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入侵中国大陆的红火蚁的鉴定及发生为害调查 被引量：292
1
作者 曾玲 陆永跃 +2 位作者 何晓芳 张维球 梁广文 《昆虫知识》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期144-148,F003-F004,共7页
根据形态特征鉴定结果首次证实红火蚁SolenopsisinvictaBuren入侵中国大陆 ,并调查了广东省吴川市红火蚁发生为害情况。调查结果表明 ,发生区内部分地点红火蚁发生密度较高 ,主要发生于较稳定的生态环境中 ,如荒坡、草地、长满杂草的田... 根据形态特征鉴定结果首次证实红火蚁SolenopsisinvictaBuren入侵中国大陆 ,并调查了广东省吴川市红火蚁发生为害情况。调查结果表明 ,发生区内部分地点红火蚁发生密度较高 ,主要发生于较稳定的生态环境中 ,如荒坡、草地、长满杂草的田埂等。红火蚁已对当地农业生产、人们的身体健康、日常生活等造成了不利影响。此外 ,Cytb基因序列分析结果表明 ,采自美国佛罗里达和广东吴川的红火蚁与采自广东 4个地方的热带火蚁S .geminata (Fabr.)两物种间有 61个变异位点 ,种内变异为 0。限制性酶切多态实验 (RFLP)的结果显示 ,BamHI酶在红火蚁的特异扩增片段中有一个识别位点 ,而在热带火蚁中无酶切位点 ;MspI酶在热带火蚁的扩增片段中也有一个识别位点 ,而在红火蚁中无识别位点。有酶切位点的扩增产物在酶切后分别获得近 2 0 0bp与 2 5 0bp的片段各一带。因此 ,用PCR RFLP的方法可以简单快速地鉴别红火蚁和热带火蚁。 展开更多
关键词 红火蚁 中国大陆 发生为害调查 入侵 PCR-RFLP 识别位点 扩增片段 酶切位点 B基因序列 限制性酶切 鉴定结果 形态特征 为害情况 调查结果 发生密度 生态环境 农业生产 身体健康 不利影响 分析结果 佛罗里达 种内变异 扩增产物
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应用创造酶切位点法检测单碱基突变 被引量：10
2
作者 赵春江 李宁 邓学梅 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期327-329,共3页
应用引物错配技术结合单碱基突变位点而配合成一个酶切位点,使之成为可用PCR-RFLP方法分析的突变位点,是对单碱基突变位点进行基因型鉴定的有效而简捷的手段。本文以鸡胞外脂肪酸结合蛋白(Extracelluarfattyacidbindingprotein,EX-FABP... 应用引物错配技术结合单碱基突变位点而配合成一个酶切位点,使之成为可用PCR-RFLP方法分析的突变位点,是对单碱基突变位点进行基因型鉴定的有效而简捷的手段。本文以鸡胞外脂肪酸结合蛋白(Extracelluarfattyacidbindingprotein,EX-FABP)基因单碱基突变的基因型检测为例,探讨了应用创造酶切位点PCR(CreatedRe strictionSitePCR,CRS-PCR)检测单碱基突变基因型的思路、方法和策略。 展开更多
关键词 酶切位点 单碱基 突变 PCR-RFLP DNA序列 多态性
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中国4个弓形虫虫株GRA6基因的比较分析 被引量：20
3
作者 谢德华 翁亚彪 +4 位作者 李华文 郑唤钦 林瑞庆 张德林 朱兴全 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期1495-1500,共6页
通过对国内来源于不同宿主的ZS人株、SH人株、CN猪株、QH绵羊株4个弓形虫虫株,以及国际标准强毒株RH株的致密颗粒抗原(GRA6)基因进行PCR-RFLP分析,首次对中国弓形虫虫株进行了基因分型研究,旨在了解中国弓形虫基因型的分布情况,从而为... 通过对国内来源于不同宿主的ZS人株、SH人株、CN猪株、QH绵羊株4个弓形虫虫株,以及国际标准强毒株RH株的致密颗粒抗原(GRA6)基因进行PCR-RFLP分析,首次对中国弓形虫虫株进行了基因分型研究,旨在了解中国弓形虫基因型的分布情况,从而为进一步的分子遗传学研究以及弓形虫病的防制提供资料。PCR-RFLP分析显示两种带型:RH、SH、CN3株弓形虫为一种带型,QH和ZS2株弓形虫为另一种电泳带型。GRA6序列分析结果显示:RH、SH、CN3株弓形虫的GRA6基因序列上的MseΙ酶切位点与国外报道的RH株一致,同属于基因型Ι,为强毒株;QH和ZS2株弓形虫的MseΙ酶切位点与国外报道的弱毒株BEVERLEY株和ME49株一致,同属于基因型Ⅱ,与PCR-RFLP分析结果一致。除MseΙ酶切位点外,中国的几个虫株GRA6序列与GenBankTM注册的RH株及BEVERLEY和ME49两个弱毒株有个别碱基的差异。结果证明中国人源弓形虫包含了Ι、Ⅱ两种基因型,而动物源性弓形虫则因宿主和来源地不同亦有Ι、Ⅱ两个基因型。 展开更多
关键词 虫株 比较分析 RFLP分析 酶切位点 分析结果 基因型 遗传学研究 PCR MSe 致密颗粒 国际标准 基因分型 分布情况 弓形虫病 基因序列 强毒株 弱毒株 H株 带型 中国人 来源地 动物源 宿主 RH 显示 国外 绵羊 抗原 猪
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H-FABP基因型对中畜黑猪I系生长性能的影响 被引量：16
4
作者 刘剑锋 王立贤 +2 位作者 张贵香 赵克斌 张沅 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期555-558,共4页
利用PCR RFLP技术(限制性内切酶采用HinfⅠ和HaeⅢ)检测了培育品种77头中畜黑猪I系的心肌脂肪酸结合蛋白(H FABP)基因座位的遗传变异,同时对H FABP的不同PCR RFLP基因型对生产性能的影响作了初步统计分析,旨在探讨利用H FABP进行肉质性... 利用PCR RFLP技术(限制性内切酶采用HinfⅠ和HaeⅢ)检测了培育品种77头中畜黑猪I系的心肌脂肪酸结合蛋白(H FABP)基因座位的遗传变异,同时对H FABP的不同PCR RFLP基因型对生产性能的影响作了初步统计分析,旨在探讨利用H FABP进行肉质性状辅助选择,是否对生产性能产生不利影响。结果表明,在H FABP基因5′上游和内含子2 区段,均发现HinfⅠRFLP 和HaeⅢRFLP、HinfⅠ* RFLP;结果显示,在HinfⅠRFLP位点上,HH和hh 2种基因型间个体170日龄体重差异显著(P<0.05),除此之外,未发现其它酶切位点的不同基因型个体生长性能之间的显著差异。研究结果为今后开展猪肉质性状和生产性能的分子辅助选育奠定应用基础。 展开更多
关键词 生长性能 基因型 黑猪 PCR-RFLP技术 H-FABP基因 脂肪酸结合蛋白 对中 限制性内切酶 生产性能 畜 肉质性状 遗传变异 基因座位 培育品种 统计分析 辅助选择 不利影响 差异显著 酶切位点 应用基础 辅助选育 研究结果 内含子
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猪Pit-1基因的多态性研究 被引量：12
5
作者 庞瑾 李宏滨 +1 位作者 郑友民 杜立新 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期531-535,共5页
选取7个中国地方猪种和3 个国外引入猪种共473 头,应用PCR SSCP技术在7 个中国地方猪种中检测到1个Pit 1基因第4外显子上的突变;应用PCR RFLP技术在3个国外引入猪种中,扩增长度为1 747 bp的片段中检测到1个RsaⅠ限制性内切酶的多态酶切... 选取7个中国地方猪种和3 个国外引入猪种共473 头,应用PCR SSCP技术在7 个中国地方猪种中检测到1个Pit 1基因第4外显子上的突变;应用PCR RFLP技术在3个国外引入猪种中,扩增长度为1 747 bp的片段中检测到1个RsaⅠ限制性内切酶的多态酶切位点。遗传多态性分析结果表明:外显子4上的突变,在7个中国地方猪种中是A型等位基因和AA基因型频率占优势。其中沂蒙黑猪和巴马小型猪处于Hardy Weinberg平衡;北京黑猪、沂蒙黑猪、巴马小型猪、滇南小耳猪和香猪处于中度多态。RsaⅠ酶切多态位点的突变在3个国外引入猪种中也是A型等位基因和AA基因型频率占优势。其中大白猪和杜洛克猪处于Hardy Weinberg平衡;3 个国外引入猪种的多态信息含量均为中度多态。 展开更多
关键词 Hardy-Weinberg平衡 多态性研究 PCR-SSCP技术 PCR-RFLP技术 中国地方猪种 基因型频率 巴马小型猪 限制性内切酶 多态信息含量 等位基因 沂蒙黑猪 遗传多态性 酶切位点 分析结果 北京黑猪 多态位点 杜洛克猪 外显子 Rsa
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维生素D受体基因ApaⅠ多态性与维生素D缺乏性佝偻病易感性研究 被引量：11
6
作者 李海林 龚晓辉 +2 位作者 黄永坤 郝萍 周丽芳 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期105-107,共3页
目的研究维生素D受体(vitaminDreceptor,VDR)基因多态性与维生素D缺乏性佝偻病易感性的相关性,探讨维生素D缺乏性佝偻病的遗传易感因素。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析及基因测序等技术测定34例维生素D缺乏性佝偻病患... 目的研究维生素D受体(vitaminDreceptor,VDR)基因多态性与维生素D缺乏性佝偻病易感性的相关性,探讨维生素D缺乏性佝偻病的遗传易感因素。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析及基因测序等技术测定34例维生素D缺乏性佝偻病患儿和52名正常儿童的VDR基因多态性,比较两组VDR基因型和等位基因频率。结果在病例组和对照组中AA、Aa、aa基因型频率分别为17.6%、50.0%、32.4%和7.7%、28.8%、63.5%,A、a等位基因频率分别为42.6%、57.4%和22.1%、77.9%。两组AA、Aa、aa基因型频率差异有统计学意义(χ2=8.113,P=0.017),两组A和a等位基因频率的差异也有统计学意义(χ2=8.217,P=0.004),佝偻病组中A等位基因频率高于对照组。结论VDR基因Apa酶切位点多态性与维生素D缺乏性佝偻病存在相关性,携带A等位基因的个体存在对佝偻病的易感性,提示VDR基因Apa酶切位点多态性可能在决定个体维生素D缺乏性佝偻病遗传易感性方面有重要作用。 展开更多
关键词 维生素D缺乏性佝偻病 易感性 基因多态性 对照组 维生素D受体基因 等位基因频率 AA 酶切位点 基因测序 VDR
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外源性人胰岛素样生长因子-1基因在关节软骨细胞中的表达 被引量：9
7
作者 张绍昆 刘一 +2 位作者 吴宏 单玉兴 徐莘香 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期278-280,共3页
目的探讨含有绿色荧光蛋白(GFP)的外源性人胰岛素样生长因子(hIGF)1基因真核表达载体在关节软骨细胞内稳定表达的可行性,建立IGF1基因工程化的关节软骨细胞。方法利用基因重组技术,将GFPcDNA片段插入pcDNA3.1hIGF1载体中,构建重组载体p... 目的探讨含有绿色荧光蛋白(GFP)的外源性人胰岛素样生长因子(hIGF)1基因真核表达载体在关节软骨细胞内稳定表达的可行性,建立IGF1基因工程化的关节软骨细胞。方法利用基因重组技术,将GFPcDNA片段插入pcDNA3.1hIGF1载体中,构建重组载体pcGI。然后采用脂质体方法,转染原代关节软骨细胞,经G418筛选后,继续体外单层培养4周。原位杂交和免疫细胞化学检测hIGF1的表达,荧光显微镜观察GFP的表达,Ⅱ型胶原免疫细胞化学检测软骨细胞表型,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测软骨细胞增殖能力。结果根据重组载体pcGI内的酶切位点,设计采用BamHI酶切显示为线性化,XbaI酶切显示为512bp、1768bp、5915bp三个片段,HindⅢ则酶切下3023bp、5172bp二个片段,证明所构建的质粒方向及大小正确,含有GFP和hIGF1cDNA片段。稳定转染pcGI的软骨细胞原位杂交、免疫细胞化学和荧光显微镜证实了hIGF1和GFP的表达,同时MTT显示转染后的软骨细胞增殖能力增强,并能维持Ⅱ型胶原的表达。结论外源性hIGF1和GFP基因在关节软骨细胞内获得稳定表达,体外单层培养的转染关节软骨细胞增殖能力增强,同时维持软骨细胞表型。 展开更多
关键词 关节软骨细胞 IGF-1 表达 外源性 免疫细胞化学 转染 Ⅱ型胶原 绿色荧光蛋白(GFP) 酶切位点 GFP基因
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RNA干扰技术的研究进展 被引量：11
8
作者 徐俊 毛颖 +1 位作者 苗荻 郝佳 《生物技术世界》 2012年第3期15-17,共3页
RNA干扰是一种由双链RNA引发的序列特异性的转录后基因沉默,它是沉默目的基因表达的一种有效手段。本文就RNA干扰相关的分子机制和特点,其制备方法,以及目前RNA干扰在生物技术中的应用情况作一综述。
关键词 RNAi 序列 SIRNAS RNA 表达载体 酶切位点 化学合成 体外转录 重组子 交换子 双链 平末端 寡核苷酸 转录终止 限制性 哺乳动物细胞 研究进展
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广州地区肝酶CYP2C19基因型人群调查 被引量：9
9
作者 王红 李瑜元 +3 位作者 聂玉强 王汉平 毛平 谢健晋 《广东医学》 CAS CSCD 2004年第10期1204-1206,共3页
目的　了解广州地区人群CYP2C19基因多态性分布情况。方法　采用聚合酶链式反应结合限制性内切酶技术 (PCR -RFLP) ,分析该地区 15 5例健康志愿者的基因型 ,含酶切位点者 ,被切成两个片段为野生型纯合子 (Wt/Wt) ,即药物强代谢型 (EM) ... 目的　了解广州地区人群CYP2C19基因多态性分布情况。方法　采用聚合酶链式反应结合限制性内切酶技术 (PCR -RFLP) ,分析该地区 15 5例健康志愿者的基因型 ,含酶切位点者 ,被切成两个片段为野生型纯合子 (Wt/Wt) ,即药物强代谢型 (EM) ;不含酶切位点者不能被酶切 ,为突变型纯合子 (m/m) ,即弱代谢型 (PM) ;部分酶切者为突变型杂合子 (Wt/m)。结果　弱代谢 (PM)发生率为 15 5 % (2 4 / 15 5 ) ,强代谢 (EM)为 84 5 % (131/ 15 5 ) ,其中野生型纯合子 (Wt/Wt)为 36 8% (5 7/ 15 5 ) ,杂合子 (Wt/m)为 4 7 7% (74 / 15 5 )。结论　等位基因存在两种点突变形式m1和m2 ,国人弱代谢基因型 (m/m)和强代谢基因型杂合子 (Wt/m)均显著高于西方人种 ,强代谢基因型中杂合子 (Wt/m)明显多于纯合子 (Wt/Wt) ,这可能是质子泵抑制剂疗效个体差异的重要原因。 展开更多
关键词 杂合子 代谢 纯合子 CYP2C19 基因型 肝酶 人群调查 酶切位点 人种 基因多态性分布
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ntPCR-RFLP检测HBV阿德福韦耐药变异-rtN236T变异 被引量：9
10
作者 闫杰 冯鑫 +4 位作者 王磊 宋淑静 谢雯 欧蔚妮 李蕴铷 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第4期543-545,共3页
目的:建立一种简便、快速、实用的乙型肝炎病毒(HBV) 阿德福韦(ADV)耐药变异-rtN236T变异的快速检测方法. 方法:根据GenBank收录的HBV基因全序设计巢式PCR引物,使野生株(rt236N)PCR产物中含有DraI酶切位点(5’TTTAAA3’),而变异株(rt23... 目的:建立一种简便、快速、实用的乙型肝炎病毒(HBV) 阿德福韦(ADV)耐药变异-rtN236T变异的快速检测方法. 方法:根据GenBank收录的HBV基因全序设计巢式PCR引物,使野生株(rt236N)PCR产物中含有DraI酶切位点(5’TTTAAA3’),而变异株(rt236T)无此限制性酶切位点.同时PCR扩增2份已行HBVRT区基因测序证实未出现rtN236T 变异的慢性乙型肝炎患者血清及自行构建的对照质粒,扩增产物经DraI酶切,30 g/L琼脂糖凝胶电泳后,进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析. 结果:所建立的ntPCtk-RFLP方法灵敏度高,可以检测到106copies/L的HBV DNA;特异性强,其RFLP分析结果与DNA测序结果一致. 结论:ntPCR-RFLP方法灵敏、特异、简便、实用,适用于ADV耐药变异的临床监测工作. 展开更多
关键词 耐药 阿德福韦 HBV PCR—RFLP方法 ADV 变异 慢性乙型肝炎患者 限制性酶切 酶切位点 PCR产物
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赫坎按蚊种群近缘种核糖体基因内转录第二间隔区序列分析 被引量：8
11
作者 高琪 周华云 +5 位作者 李菊林 李凤华 Choe Tong Gyu Yom Sung Chan 朱国鼎 曹俊 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期277-279,共3页
目的　分析赫坎按蚊种群内 4个近缘种核糖体基因内转录第二间隔区 (rDNAITS2 )特征。　方法　采用特异性ITS2 引物对中华按蚊和嗜人按蚊江苏实验株、辽宁省沈阳市和朝鲜开城现场捕获的嗜人按蚊、八代按蚊和雷氏按蚊rDNAITS2 进行PCR扩... 目的　分析赫坎按蚊种群内 4个近缘种核糖体基因内转录第二间隔区 (rDNAITS2 )特征。　方法　采用特异性ITS2 引物对中华按蚊和嗜人按蚊江苏实验株、辽宁省沈阳市和朝鲜开城现场捕获的嗜人按蚊、八代按蚊和雷氏按蚊rDNAITS2 进行PCR扩增、基因测序和限制性内切酶酶切位点图谱分析。　结果与结论　赫坎按蚊种群近缘种中华按蚊、嗜人按蚊、八代按蚊和雷氏按蚊rDNAITS2 分别为 472、45 2、45 6和 45 6bp 。 展开更多
关键词 嗜人按蚊 蚊种 隔区 核糖体基因 中华按蚊 DNA 限制性内切酶 酶切位点 近缘种 转录
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中国丙型肝炎病毒1b型5’-NCR变异研究 被引量：7
12
作者 杜绍财 邱国华 +2 位作者 刘峰 张瑞 魏来 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期167-168,共2页
目的研究中国丙型肝炎病毒(HCV)RNA 1b基因型的5'-NCR一级结构的基因变异.方法对147例HCV 1b基因型血清样品进行5'-NCR扩增,分别用MboⅠ、BamHⅠ限制性内切酶酶切分析后,与40株HCV 1b型全基因株的5'-NCR进行比较.结果测序... 目的研究中国丙型肝炎病毒(HCV)RNA 1b基因型的5'-NCR一级结构的基因变异.方法对147例HCV 1b基因型血清样品进行5'-NCR扩增,分别用MboⅠ、BamHⅠ限制性内切酶酶切分析后,与40株HCV 1b型全基因株的5'-NCR进行比较.结果测序证实中国HCV 1b基因型在120位发生变异(C-T),在117位产生BamHⅠ酶切位点.147例患者中存在BamHⅠ切点的有17例(11.56%).既无BamHⅠ切点,也无MboⅠ切点的有26例(17.69%).存在2个MboⅠ切点6例(4.08%).存在1个MboⅠ切点有80例(54.42%).既有MboⅠ切点,又同时存在无MboⅠ切点的变异株18例(12.24%).结论在147份血清样品中具有1个MboⅠ切点的占54.42%,这和干扰素治疗疗效只有50%～60%是否存在联系尚有待于研究.中国HCV 1b基因株与40株HCV 1b标准株相比,在117位有特异的BamHⅠ酶切位点,这一特异的BamHⅠ切点是否仅在中国丙型肝炎感染者中存在,及其有何生物学意义,尚有待于进一步研究. 展开更多
关键词 HCV 丙型肝炎病毒 B基因 感染者 干扰素治疗 切点 患者 酶切位点 一级结构 生物学意义
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小鼠肿瘤线粒体DNA突变研究 被引量：5
13
作者 戴纪刚 闵家新 +2 位作者 张国强 魏泓 肖颖彬 《中华病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期458-461,共4页
目的　探讨线粒体DNA(mtDNA)突变与肿瘤发生发展的关系。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)技术结合限制性片段长度多态性分析 (PCR RFLP)和单链构象多态性分析 (PCR SSCP)技术了解Lewis肺癌、LA795、Hca F、Hca P、CT2 6、SCC891共 6个小... 目的　探讨线粒体DNA(mtDNA)突变与肿瘤发生发展的关系。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)技术结合限制性片段长度多态性分析 (PCR RFLP)和单链构象多态性分析 (PCR SSCP)技术了解Lewis肺癌、LA795、Hca F、Hca P、CT2 6、SCC891共 6个小鼠肿瘤细胞系mtDNA的基因变异。结果　经PCR RFLP分析发现 ,这些肿瘤细胞系mtDNA编码区的tRNAIle+Glu+Met及ND1基因核酸序列 ,在 2 7个限制性内切酶酶切位点上均无差异。而在非编码区 (D loop) ,与对照小鼠相比 ,Hca F出现了HinfI的新酶切位点 ;用PCR SSCP分析方法对这些肿瘤细胞系mtDNA的D loop的 5′及 3′端作进一步分析 ,在 6个肿瘤细胞系中 ,有 4个在mtDNA非编码区上存在着突变。结论　D loop是肿瘤细胞mtDNA突变的高发区 。 展开更多
关键词 肿瘤细胞系 小鼠肿瘤 线粒体DNA突变 非编码区 LEWIS肺癌 MTDNA突变 ND1 酶切位点 核酸序列 PCR—SSCP分析
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HOGG1基因特异性锤头状核酶表达载体的构建及其在细胞中表达的研究 被引量：6
14
作者 张勤 张遵真 《现代预防医学》 CAS 北大核心 2005年第3期207-209,共3页
目的 :设计并合成人 8-羟基鸟嘌呤 -DNA糖苷酶 (HOGG1)特异性的锤头状核酶 (hammerheadribozyme)基因并构建其真核表达载体。初步探讨其在A5 4 9细胞中的瞬时表达效应。方法 :运用计算机软件人工设计并合成核酶基因 (RZ) ,将核酶基因克... 目的 :设计并合成人 8-羟基鸟嘌呤 -DNA糖苷酶 (HOGG1)特异性的锤头状核酶 (hammerheadribozyme)基因并构建其真核表达载体。初步探讨其在A5 4 9细胞中的瞬时表达效应。方法 :运用计算机软件人工设计并合成核酶基因 (RZ) ,将核酶基因克隆到真核表达载体pcDNA3 1(+)中 ,阳性重组子由BamHI和EcoRI酶切 ,琼脂糖凝胶电泳鉴定及DNA测序证实。大量抽提阳性重组子并在非脂质体转染试剂FuGENE 6的介导下引入人肺腺癌细胞株A5 4 9,RT -PCR(逆转录多聚酶链反应 )法半定量检测转染细胞中HOGG1mRNA表达的改变。结果 :经酶切电泳及DNA测序证实合成的核酶基因序列正确并已被准确克隆入pcDNA3 .1(+)的BamHI和EcoRI酶切位点之间 ,命名为pcDNA3 .1(+) -RZ。经RT -PCR法检测到转染核酶的靶细胞中HOGG1mRNA表达下降 36 % ,与空白细胞组差异有显著性。结论 :成功合成HOGG1特异性的锤头状核酶基因并构建了该基因的真核表达载体。核酶在A5 4 9细胞内对靶基因HOGG1具有抑制其表达的作用。 展开更多
关键词 HOGG1 锤头状核酶 真核表达载体 特异性 PCDNA3 酶基因 酶表达 重组子 酶切位点 DNA测序
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条纹斑竹鲨鱼再生肝组织cDNA质粒文库的构建和鉴定 被引量：6
15
作者 赵艳景 胡亚楠 +5 位作者 刘睿 王颖 余江河 叶波平 王旻 吴梧桐 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期82-86,共5页
建立了鲨鱼肝脏的部分切除模型,获得了再生24h的鲨鱼肝组织,分离了再生肝组织的总RNA,纯化了mRNA,利用含BamHI酶切位点的Oligo(dT)16为引物合成cDNA第一链,通过末端转移酶在cDNA第一链3'末端加入Oligo(dC)尾,进而以Oligo(dT)16和含H... 建立了鲨鱼肝脏的部分切除模型,获得了再生24h的鲨鱼肝组织,分离了再生肝组织的总RNA,纯化了mRNA,利用含BamHI酶切位点的Oligo(dT)16为引物合成cDNA第一链,通过末端转移酶在cDNA第一链3'末端加入Oligo(dC)尾,进而以Oligo(dT)16和含HindIII酶切位点的Oligo(dG)10为引物,通过LD-PCR (long- distance-PCR)方法合成双链cDNA,将双链cDNA经BamHI和HindIII双酶切,通过T4DNA连接酶连接到经相同酶切的pUC19载体后构建成cDNA文库.对文库质量的分析结果表明,通过本方法构建的鲨鱼再生肝组织cDNA文库容量至少为4.92×105个/μg dscDNA,重组率达96.7%.对随机提取30个克隆的质粒进行分析,获得了其中25个插入片段的序列,未见重复序列,经与GenBank和dbEST数据库比对分析发现新基因在其中占较大的比例(76%).鲨鱼再生肝组织cDNA文库的成功构建为进一步通过差异显示技术筛选、克隆肝再生过程中差异表达的相关功能基因奠定了一个良好的基础. 展开更多
关键词 肝组织 鲨鱼 构建 质粒文库 cDNA第一链 T4DNA连接酶 cDNA文库 GENBANK 鉴定 斑竹 条纹 EST数据库 差异显示技术 酶切位点 末端转移酶 总RNA mRNA 分析结果 重复序列 比对分析 功能基因 差异表达 再生过程 双酶切 库容量
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人表皮生长因子(hEGF)基因合成及在枯草杆菌BS9920中分泌表达 被引量：5
16
作者 易庆 王关林 方宏筠 《大连理工大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第1期47-50,共4页
采用 PCR技术人工合成了一段长约 1 75 bp的人表皮生长因子 ( h EGF)的基因片段 .为了便于克隆 ,在该片段的 5′端设计了 Pst 的酶切位点及与 p US1 86载体 signal sequence相连接的碱基部分 ,在 3′端设计了 Hind 的酶切位点及终止密码... 采用 PCR技术人工合成了一段长约 1 75 bp的人表皮生长因子 ( h EGF)的基因片段 .为了便于克隆 ,在该片段的 5′端设计了 Pst 的酶切位点及与 p US1 86载体 signal sequence相连接的碱基部分 ,在 3′端设计了 Hind 的酶切位点及终止密码子 .经 DNA测序分析 ,合成的片段与已发表的 h EGF在序列上完全一致 ;之后将其克隆至枯草杆菌分泌型质粒载体p US1 86上 ,构建重组载体 p USE并转化一株枯草杆菌突变菌株 BS992 0感受态细胞 ;以 PCR法快速筛选重组菌落 ,RIA检测结果表明 BS992 0阳性转化子能够表达和分泌 h 展开更多
关键词 枯草杆菌 人表皮生长因子 基因表达 PCR技术 基因合成 酶切位点 尿抑胃素 多肽
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酶切型稳定同位素标记肽段为内标用于药物代谢酶的绝对定量分析 被引量：6
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作者 刘喜东 丛宇婷 +3 位作者 胡良海 张养军 顾景凯 钱小红 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1551-1557,共7页
利用带有酶切位点的稳定同位素标记肽段作内标,采取3种方式处理样品,考察了不同的样品处理过程对实验结果准确性的影响。首先合成不同长度的带有酶切位点的肽段,考察其酶解过程,实验结果表明,胰蛋白酶的活性位点具有一定的选择性,最终... 利用带有酶切位点的稳定同位素标记肽段作内标,采取3种方式处理样品,考察了不同的样品处理过程对实验结果准确性的影响。首先合成不同长度的带有酶切位点的肽段,考察其酶解过程,实验结果表明,胰蛋白酶的活性位点具有一定的选择性,最终确定目标肽段两端分别加入3个氨基酸所形成的肽段为内标。分别采用在酶解前加入带酶切位点的稳定同位素标记肽段、不带酶切位点的稳定同位素标记肽段以及在酶解过程后、质谱检测前加入不带酶切位点的稳定同位素标记肽段3种方式处理样品。结果表明,采取第一种方式处理样品的测定结果更接近真实值,相对偏差范围更小,可减小蛋白质绝对定量分析的误差,提高分析结果的重现性。 展开更多
关键词 稳定同位素标记肽段 绝对定量 酶切位点 药物代谢酶
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乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶及细胞色素P450 2E1基因多态性与酒精性肝病易感性的研究 被引量：6
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作者 郑莉莉 仲英娜 《中国肝脏病杂志（电子版）》 CAS 2008年第1期59-62,共4页
酒精滥用和酒精依赖已成为当今世界日益关注的社会公共卫生问题。酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)是指由于长期大量地摄入酒精而导致肝脏一系列病变。在西方国家,酒精性肝病是导致肝硬化的主要因素[1]。近年来,随着我国国民经... 酒精滥用和酒精依赖已成为当今世界日益关注的社会公共卫生问题。酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)是指由于长期大量地摄入酒精而导致肝脏一系列病变。在西方国家,酒精性肝病是导致肝硬化的主要因素[1]。近年来,随着我国国民经济的发展,与饮酒相关的问题已成为我国面临的一大社会和医学问题,ALD的发病率迅速上升。 展开更多
关键词 基因多态性 酒精性肝病 乙醇脱氢酶 细胞色素 乙醛脱氢酶 遗传易感性 酶切位点 基因型 相关性 肝硬化
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一种米曲霉蛋白酶的酶学性质及其在酪蛋白磷酸肽制备中的应用 被引量：5
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作者 冯颖杰 宗红 +5 位作者 诸葛斌 方慧英 陆信曜 孙进 冯倩 丁凤姣 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期2073-2078,共6页
【目的】分离纯化米曲霉蛋白酶的主要组分,分析其酶学特性,并应用于酪蛋白磷酸肽(Casein phosphopeptides,CPPs)的制备。【方法】采用硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose FF阴离子交换层析和Butyl-sepharose HP疏水层析对米曲霉蛋白酶进行分离... 【目的】分离纯化米曲霉蛋白酶的主要组分,分析其酶学特性,并应用于酪蛋白磷酸肽(Casein phosphopeptides,CPPs)的制备。【方法】采用硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose FF阴离子交换层析和Butyl-sepharose HP疏水层析对米曲霉蛋白酶进行分离纯化,SDS-PAGE检测分子量与纯度,MALDI-TOF-MS检测酶切位点。【结果】得到一种蛋白酶组分(命名为PE),分子量大小为58 k D左右。该酶最适反应条件为55°C,p H 8.0,酶活被Fe3+抑制,被Mn2+激活。以酪蛋白为底物时,Km=0.36 g/L,最大反应速率Vm=18.18 mg/(L·min)。蛋白酶PE对牛胰岛素B链上-Leu-Cys-、-Val-Glu-、-Tyr-Leu-和-Arg-Gly-组成的肽键有较高的切割能力,酶切位点较多。利用其水解酪蛋白,通过钡-乙醇沉淀法得到CPPs,产率为15.87%,摩尔氮磷比r(N/P)为6.17,得到的CPPs可以使钙沉淀推迟35 min。【结论】利用米曲霉蛋白酶水解酪蛋白产生CPPs,为其在功能性食品加工方面的应用提供有利的参考。 展开更多
关键词 米曲霉 蛋白酶 分离纯化 酶学性质 酶切位点 酪蛋白磷酸肽
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反义人端粒酶RNA亚基对胆囊癌端粒酶活性及细胞生长的抑制作用 被引量：4
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作者 靳斌 姜希宏 +4 位作者 王学浩 王伟 徐克森 刘博 刘贤锡 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期1422-1424,i020,共4页
目的　探讨反义RNA技术对胆囊癌细胞端粒酶活性的影响及对胆囊癌细胞生长增殖的作用。方法　根据测定的胆囊癌人端粒酶RNA亚基 (hTR)基因的序列结果 ,并根据真核表达载体多克隆酶切位点的物理图谱 ,体外合成反义RNA及正义RNA的基因序列 ... 目的　探讨反义RNA技术对胆囊癌细胞端粒酶活性的影响及对胆囊癌细胞生长增殖的作用。方法　根据测定的胆囊癌人端粒酶RNA亚基 (hTR)基因的序列结果 ,并根据真核表达载体多克隆酶切位点的物理图谱 ,体外合成反义RNA及正义RNA的基因序列 ,并构建入 pTriEx 4真核表达载体 ,酶切鉴定正确后 ,采用脂质转染法导入胆囊癌细胞。TRAP法检测端粒酶活性 ,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况 ,电镜观察细胞微观形态变化。结果　实验组胆囊癌细胞的端粒酶活性较对照组明显减低 ,正义组、转染空载体及单纯脂质体转染的细胞端粒酶活性与未转染细胞比较则变化不明显。反义RNA基因作用后 ,G0 /G1期细胞比例明显增高 ,S期细胞比例明显降低。细胞的分裂、增殖受到明显抑制。反义RNA基因转化后 ,10d凋亡率为 11.10 %。 13d后凋亡率为 2 9.0 2 %。电镜下可见明显凋亡细胞。结论　反义RNA技术对胆囊癌细胞端粒酶活性有明显的抑制作用 ;并抑制胆囊癌细胞的生长 ,促进细胞的凋亡 ;且克服了反义寡核苷酸作用时间短的缺点。 展开更多
关键词 胆囊癌 端粒酶活性 端粒酶RNA 癌细胞 反义RNA 凋亡率 抑制作用 酶切位点 真核表达载体 基因作用
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