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circ-HECTD1通过调控miR-98-5p/EPHA4表达参与OGD诱导的神经元损伤 被引量:1
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作者 刘义锋 温昌明 +4 位作者 吴川杰 高军 孙军 孙孟 郭仕乾 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期541-552,共12页
目的探讨环状RNA HECTD1(circ-HECTD1)是否通过调控miR-98-5p/酪氨酸蛋白激酶A4(EPHA4)的表达参与氧糖剥夺(OGD)诱导的神经元损伤。方法体外分离培养小鼠原代皮层神经元,采用双荧光素酶报告基因实验、RNA结合蛋白免疫沉淀实验检测神经元... 目的探讨环状RNA HECTD1(circ-HECTD1)是否通过调控miR-98-5p/酪氨酸蛋白激酶A4(EPHA4)的表达参与氧糖剥夺(OGD)诱导的神经元损伤。方法体外分离培养小鼠原代皮层神经元,采用双荧光素酶报告基因实验、RNA结合蛋白免疫沉淀实验检测神经元中circ-HECTD1、miR-98-5p和EPHA4之间的靶向关系,并将神经元随机分为对照组(正常条件下培养24 h)与OGD 6 h、12 h、24 h组(予OGD处理6 h、12 h、24 h)以及OGD+Vector组与OGD+circ-HECTD1组、OGD+小干扰RNA(siRNA)阴性对照(si-NC)组与OGD+siRNA circ-HECTD1(si-circ-HECTD1)组、OGD+微小RNA(miRNA)模拟物阴性对照(miR-NC)组与OGD+miR-98-5p模拟物(miR-98-5p mimic)组、OGD+miRNA抑制物阴性对照(anti-miR-NC)组与OGD+miR-98-5p抑制物(anti-miR-98-5p)组、OGD+miR-98-5p mimic+pcDNA组与OGD+miR-98-5p mimic+EPHA4组、OGD+si-circ-HECTD1+anti-miR-NC组与OGD+si-circ-HECTD1+anti-miR-98-5p组,分别转染pCD5-ciR空载体、pCD5-ciR-circ-HECTD1过表达载体、si-NC、si-circ-HECTD1、miR-NC、miR-98-5p mimic、anti-miR-NC、anti-miR-98-5p至神经元,以及共转染miR-98-5p mimic和pcDNA3.1空载体、miR-98-5p mimic和pcDNA3.1-EPHA4过表达载体、si-circ-HECTD1和anti-miR-NC、si-circ-HECTD1和anti-miR-98-5p至神经元,OGD处理24 h后,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测circ-HECTD1、miR-98-5p和EPHA4 mRNA表达,采用Western blotting实验检测EPHA4蛋白表达,采用MTT法检测细胞增殖活性,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用ELISA法检测细胞培养液中白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量,采用试剂盒法检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)活性。结果(1)circ-HECTD1能够与miR-98-5p靶向结合,miR-98-5p能够与EPHA43’’翻译区靶向结合。(2)与对照组比较,OGD 6 h、12 h、24 h组神经元中circ-HECTD1表达均明显升高,miR-98-5p表达均明显降低,EPHA4蛋白表达均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)与OGD+Vector组比较,OGD+circ-HECTD1组神经元中circ 展开更多
关键词 环状RNA HECTD1 miR-98-5p 酪氨酸蛋白激酶a4 氧糖剥夺 神经元
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人参皂苷Rg1对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶诱导的帕金森病小鼠黑质酪氨酸蛋白激酶A4表达的影响 被引量:2
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作者 魏家彬 杨帆 王淑秀 《新乡医学院学报》 CAS 2015年第5期404-407,411,共5页
目的探讨人参皂苷Rg1对帕金森病(PD)小鼠黑质中酪氨酸蛋白激酶A4(Eph A4)表达的影响及意义。方法将45只C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、模型组、人参皂苷Rg1组、1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)+人参皂苷Rg1+9-(四氢-2-呋喃基)-... 目的探讨人参皂苷Rg1对帕金森病(PD)小鼠黑质中酪氨酸蛋白激酶A4(Eph A4)表达的影响及意义。方法将45只C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、模型组、人参皂苷Rg1组、1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)+人参皂苷Rg1+9-(四氢-2-呋喃基)-9H-嘌呤-6-胺(SQ22536)组和MPTP+人参皂苷Rg1+N-[2-(P-溴苯丙烯盐基氨基)乙基]-5-异喹啉磺酰胺(H-89)组。正常对照组和模型组小鼠腹腔注射生理盐水,其他各组小鼠腹腔注射人参皂苷Rg1预防给药,腹腔注射MPTP构建PD模型,MPTP+人参皂苷Rg1+SQ22536组和MPTP+人参皂苷Rg1+H-89组在注射MPTP前30 min分别注射SQ22536和H-89。采用反转录-聚合酶链反应和Western blot检测小鼠黑质Eph A4 mRNA和蛋白表达水平。结果模型组、人参皂苷Rg1组、MPTP+人参皂苷Rg1+SQ22536组和MPTP+人参皂苷Rg1+H-89组小鼠黑质Eph A4 mRNA表达水平显著高于正常对照组(P<0.01,P<0.05),但人参皂苷Rg1组、MPTP+人参皂苷Rg1+SQ22536组和MPTP+人参皂苷Rg1+H-89组小鼠黑质Eph A4 mRNA表达水平显著低于模型组(P<0.01);MPTP+人参皂苷Rg1+SQ22536组和MPTP+人参皂苷Rg1+H-89组小鼠黑质Eph A4 mRNA表达水平显著高于人参皂苷Rg1组(P<0.01)。模型组、人参皂苷Rg1组、MPTP+人参皂苷Rg1+SQ22536组和MPTP+人参皂苷Rg1+H-89组小鼠黑质Eph A4蛋白表达水平显著高于正常对照组(P<0.01),但人参皂苷Rg1组、MPTP+人参皂苷Rg1+SQ22536组和MPTP+人参皂苷Rg1+H-89组小鼠黑质Eph A4蛋白表达水平显著低于模型组(P<0.01,P<0.05);MPTP+人参皂苷Rg1+SQ22536组和MPTP+人参皂苷Rg1+H-89组小鼠黑质Eph A4蛋白表达水平显著高于人参皂苷Rg1组(P<0.01,P<0.05)。结论 MPTP可能通过促进小鼠中脑黑质区Eph A4的表达导致PD发生;人参皂苷Rg1可能通过活化腺苷酸环化酶/环磷酸腺苷/蛋白激酶A信号转导通路,降低PD小鼠黑质区Eph A4的表达而改善PD症状。 展开更多
关键词 帕金森病 人参皂苷RG1 酪氨酸蛋白激酶a4 9-(四氢-2-呋喃基)-9H-嘌呤-6-胺 N-[2-(P-溴苯丙烯盐基氨基)乙基]-5-异喹啉磺酰胺
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硫酸软骨素酶ABC治疗减少大鼠脊髓损伤引起的酪氨酸蛋白激酶A4的表达
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作者 刘喜民 康红钰 +1 位作者 徐纪伟 孙丹华 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期498-504,共7页
本研究旨在探讨大鼠脊髓损伤(spinal cord impairment,SCI)后硫酸软骨素酶ABC(chondroitinase ABC,ChABC)对酪氨酸蛋白激酶A4(ephrin A4,EphA4)表达变化的影响。选取成年雌性SD大鼠,随机分为假手术组、生理盐水(NS)组和ChABC组。NS组和C... 本研究旨在探讨大鼠脊髓损伤(spinal cord impairment,SCI)后硫酸软骨素酶ABC(chondroitinase ABC,ChABC)对酪氨酸蛋白激酶A4(ephrin A4,EphA4)表达变化的影响。选取成年雌性SD大鼠,随机分为假手术组、生理盐水(NS)组和ChABC组。NS组和ChABC组大鼠行脊髓半切损伤术,并通过蛛网膜下腔分别注射NS和ChABC;假手术组仅接受背部切开术,没有半切脊髓。SCI后1、3、7、14、21d取损伤段脊髓样品,采用免疫荧光染色和免疫印迹检测各组EphA4表达;SCI后3d采用免疫荧光双标法检测损伤段脊髓内生长相关蛋白-43(growth associated protein43,GAP-43)和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达情况。结果显示,术后1、3、7d,NS组EphA4阳性神经元数明显少于假手术组(P<0.01),而术后14、21d,ChABC组和NS组EphA4阳性神经元多于假手术组(P<0.05)。值得注意的是,在术后各时间点,ChABC组EphA4阳性神经元数均明显低于NS组(P<0.01)。免疫印迹结果与免疫荧光术所得结果一致。术后3d,各组GFAP标记胶质细胞数之间相比较,假手术组最多,NS组次之,ChABC组最少;另外,各组均未出现GAP-43阳性神经元。以上结果提示,SCI后,ChABC可以降低神经元EphA4的表达,并减少EphA4阳性神经元周围的胶质细胞数,从而改善脊髓的内环境,有利于神经轴突的生长与延伸。 展开更多
关键词 脊髓损伤 硫酸软骨素酶ABC 酪氨酸蛋白激酶a4
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