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核基质MINTC端片段(2226-2959)相互作用分子的筛选与鉴定
1
作者 李军锋 周鹏 +1 位作者 秦红 韩骅 《第四军医大学学报》 北大核心 2003年第24期2220-2223,共4页
目的 :为了研究MINT的功能及其转录抑制的机制 ,筛选与MINT相互作用的蛋白 .方法 :以MINT第 2 2 2 6 2 95 9氨基酸 (F5 )为诱饵 ,用酵母双杂交法筛选小鼠胚胎 9d的cDNA文库 .用诱饵质粒和文库先后转化酵母宿主后 ,对 4 .5× 1 0 6... 目的 :为了研究MINT的功能及其转录抑制的机制 ,筛选与MINT相互作用的蛋白 .方法 :以MINT第 2 2 2 6 2 95 9氨基酸 (F5 )为诱饵 ,用酵母双杂交法筛选小鼠胚胎 9d的cDNA文库 .用诱饵质粒和文库先后转化酵母宿主后 ,对 4 .5× 1 0 6个酵母克隆进行了营养筛选和α 半乳糖苷酶筛选 ,获得 5 1个阳性克隆 .从中提取质粒进行酶切鉴定 ,获得 1 0个非重复克隆 ,对此 1 0个克隆进行序列分析 .结果 :筛选到的 3个基因分别为MINT ,α 晶状体蛋白结合蛋白 1 (AlphaA CRYBP1 )和核受体辅抑制因子 1 (N CoR1 ) .在酵母中分析了N CoR1与MINT的作用区段 ,N CoR1与MINT的 2 2 2 6 2 95 9和 2 96 0 35 76两个片段均有相互作用 .结论 :①MINT在细胞内可能形成二聚或多聚体 ;②除了RBP J和MSX2外 ,MINT还可能调节AlphaA CRYBP1的活性 ;③MINT可能通过N CoR1募集组蛋白去乙酰化酶 (HDAC) 展开更多
关键词 MINT MSX2 N-CoR1 酵母菌杂交
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人胰腺细胞cDNA文库中丙型肝炎病毒E1结合蛋白基因的筛选
2
作者 王晓春 张锦前 +5 位作者 吴淑玲 张晨宇 李朝品 李国力 王琦 成军 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期647-650,共4页
目的应用酵母双杂交技术筛选人胰腺细胞cDNA文库中与HCV包膜糖蛋白E1相互作用的结合蛋白的编码基因。方法扩增人胰腺细胞cDNA文库并经纯化鉴定后，将文库质粒转化酵母菌株Y187。诱饵质粒pGBKT7-E1转化酵母菌株AH109，在色氨酸缺陷型培... 目的应用酵母双杂交技术筛选人胰腺细胞cDNA文库中与HCV包膜糖蛋白E1相互作用的结合蛋白的编码基因。方法扩增人胰腺细胞cDNA文库并经纯化鉴定后，将文库质粒转化酵母菌株Y187。诱饵质粒pGBKT7-E1转化酵母菌株AH109，在色氨酸缺陷型培养基（SD／-Trp）上筛选阳性菌落。应用酵母双杂交系统3将阳性重组AH109菌株与重组酵母菌株Y187进行配合，在四缺培养基（SD／-Trp／-Leu／-His／Ade）和铺有X—a—gal的四缺培养基上进行筛选，提取蓝色酵母菌落质粒，电转化大肠埃希菌DH5a后再提取质粒测序，测序结果进行序列比对。结果筛选出16种与HCVE1蛋白相结合的蛋白基因。结论在筛选出的与HCVE1蛋白结合的人胰腺细胞蛋白基因中，部分可能与糖、脂类代谢密切相关。 展开更多
关键词 胰腺 病毒包膜蛋白质类 DNA 互补 基因文库 酵母菌杂交 遗传
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丙型肝炎病毒E2结合蛋白基因在人胰腺细胞cDNA文库中的筛选
3
作者 张婷 任娜 +3 位作者 田梅梅 李贲 张锦前 成军 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2010年第36期3900-3904,共5页
目的:筛选人胰腺细胞cDNA文库中与HCV包膜糖蛋白E2相互作用的结合蛋白的编码基因.方法:扩增人胰腺细胞cDNA文库进行纯化鉴定,并将文库质粒转化酵母菌株Y187.诱饵质粒pGBKT7-E2转化酵母菌株AH109,在色氨酸缺陷型培养基(SD/-Trp)上筛选阳... 目的:筛选人胰腺细胞cDNA文库中与HCV包膜糖蛋白E2相互作用的结合蛋白的编码基因.方法:扩增人胰腺细胞cDNA文库进行纯化鉴定,并将文库质粒转化酵母菌株Y187.诱饵质粒pGBKT7-E2转化酵母菌株AH109,在色氨酸缺陷型培养基(SD/-Trp)上筛选阳性菌落.应用酵母双杂交系统3将阳性重组AH109菌株与重组酵母菌株Y187进行配合,在4缺培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)和铺有X-α-gal的4缺培养基上进行筛选,提取蓝色酵母菌落质粒,电转化大肠埃希菌DH5α后再提取质粒测序.测序结果进行序列比对.结果:成功构建人胰腺cDNA文库以及pGB-KT7-HCVE2重组质粒,筛选出8种与HCVE2蛋白相结合的蛋白基因,分别为:胰凝乳蛋白酶原B1前体、胰蛋白酶原、胆盐刺激酯酶、CDK5、羧肽酶B1、人类v-Ki-ras2、鼠Kirsten肉瘤、弹性蛋白酶3A及辅脂肪酶.结论:筛选出的与HCVE2蛋白结合的人胰腺细胞蛋白基因中,部分与2型糖尿病、肝脏脂肪变性密切相关. 展开更多
关键词 胰腺 丙型肝炎病毒 人胰腺cDNA文库酵母菌杂交 遗传
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