有效的技术手段。 展开更多
关键词 QuEChERS技术 间接竞争免疫分析方法 快速检测 薏苡仁 黄曲霉毒素B_(1)
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新型抗植物病毒剂毒氟磷的酶联免疫分析方法 被引量:3
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作者 卢平 李艳娇 丁晓燕 《农药》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期802-805,共4页
[目的]以新型抗病毒剂创制品种毒氟磷为研究对象,通过杂交瘤技术建立抗毒氟磷及其类似物的高特异性杂交瘤细胞系,应用体内诱生腹水制备单克隆抗体,开发出检测毒氟磷及其类似物的酶联免疫分析方法。[方法]利用2-甲酰苯氧乙酸、氨基酸合... [目的]以新型抗病毒剂创制品种毒氟磷为研究对象,通过杂交瘤技术建立抗毒氟磷及其类似物的高特异性杂交瘤细胞系,应用体内诱生腹水制备单克隆抗体,开发出检测毒氟磷及其类似物的酶联免疫分析方法。[方法]利用2-甲酰苯氧乙酸、氨基酸合成半抗原,通过碳二亚胺法合成人工抗原,免疫动物并通过杂交瘤技术得到一株杂交瘤细胞株DHS3A2。[结果]在制备的单克隆抗体mAb-DHS3A2的基础上,通过对有机溶剂、pH值、离子强度等因素的筛选比较,优化了毒氟磷间接竞争ic-ELISA,方法的IC50值为(9.62±0.59)μg/L,检出限为(0.3±0.05)μg/L。[结论]该方法快速、准确,适用于不同基质中毒氟磷农药残留快速检测。 展开更多
关键词 毒氟磷 单克隆抗体 间接竞争免疫分析方法
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糖尿病肾病患者血清Ⅳ型胶原的临床观察
15
作者 李慎军 张胜兰 张忠辉 《辽宁实用糖尿病杂志》 2001年第4期21-23,共3页
用夹心酶联免疫分析方法对Ⅱ型糖尿病患者 40例、正常对照组 3 0例的血清中完整的Ⅳ型胶原分子进行检测。观察其与糖尿病肾病之间的关系 ,并将其与血肌酐水平、内生肌酐清除率进行相关性分析。结果正常对照组的血清Ⅳ型胶原水平为 89 66... 用夹心酶联免疫分析方法对Ⅱ型糖尿病患者 40例、正常对照组 3 0例的血清中完整的Ⅳ型胶原分子进行检测。观察其与糖尿病肾病之间的关系 ,并将其与血肌酐水平、内生肌酐清除率进行相关性分析。结果正常对照组的血清Ⅳ型胶原水平为 89 663 +8 445ng/ml,Ⅱ型糖尿病患者为 472 986± 2 2 7 1 43ng/ml,显著高于正常对照组 (P <0 0 1 )。随着糖尿病肾病的进展 ,血清Ⅳ型胶原水平逐步增加 ,血清IV型胶原水平同血肌酐水平、内生肌酐清除率无相关性 (r=0 0 1 3 0和r=0 0 2 3 2 ,P >0 0 5 )。结论血清Ⅳ型胶原浓度反映了Ⅱ型糖尿病患者Ⅳ型胶原合成的增加 。 展开更多
关键词 血清Ⅳ型胶原 糖尿病肾病 夹心免疫分析方法 微血管基底膜病变
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以赭曲霉毒素A单克隆抗体建立竞争酶联免疫吸附分析方法的研究 被引量:19
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作者 刘仁荣 余宙 +1 位作者 何庆华 许杨 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第11期174-177,共4页
本研究通过活性酯法合成赭曲霉毒素A人工抗原,免疫小鼠制备单克隆抗体,在此基础上建立了竞争ELISA检测方法,线性范围为200~6000pg/ml,检测下限为150pg/ml。单抗与赭曲霉毒素B的交叉反应率为35%,与桔霉素、黄曲霉毒素B1和展青霉素等毒... 本研究通过活性酯法合成赭曲霉毒素A人工抗原,免疫小鼠制备单克隆抗体,在此基础上建立了竞争ELISA检测方法,线性范围为200~6000pg/ml,检测下限为150pg/ml。单抗与赭曲霉毒素B的交叉反应率为35%,与桔霉素、黄曲霉毒素B1和展青霉素等毒素交叉反应低于0.01%。在小麦样品中的加标回收率为83%~116%,变异系数为9.4%~19.8%。测试23份样品,赭曲霉毒素A的含量在0.6~2.56μg/kg之间。 展开更多
关键词 赭曲霉毒素A 人工抗原 单克隆抗体 免疫吸附分析方法
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苹果坏死花叶病毒CP基因原核表达及其抗血清制备
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作者 邢飞 王红清 李世访 《西南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期63-69,共7页
苹果坏死花叶病毒(Apple necrotic mosaic virus,ApNMV)是近年新发现的病原物,并且是与我国苹果花叶病症状高度相关的重要病毒,进行ApNMV外壳蛋白(coat protein,CP)基因原核表达、制备多克隆抗血清,以建立快速、灵敏、准确的ApNMV常规... 苹果坏死花叶病毒(Apple necrotic mosaic virus,ApNMV)是近年新发现的病原物,并且是与我国苹果花叶病症状高度相关的重要病毒,进行ApNMV外壳蛋白(coat protein,CP)基因原核表达、制备多克隆抗血清,以建立快速、灵敏、准确的ApNMV常规检测方法尤为必要.通过设计特异性引物,以RT-PCR方法成功获得ApNMV CP基因序列,插入到原核表达载体pET-28a(+)中构建重组质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG进行重组蛋白(含His-tag)诱导表达.SDS-PAGE和Western blot分析结果表明,CP基因在大肠杆菌中获得了高效表达,用Ni Sepharose 6 Fast Flow进行蛋白纯化,回收共得到重组蛋白2.4 mg.在屏障环境下免疫2只SPF级新西兰兔,制备出多克隆抗血清,稀释400倍后仍能与ApNMV阳性苹果叶片样品发生免疫反应.由此证明,本研究建立的ApNMV间接ELISA检测方法具有较好的灵敏性,检测效率高,能够用于田间大量样品ApNMV的诊断. 展开更多
关键词 苹果坏死花叶病毒 外壳蛋白基因 原核表达 抗血清 免疫吸附分析方法
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β-Casomorphin-7的酶联免疫吸附分析(ELISA)方法的建立 被引量:3
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作者 张源淑 钟海涛 +1 位作者 邹思湘 陈伟华 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第2期94-97,共4页
β-酪啡肽-7(β-Casomorphin-7)是一个有代表性的乳源外啡肽,有调节动物消化道运动和采食、内分泌、免疫等多种生物学功能。本研究以β-Casomorphin-7与人血清白蛋白(HSA)经戊二醛交联的复合物作为包被抗原;一抗为鸡抗β-Casomorphin-7... β-酪啡肽-7(β-Casomorphin-7)是一个有代表性的乳源外啡肽,有调节动物消化道运动和采食、内分泌、免疫等多种生物学功能。本研究以β-Casomorphin-7与人血清白蛋白(HSA)经戊二醛交联的复合物作为包被抗原;一抗为鸡抗β-Casomorphin-7与牛血清白蛋白(BSA)交联复合物的抗血清;酶标二抗为兔抗鸡IgG经戊二醛与辣根过氧化物酶(HRP)交联的复合物。包被抗原和一抗的稀释度经方阵稀释实验确定。本实验所建立的竞争ELISA方法的孔间差异为3.3%,板间差异为8.6%,检测灵敏度20ng/ml,检测范围20~320ng/ml,在实验浓度范围内。β-Casomor-phin-7的抗血清与β-内啡肽、脑啡肽、强啡肽、精氨酸降压素和神经降压素等活性肽未显示免疫交叉反应。表明所建立的方法有较高的特异性,可用于酪啡肽的体内功能研究。 展开更多
关键词 生理学 β-Casomorphin-7 ELISA 多克隆抗体 检测 免疫吸附分析方法 酪蛋白
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松香人工抗原的合成及多克隆抗体的制备 被引量:4
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作者 卞欢 仇新媛 +4 位作者 李鹏鹏 陈琳 耿志明 王道营 徐为民 《食品科学技术学报》 CAS 北大核心 2018年第6期51-57,共7页
利用脱氢松香胺(DHAM)为半抗原合成了松香的完全抗原、并通过免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体。首先DHAM与琥珀酸酐(SUC)反应合成琥珀酸单酰脱氢松香胺(DHAM-SUC),然后再与牛血清蛋白(BSA)和钥孔血蓝蛋白(KLH)进行偶联,合成了松香的... 利用脱氢松香胺(DHAM)为半抗原合成了松香的完全抗原、并通过免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体。首先DHAM与琥珀酸酐(SUC)反应合成琥珀酸单酰脱氢松香胺(DHAM-SUC),然后再与牛血清蛋白(BSA)和钥孔血蓝蛋白(KLH)进行偶联,合成了松香的完全抗原DHAM-SUCBSA和DHAM-SUC-KLH,偶联比分别为12和35。以DHAM-SUC-KLH为免疫原对新西兰大白兔进行免疫,制备了抗血清,效价达1.28×10~5,脱氢松香酸(DHA)和松香酸(AA)的50%抑制浓度(IC_(50))分别为25. 1μg/L和36. 4μg/L。研究合成的松香人工抗原具有理想的免疫原性,获得的多克隆抗体具有较好的灵敏度,可为建立畜禽肉制品中松香残留的酶联免疫吸附分析(ELISA)方法打下基础。 展开更多
关键词 松香 脱氢松香胺 人工抗原 多克隆抗体 免疫吸附分析方法
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氯丙嗪抗体制备与酶联免疫吸附测定方法的建立 被引量:3
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作者 袁利鹏 刘波 尹凯丹 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2019年第8期325-330,共6页
本研究针对动物性食品中违禁药物氯丙嗪残留问题,建立了针对氯丙嗪的酶联免疫吸附测定方法。首次通过以氯丙嗪为原料,先去甲基化合成N-甲基氯丙嗪,再与丙烯酸叔丁酯反应及水解等步骤成功合成了氯丙嗪半抗原(CPZ-H)。半抗原CPZ-H分别与OV... 本研究针对动物性食品中违禁药物氯丙嗪残留问题,建立了针对氯丙嗪的酶联免疫吸附测定方法。首次通过以氯丙嗪为原料,先去甲基化合成N-甲基氯丙嗪,再与丙烯酸叔丁酯反应及水解等步骤成功合成了氯丙嗪半抗原(CPZ-H)。半抗原CPZ-H分别与OVA和BSA通过活泼酯法偶联合成包被原与免疫原,采用免疫原CPZ-H-BSA免疫新西兰大白兔成功制备了特异性的抗氯丙嗪的多克隆抗体。基于该抗体建立了快速测定氯丙嗪的间接竞争酶联免疫吸附测定方法(ic-ELISA)。通过优化ic-ELISA方法的最佳工作条件,确定包被原和抗体稀释倍数均为1:8000时效果最好,此时标准曲线的IC50为1.1 ng/mL,线性范围为:0.13 ng/mL^8.8 ng/mL。制备的抗氯丙嗪的多克隆抗体与其它氯丙嗪类似物无交叉反应,特异性好。本研究为今后高特异性氯丙嗪快速检测试剂盒的制备提供依据。 展开更多
关键词 氯丙嗪 半抗原 免疫吸附分析方法
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