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东海洋山港沿岸土壤、海水样本中Ⅰ型PKS基因的初步筛选鉴定与功能分析 被引量:3
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作者 董晓毅 王梁华 +3 位作者 孙铭娟 宗英 焦豫良 焦炳华 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1359-1366,共8页
为考察土壤和海水中Ⅰ型聚酮合酶(polyketide synthase,PKS)基因的多样性和差异,本研究自行设计了一套针对PKS基因中酮缩合酶(ketosynthase,KS)片段的简并引物,使用PCR方法直接克隆东海洋山港沿岸土壤和海水DNA样本中的KS片段,去除重复... 为考察土壤和海水中Ⅰ型聚酮合酶(polyketide synthase,PKS)基因的多样性和差异,本研究自行设计了一套针对PKS基因中酮缩合酶(ketosynthase,KS)片段的简并引物,使用PCR方法直接克隆东海洋山港沿岸土壤和海水DNA样本中的KS片段,去除重复序列后,共获得了23条不同的KS片段(长度为630bp^690bp),提交GenBank皆获登录号,其中19条来自土壤(DQ640993、DQ640997、DQ641926、DQ641927、DQ673137~DQ673151),4条来自海水(DQ673151,EF554859~EF554861),由核苷酸序列推断出的氨基酸序列保守,与GenBank中已知KS基因片段的相似度在45%到85%之间,种系发生分析表明,其中14条KS片段(来源于海水的KS片段皆在其中)应来源于典型的KS群,而剩余9条则来源于杂合的PKS/NRPS(Non-ribosomal peptide synthetase,非核糖体多肽合成酶)群。另外,几条KS基因特征明显,可用于进一步的研究。 展开更多
关键词 未获得培养微生物 缩合 土壤 海水
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麦迪霉素聚酮缩合酶基因的亚克隆及表达 被引量:2
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作者 朱学蔚 王以光 +1 位作者 金莲舫 徐小敏 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1991年第4期291-299,共9页
利用与麦迪霉素生物合成有类似途径的放线紫红素聚酮缩合酶基因Act I作为探针,将来源于麦迪霉素产生菌基因文库的与Act I有同源性的阳性初级克隆pCN8B12进一步缩小,亚克隆获得了2.4kb的麦迪霉素聚酮缩合酶基因,将其插入pWHM3载体中构建... 利用与麦迪霉素生物合成有类似途径的放线紫红素聚酮缩合酶基因Act I作为探针,将来源于麦迪霉素产生菌基因文库的与Act I有同源性的阳性初级克隆pCN8B12进一步缩小,亚克隆获得了2.4kb的麦迪霉素聚酮缩合酶基因,将其插入pWHM3载体中构建了重组质粒pCG2 DNA。pCG2 DNA在放线紫红素聚酮缩合酶基因缺陷型变株天蓝色链霉菌TK17及螺旋霉素产生菌S.ambofaciens中均获得表达。前者所得产物不同于麦迪霉素和放线紫红素,可能为新的杂合抗生素;后者能使螺旋霉素产量得到提高。另外pCG2 DNA在道诺红霉素产生菌调节变株S.peucetius H6101中的表达产物经TLC及HPLC分析表明为紫红霉酮。pCG2 DNA在Tetracenomycin C产生菌S.glaucescens中亦有一定的功能表达,而在红霉素产生菌红霉内酯阻断变株Saccharapolyspora erythraea WMH15,261中未观察到活性表达。推测pCG2 DNA具有一定调节或在某些聚酮类抗生素产生菌变株中起互补的功能。 展开更多
关键词 麦迪霉素 缩合 基因 亚克隆
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