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昆虫酚氧化酶原活化及其在免疫中的作用 被引量:26
1
作者 时超美 《昆虫知识》 CSCD 2000年第5期310-314,共5页
关键词 昆虫 氧化酶 免疫防御反应 活化
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对虾免疫机能研究概况 被引量:29
2
作者 陈国福 黄倢 宋晓玲 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期209-215,共7页
Shrimp farming is an important source of revenue and employment in many developing countries.However,infectious diseases have adversely affected the profitability of shrimp industry.For this reason,disease prevention ... Shrimp farming is an important source of revenue and employment in many developing countries.However,infectious diseases have adversely affected the profitability of shrimp industry.For this reason,disease prevention is a priority and shrimp immunology has become a crucial research area of this field. In this paper,the current importance and problems of shrimp-culture were described and the research advances in shrimp immunological defence mechanisms were summarized. The immunological tools are powerful and useful to evaluate the health state of the shrimp. The immunologies of shrimp mainly consist of cellular immunity and humoral immunity. In regard to cellular parameters, they are composed of haemocyte count (THC), differential haemocyte count (DHC) and reactive oxygen intermediates (ROIs). The immunity cells exert their defence functions through phagocytizing, enveloping, etc,and the changes of THC and DHC are related to health state of shrimp. The ROIs generated during post phagocytic event which maybe an important marker to evaluate the immunological capability and phenoloxidase activity have been considered as a potential marker which is relevant to the health of the shrimp too. Concerning humoral parameters, prophenoloxidase (ProPO) and phenoloxidase, antimicrobial peptides and proteins, hemagglutinin and plasma proteins were described. The determining methods of immunity parameters were discussed. The response of shrimp to pathogens such as bacteria, virus, etc. and environmental factors such as DO, pH, etc, were also reviewed. It is well-known that the immune responses induced by immunizing crustacean or shrimp are mainly the non-specific immune responses. The potential of immunological parameters, including the changes of THC and DHC, the production of ROIs, phenoloxidase (PO) activity, antibacterial activity of plasma, and so on, to appraise the healthy state of shrimp were partly discussed. The future directions for the evaluation of the immunological capability of shrimp were proposed. 展开更多
关键词 对虾 免疫机能 免疫学指标 血细胞 氧化酶 氧化酶 抗菌肽 抗菌蛋白 凝集素 血清蛋白
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棉铃虫血淋巴酚氧化酶活性的微量测定 被引量:24
3
作者 尹丽红 王琛柱 钦俊德 《昆虫知识》 CSCD 北大核心 2001年第2期119-122,共4页
昆虫血淋巴黑化的形成由激活酚氧化酶原的级联系统所引发 ,酚氧化酶在昆虫体液免疫中起着重要作用。用抗凝剂从棉铃虫血淋巴中分离获得了血浆及完整的血细胞 ,以L DOPA为底物 ,牛胰蛋白酶为激活剂 ,测定了血浆及血细胞裂解液中酚氧化酶... 昆虫血淋巴黑化的形成由激活酚氧化酶原的级联系统所引发 ,酚氧化酶在昆虫体液免疫中起着重要作用。用抗凝剂从棉铃虫血淋巴中分离获得了血浆及完整的血细胞 ,以L DOPA为底物 ,牛胰蛋白酶为激活剂 ,测定了血浆及血细胞裂解液中酚氧化酶及酚氧化酶原的活性。结果表明 ,血浆及血细胞中两者都有一定量的分布。这一昆虫血淋巴酚氧化酶的微量测定方法 ,所需样品量少 ,耗时短 ,简便易行。 展开更多
关键词 棉铃虫 氧化酶 氧化酶 微量测定
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棉铃虫齿唇姬蜂对棉铃虫血淋巴酚氧化酶的影响 被引量:14
4
作者 尹丽红 王琛柱 钦俊德 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2001年第15期1303-1307,共5页
以齿唇姬蜂(Campoletis chlorideae)及其寄主棉铃虫(Helicoverpa armigera)为模型,研究了内寄生蜂对寄主血淋巴酚氧化酶(PO)的影响.结果表明,棉铃虫被寄生后,血淋巴的体外黑化率显... 以齿唇姬蜂(Campoletis chlorideae)及其寄主棉铃虫(Helicoverpa armigera)为模型,研究了内寄生蜂对寄主血淋巴酚氧化酶(PO)的影响.结果表明,棉铃虫被寄生后,血淋巴的体外黑化率显著下降,酚氧化酶的活性被抑制.寄生后48 h,血浆中 PO的活性降低约 83%.注射0.5雌蜂当量的萼液对PO活性的影响与寄生相似,这表明寄生引起的PO活性的下降与寄生蜂萼液中所含成分有关.进一步研究表明,在正常未寄生情况下,血细胞中的酚氧化酶原(proPO)可被牛胰蛋白酶激活,而在寄生及注射萼液后,血细胞中的proPO则不能被牛胰蛋白酶激活,而且活性略有下降.以上结果显示,齿唇姬蜂对棉铃虫的寄生造成了PO的活性下降,而且这种抑制与寄生蜂的萼液有关,抑制的原因可能是萼液成分(多分DNA病毒等)抑制了proPO在血淋巴中的表达或加速其降解所致. 展开更多
关键词 昆虫免疫 血淋巴氧化酶 氧化酶 内寄生蜂 萼液 棉铃虫 齿唇姬蜂 活性
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短沟对虾和斑节对虾酚氧化酶原基因的克隆和序列分析 被引量:12
5
作者 叶星 郑清梅 +3 位作者 白俊杰 劳海华 简清 罗建仁 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期533-540,共8页
采用RT PCR原理和长片段扩增技术克隆短沟对虾和斑节对虾酚氧化酶原基因。设计合成特异引物、提取血细胞总RNA ,反转录后扩增获得的特异片段回收并克隆到pGEM TEasyVector系统的T载体上 ,重组子进行碱基序列测定。结果表明 ,所克隆的短... 采用RT PCR原理和长片段扩增技术克隆短沟对虾和斑节对虾酚氧化酶原基因。设计合成特异引物、提取血细胞总RNA ,反转录后扩增获得的特异片段回收并克隆到pGEM TEasyVector系统的T载体上 ,重组子进行碱基序列测定。结果表明 ,所克隆的短沟对虾酚氧化酶原基因含起始密码子ATG到终止密码子TGA的 2 0 5 5bp ,编码 6 84个氨基酸。斑节对虾酚氧化酶原基因含ATG到TGA的 2 0 6 1bp ,编码 6 86个氨基酸。短沟对虾酚氧化酶原推算分子量为 781 5 3Da ,等电点pI为 6 2 5 ;斑节对虾则为 785 81Da ,pI为 5 83。用DNA分析软件分析显示两种对虾酚氧化酶原基因具有高度的同源性 ,二者的碱基和推测的氨基酸序列同源性分别为 93 %和 92 %;对虾与其他节肢动物酚氧化酶原基因的同源性的高低与种类间亲缘关系相关 ;不同种类间酚氧化酶活性中心重要组成部分的 2个铜结合位点、位于铜结合位点内的6个组氨酸以及与铜结合位点相邻的氨基酸序列高度保守。 展开更多
关键词 短沟对虾 斑节对虾 氧化酶 基因 克隆 序列分析 碱基 氨基酸 同源性
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酚氧化酶及其酶原的生化特性与分子生物学研究进展 被引量:13
6
作者 庞秋香 庞书香 赵博生 《现代生物医学进展》 CAS 2008年第1期196-200,共5页
酚氧化酶(简称PO),又称为酪氨酸酶(tyrosinase,EC1.14.18.1),是一种含铜的酶。它能够分别催化单酚羟基和二羟基酚氧化成二酚(如多巴)和醌,醌在非酶促条件下形成最终的反应产物黑色素。PO在脊椎动物和无脊椎动物中都广泛存在,被认为是一... 酚氧化酶(简称PO),又称为酪氨酸酶(tyrosinase,EC1.14.18.1),是一种含铜的酶。它能够分别催化单酚羟基和二羟基酚氧化成二酚(如多巴)和醌,醌在非酶促条件下形成最终的反应产物黑色素。PO在脊椎动物和无脊椎动物中都广泛存在,被认为是一种参与免疫的重要因子。本文就酚氧化酶及其酶原的生化特性和分子生物学特性研究的进展情况予以综述。 展开更多
关键词 氧化酶 氧化酶 生化特性 分子生物学
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昆虫酚氧化酶的研究进展 被引量:13
7
作者 刘丽萍 奚耕思 +1 位作者 王芳 刘晓明 《生命科学》 CSCD 2013年第4期383-387,共5页
酚氧化酶(phenoloxidase,PO)又名酪氨酸酶,是一种普遍存在于动物和植物体内的铜离子酶,具有多种生物学功能。酚氧化酶可把单酚羟化成二酚(如多巴),接着二酚被氧化成醌,在非酶促反应条件下,醌形成的最终产物是黑色素。生成的黑色素对昆... 酚氧化酶(phenoloxidase,PO)又名酪氨酸酶,是一种普遍存在于动物和植物体内的铜离子酶,具有多种生物学功能。酚氧化酶可把单酚羟化成二酚(如多巴),接着二酚被氧化成醌,在非酶促反应条件下,醌形成的最终产物是黑色素。生成的黑色素对昆虫的正常生长发育具有重要作用。酚氧化酶一般以无活性的酚氧化酶原(prophenoloxidase,proPO)形式存在于昆虫的血淋巴中。从昆虫酚氧化酶的结构、分布、活化的分子机制和功能及研究进展等方面进行综述。 展开更多
关键词 氧化酶 氧化酶 黑色素
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中国明对虾酚氧化酶原基因cDNA的克隆与表达特征 被引量:14
8
作者 孙杰 王宝杰 +4 位作者 李晓华 孙姝娟 刘梅 蒋克勇 王雷 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期56-66,共11页
利用3′和5′RACE技术从中国明对虾血细胞中克隆了一个酚氧化酶原基因FCproPO,FCproPO基因cDNA全长为2311bp,其中开放阅读框2061bp,编码687个氨基酸,预测分子量为78.71ku。推测的序列与凡纳滨对虾同源性为84%,与日本囊对虾同源性为71%。... 利用3′和5′RACE技术从中国明对虾血细胞中克隆了一个酚氧化酶原基因FCproPO,FCproPO基因cDNA全长为2311bp,其中开放阅读框2061bp,编码687个氨基酸,预测分子量为78.71ku。推测的序列与凡纳滨对虾同源性为84%,与日本囊对虾同源性为71%。RT-PCR实验结果表明,FCproPO在血细胞中的相对表达量最高,在心脏和精巢中几乎不表达。序列分析发现FCproPO含有两个保守的铜离子结合位点;进化分析发现FCproPO与斑节对虾、日本囊对虾、凡纳滨对虾等海水虾的酚氧化酶原亲缘关系最近。该基因在被鳗弧菌和对虾白斑病毒(WSSV)感染后的对虾肝胰腺中的表达量显著增加,并具有不同的时空表达趋势,提示中国明对虾FCproPO基因在免疫反应中具有重要作用。 展开更多
关键词 中国明对虾 氧化酶 基因克隆 表达
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仿刺参体腔液中酚氧化酶活性的分析 被引量:9
9
作者 王轶南 穆晓虎 +2 位作者 封妮莎 宋坚 常亚青 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期319-322,共4页
在(22±1)℃下抽取体质量为95.0~105.0 g的仿刺参Apostichopus japonicas体腔液,制备体腔液及体腔细胞溶解上清液(CLS),分别测定其酚氧化酶(PO)活性,检测分析不同刺激物(CaCl2、MgCl2、LPS、SDS、Trypsin和甲醇)对酚氧化酶原(proPO... 在(22±1)℃下抽取体质量为95.0~105.0 g的仿刺参Apostichopus japonicas体腔液,制备体腔液及体腔细胞溶解上清液(CLS),分别测定其酚氧化酶(PO)活性,检测分析不同刺激物(CaCl2、MgCl2、LPS、SDS、Trypsin和甲醇)对酚氧化酶原(proPO)系统的激活效果,并比较了不同规格仿刺参体腔液的酚氧化酶活性。结果表明:仿刺参体腔液中的PO活性个体差异较大,平均为(146.90±55.60)U,体腔液与不同激活剂作用后PO活性均无明显变化;CLS中的PO活性为31.82 U,其在100 mmol/L MgCl2作用后PO活性大幅度提高,proPO比活为43.9 U,CLS与LPS、CaCl2和甲醇作用后PO活性无明显增加,与SDS和Trypsin作用后PO活性表现出一定的抑制。研究表明,仿刺参体腔液中的PO主要存在于体腔液中,CLS中的PO活性较低,proPO主要存在于体腔细胞中,可被Mg2+大幅度激活。52.4~68.5、20.7~24.4、4.9~5.6 g 3种规格的仿刺参体腔液中的PO活性分别为(42.18±7.62)、(34.10±9.28)、(33.29±7.42)U,表明不同规格仿刺参体腔液中的PO活性存在一定差异,总体呈现随规格的增大PO活性增强的趋势,其中100 g左右的仿刺参与3个较小规格的仿刺参体腔液中的PO活性存在显著性差异(P<0.05)。 展开更多
关键词 仿刺参 体腔液 氧化酶 氧化酶
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酚氧化酶及其酶原的研究进展(Ⅱ)——免疫学特性、细胞定位及其功能 被引量:8
10
作者 庞秋香 庞书香 赵博生 《现代生物医学进展》 CAS 2008年第7期1385-1388,共4页
酚氧化酶(Phenoloxidase,PO)又称为酪氨酸酶(tyrosinase,EC1.14.18.1),是一种含铜的酶,能够催化单酚羟化成二酚(如多巴),并把二酚氧化成醌;醌在非酶促条件下形成最终的反应产物黑色素。PO在脊椎动物和无脊椎动物中都广泛存在,而且被认... 酚氧化酶(Phenoloxidase,PO)又称为酪氨酸酶(tyrosinase,EC1.14.18.1),是一种含铜的酶,能够催化单酚羟化成二酚(如多巴),并把二酚氧化成醌;醌在非酶促条件下形成最终的反应产物黑色素。PO在脊椎动物和无脊椎动物中都广泛存在,而且被认为是一种参与免疫的重要因子。本文就酚氧化酶及其酶原的免疫学特性、细胞定位及其功能研究进展进行综述。 展开更多
关键词 氧化酶 氧化酶 免疫学特性 细胞定位 功能
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根虫瘟霉不同菌株对小菜蛾幼虫血淋巴酚氧化酶原的激活作用 被引量:7
11
作者 刘青娥 徐均焕 冯明光 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期434-438,共5页
在对小菜蛾Plutellaxylostella幼虫血淋巴酚氧化酶原的存在部位及免疫激活作用特点研究的基础上 ,比较了根虫瘟霉Zoophthoraradicans不同菌株对酚氧化酶原激活系统的免疫激化及防御作用的差异。研究发现 ,酚氧化酶原主要位于小菜蛾幼虫... 在对小菜蛾Plutellaxylostella幼虫血淋巴酚氧化酶原的存在部位及免疫激活作用特点研究的基础上 ,比较了根虫瘟霉Zoophthoraradicans不同菌株对酚氧化酶原激活系统的免疫激化及防御作用的差异。研究发现 ,酚氧化酶原主要位于小菜蛾幼虫血细胞膜及血细胞裂解液中 ,极少存在于血浆中。在免疫激活剂昆布多糖存在下 ,分别测得小菜蛾幼虫血细胞碎片、血细胞裂解液和血浆的酚氧化酶活性为 2 6 .80U ,16 .6 8U和 2 .5 3U。酚氧化酶原显著地受血浆和昆布多糖同时存在的激活 ,但两者单独存在时对酚氧化酶原的激活作用较弱。根虫瘟霉菌丝裂解液对酚氧化酶原有不同程度的激活作用 ,其激活作用在有血浆存在时显著增强 ,其酚氧化酶活性可提高 2 .9~ 3.4倍。各菌株间对酚氧化酶原的激活作用则以ARSEF1342菌株最强 ,ARSEF2 6 99和F9910 1菌株次之 ,ARSEF110 0菌株最弱。被激活的酚氧化酶可粘附于根虫瘟霉菌丝上并能产生黑化反应 ,各菌株间酚氧化酶粘附于ARSEF1342菌株的能力最强 ,粘附于ARSEF2 6 99和F9910 1菌株的次之 ,粘附于ARSEF110 0菌株的最弱。但酚氧化酶粘附于昆布多糖的能力显著强于各虫霉菌株 ,表明各菌株在一定程度上能逃避寄主的免疫识别 ;各菌株激活酚氧化酶原及酚氧化酶粘附于菌株强弱 ,与对小菜蛾毒力? 展开更多
关键词 根虫瘟霉 小菜蛾 氧化酶 氧化酶 昆虫免疫
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亚洲玉米螟幼虫血清中酚氧化酶原的性质 被引量:5
12
作者 冯从经 杜予州 +1 位作者 陆自强 符文俊 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期649-654,共6页
采用40%硫酸铵沉淀、Blue Sepharose CL-6B亲和层析和Phenyl Sepharose CL-4B疏水层析等方法,从亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis(Guenée)幼虫血清中分离纯化了酚氧化酶原.酚氧化酶原全酶相对分子量约为158 kD,亚基相对分子量约为80... 采用40%硫酸铵沉淀、Blue Sepharose CL-6B亲和层析和Phenyl Sepharose CL-4B疏水层析等方法,从亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis(Guenée)幼虫血清中分离纯化了酚氧化酶原.酚氧化酶原全酶相对分子量约为158 kD,亚基相对分子量约为80 kD和78 kD.酚氧化酶原为糖蛋白,该酶原易被0.1 mmol/L CPC(氯代十六烷基吡啶)、50%甲醇、1 mg/mL昆布多糖和1 mg/mL胰蛋白酶激活.该酶反应的最适pH为7.0,最适温度为25~30℃,Ca2+和Mg2+可增强该酶的活性. 展开更多
关键词 亚洲玉米螟 血清 氧化酶 分子量 最适PH 最适温度 活性
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脊尾白虾酚氧化酶原基因克隆及表达分析 被引量:7
13
作者 李洋 刘萍 +4 位作者 李健 李吉涛 马朋 高保全 段亚飞 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期299-306,共8页
利用RACE方法获得了脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)酚氧化酶原(Prophenoloxidase,proPO)基因。该基因cDNA全长3092bp,开放阅读框2013bp,编码671个氨基酸,其预测分子量为74.82kDa。脊尾白虾酚氧化酶原基因推导的氨基酸序列与其他虾... 利用RACE方法获得了脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)酚氧化酶原(Prophenoloxidase,proPO)基因。该基因cDNA全长3092bp,开放阅读框2013bp,编码671个氨基酸,其预测分子量为74.82kDa。脊尾白虾酚氧化酶原基因推导的氨基酸序列与其他虾类酚氧化酶原氨基酸序列同源性较高(65%—78%),该氨基酸序列具有铜离子结合位点等酚氧化酶原基因所具有的典型特征位点。组织表达分析结果表明,proPO基因在脊尾白虾血细胞中表达量最高,其次是鳃和肝胰腺组织,在肌肉中几乎不表达。利用荧光定量PCR分析了不同盐度胁迫下脊尾白虾血细胞和鳃组织中的表达变化规律,结果发现在不同盐度胁迫后血淋巴proPO表达量显著高于对照组,盐度胁迫初期鳃组织proPO表达量显著高于对照组。本研究结果表明脊尾白虾酚氧化酶原基因参与了盐度胁迫引起的机体应激反应。 展开更多
关键词 脊尾白虾 氧化酶 基因克隆 表达 盐度胁迫
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口虾蛄proPO基因全长cDNA的克隆与组织表达 被引量:5
14
作者 刘海映 刘连为 +2 位作者 姜玉声 隋宥珍 陈雷 《生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1713-1720,共8页
口虾蛄是海湾底拖网渔业中具有重要经济价值的种类,分布广泛。其自然资源日渐衰退,人工育苗技术获得成功后,口虾蛄养殖过程中病害问题及其防治应引起足够的重视。为此,拟通过分子生物学手段研究口虾蛄免疫系统的核心酶——酚氧化酶(PO)... 口虾蛄是海湾底拖网渔业中具有重要经济价值的种类,分布广泛。其自然资源日渐衰退,人工育苗技术获得成功后,口虾蛄养殖过程中病害问题及其防治应引起足够的重视。为此,拟通过分子生物学手段研究口虾蛄免疫系统的核心酶——酚氧化酶(PO)的分子结构及该基因的组织表达,从而在分子水平上深入探究其免疫机理。采用反转录PCR(RT-PCR)与cDNA末端快速克隆(RACE)技术从口虾蛄血细胞中克隆了酚氧化酶原(O-proPO)基因,cDNA全长为2436bp,其中开放阅读框为2142bp,编码713个氨基酸。预测分子量为82446Da,等电点(pI)为8.78。该基因与Genbank上登录的斑节对虾、凡纳滨对虾、罗氏沼虾、短沟对虾、日本对虾proPO基因序列具有较高的同源性,分别为82%、76%、76%、72%、70%。序列分析表明O-proPO为proPO家族中的一个成员,其氨基酸序列中含有多个免疫调节作用位点。系统进化分析显示O-proPO与十足目种类的proPO为同一分支的2个亚群,而后于丰年虫的proPO形成一分支。O-proPO基因表达具有组织特异性,在血淋巴和肠中表达,但在血淋巴中表达量明显高于肠。 展开更多
关键词 口虾蛄 氧化酶 分子克隆 表达分析
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亚洲玉米螟幼虫酚氧化酶原基因序列的生物信息学分析 被引量:4
15
作者 冯从经 陆剑锋 +2 位作者 黄建华 郭晓丽 桑守亮 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1068-1077,共10页
酚氧化酶原PPO是昆虫免疫的关键酶,本文从生物信息学角度对亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis Guen啨e幼虫PPO进行分析,为进一步研究其高级结构与功能的关系提供理论依据。利用我们已提交到GenBank的数据,采用在线分析及MEGA4和RasMol软件... 酚氧化酶原PPO是昆虫免疫的关键酶,本文从生物信息学角度对亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis Guen啨e幼虫PPO进行分析,为进一步研究其高级结构与功能的关系提供理论依据。利用我们已提交到GenBank的数据,采用在线分析及MEGA4和RasMol软件对亚洲玉米螟酚氧化酶原(Of-PPO)的核苷酸和氨基酸序列、系统发生关系和蛋白质三级结构进行分析。结果表明:Of-PPO全长cDNA序列有2686bp,包含一个2079bp的开放阅读框,其推导的693个氨基酸序列中包含6个组氨酸残基构成的2个铜离子结合位点,以及保守的硫羟酸酯区域。Of-PPO属于PPO2类群,其N端不含信号肽,无跨膜结构域区域,无糖基化位点,44个磷酸化位点均匀分布于整个多肽链中,有2段序列可能形成卷曲螺旋,有5个区域的氨基酸具较强疏水性,其二级结构中α-螺旋占22.54%,随机卷曲占56.79%。同源建模显示其三级结构为"α/β型"中的"滚筒结构",存在一个明显的空位,可能与该酶催化活性有关。本文可为Of-PPO的实验研究和应用开发提供有价值的信息。 展开更多
关键词 亚洲玉米螟 氧化酶 生物信息学分析 三级结构 同源建模
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致病性粪肠球菌对脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)免疫相关基因表达的影响 被引量:4
16
作者 段亚飞 李健 +2 位作者 李吉涛 张喆 刘萍 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2017年第5期148-155,共8页
为了研究致病性粪肠球菌(Enterococcus faecalis)对脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)免疫相关基因表达的影响,分别对健康脊尾白虾注射生理盐水和粪肠球菌,测定了不同时间点血细胞和肝胰腺中酚氧化酶原(proPO)、C型凝集素(CTL)、超氧... 为了研究致病性粪肠球菌(Enterococcus faecalis)对脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)免疫相关基因表达的影响,分别对健康脊尾白虾注射生理盐水和粪肠球菌,测定了不同时间点血细胞和肝胰腺中酚氧化酶原(proPO)、C型凝集素(CTL)、超氧化物歧化酶(SOD)、组织蛋白酶D(Cat D)和组织蛋白酶L(Cat L)基因的相对表达量变化。结果显示,与对照组相比,感染粪肠球菌后,血细胞和肝胰腺中pro PO基因表达量均于6 h达到最大值(P<0.05),随后逐渐降低至对照组水平;血细胞和肝胰腺中CTL基因表达量分别于12 h和6 h上升至最大值,随后逐渐降低;血细胞中CTL基因表达量于72 h虽有降低,但仍显著高于对照组(P<0.05);血细胞和肝胰腺中SOD基因表达量分别于6 h和3 h达到最大值,随后逐渐降低,并于72 h达到正常水平;血细胞和肝胰腺中Cat D基因表达量变化趋势基本一致,呈现先降低后升高、然后显著降低再升高的趋势;血细胞和肝胰腺中Cat L基因表达量分别于6 h和3 h显著降低,随后逐渐升高至最大值,并于72 h达到对照组水平。研究表明,长时间的粪肠球菌感染对脊尾白虾免疫相关基因表达影响显著,本研究所用免疫相关基因均可作为粪肠球菌感染疾病的监测指标。 展开更多
关键词 脊尾白虾 粪肠球菌 氧化酶 C型凝集素 氧化物歧化 组织蛋白
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亚洲玉米螟幼虫体内酚氧化酶原cDNA片段的克隆 被引量:3
17
作者 冯从经 戴华国 符文俊 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期130-132,共3页
利用昆虫酚氧化酶原 (PPO)基因序列设计简并引物 ,采用RT PCR方法从亚洲玉米螟幼虫体内扩增了一段 5 2 2个核苷酸的cDNA片段 ,编码 174个氨基酸。经Blastp分析表明 ,该段氨基酸序列同鳞翅目和双翅目中PPO的相同区域具有较高的相似性 ( ... 利用昆虫酚氧化酶原 (PPO)基因序列设计简并引物 ,采用RT PCR方法从亚洲玉米螟幼虫体内扩增了一段 5 2 2个核苷酸的cDNA片段 ,编码 174个氨基酸。经Blastp分析表明 ,该段氨基酸序列同鳞翅目和双翅目中PPO的相同区域具有较高的相似性 ( 39%~ 6 3% )。其中与烟草天蛾PPO的相似性最高 ( 6 3% ) ;与家蚕、大蜡螟、惜古比天蚕蛾PPO也有较高的相似性。在该片段中含有 1个该类酶原中保守的 2个铜离子结合位点之一 (含 4个组氨酸残基 )。据此推断克隆的片段为PPO基因片段。 展开更多
关键词 亚洲玉米螟 幼虫 氧化酶 CDNA片段 克隆 基因
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日本沼虾酚氧化酶原基因cDNA的全长克隆及表达分析 被引量:4
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作者 王文锋 马建敏 +3 位作者 杨洪 刘方 陈香丽 宁黔冀 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期744-750,共7页
目的克隆日本沼虾酚氧化酶原(proPO)基因,进行生物信息学及时空表达分析。方法利用RT-PCR和快速扩增cDNA末端(RACE)技术从血细胞中克隆proPO基因cDNA全长序列,用生物软件对其序列进行生物信息学分析;proPO基因时空表达分析采用RT-PCR和R... 目的克隆日本沼虾酚氧化酶原(proPO)基因,进行生物信息学及时空表达分析。方法利用RT-PCR和快速扩增cDNA末端(RACE)技术从血细胞中克隆proPO基因cDNA全长序列,用生物软件对其序列进行生物信息学分析;proPO基因时空表达分析采用RT-PCR和Real-time PCR方法;腹部肌肉注射嗜水气单胞菌(5.0×109/L)诱导酚氧化酶(PO),20μl/只,注射后3、6、12、24h取其血淋巴,分别测定血细胞proPO mRNA水平及血清酚氧化酶(PO)活力。结果日本沼虾proPO基因cDNA全长2428bp,包含71 bp的5’UTR、344 bp的3’UTR和2013bp的开放阅读框(ORF)。ORF编码671个氨基酸,预测蛋白分子量为76.5kD,理论等电点(pI)约为7.31;含有2个保守的铜离子结合位点和6个组氨酸残基、1个蛋白酶水解位点和硫酯样的基序(GCGWPRHM);含有3个血蓝蛋白结构域;与罗氏沼虾proPO的相似性最高,为93%,与其他甲壳动物proPO相似性为50%~53%。该基因表达具有组织特异性,血细胞最高,肝胰腺有较弱表达,肌肉、鳃、肠、大颚器官和卵巢不表达;血细胞proPO基因的表达量在蜕皮前期(D0/1)最高;嗜水气单胞菌刺激后6 h血细胞proPO mRNA水平及血清中PO活力均显著增加。结论与其他甲壳动物相似,日本沼虾proPO基因具有2个保守的铜离子结合位点;其表达呈组织特异性,最高出现在血细胞;在蜕皮周期的前期(D0/1)血细胞表达量最高;嗜水气单胞菌可诱导proPO基因的表达以及PO活力,提示该基因是参与机体免疫防御反应的一种重要分子。 展开更多
关键词 氧化酶 时空表达 快速扩增cDNA末端技术 实时荧光定量聚合链反应 日本沼虾
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亚洲玉米螟酚氧化酶原的原核表达和性质分析 被引量:2
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作者 赵同伟 张兵 +5 位作者 吕文静 翟会锋 吴桃燕 张石洋 汤小伟 冯从经 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期798-805,共8页
【目的】昆虫体内酚氧化酶原(PPO)是一种重要的天然免疫蛋白,参与昆虫的体液免疫和细胞免疫过程。本研究采用原核表达体系,大量表达可溶且具有活性的重组PPO蛋白,可用于各种酚氧化酶(PO)抑制剂的筛选,从而为创制抑制昆虫免疫系统的新型... 【目的】昆虫体内酚氧化酶原(PPO)是一种重要的天然免疫蛋白,参与昆虫的体液免疫和细胞免疫过程。本研究采用原核表达体系,大量表达可溶且具有活性的重组PPO蛋白,可用于各种酚氧化酶(PO)抑制剂的筛选,从而为创制抑制昆虫免疫系统的新型杀虫剂提供条件。【方法】利用从亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis 5龄幼虫体内克隆获得PPO基因,构建了pET-28b-PPO原核表达载体,在大肠杆菌Escherichia coli中重组表达了亚洲玉米螟PPO蛋白;采用Ni-NAT亲和层析柱快速纯化目的蛋白,进行了Western杂交鉴定;测定分析了重组PPO蛋白激活为PO后的酶学性质以及不同金属离子(Mg2+,Cu2+和Fe2+)对PPO二级结构的影响。【结果】融合蛋白PPO得到了表达和纯化。重组PPO蛋白激活为PO后最适反应温度为30℃,最适pH为7.2,以L-DOPA为底物时PO催化反应的Vmax为140.8 U/mg·min,Km为2.96 mmol/L。Fe2+存在的情况下重组PPO蛋白中β-折叠结构成分显著增加至53.7%±4.6%,α-螺旋结构成分则显著下降至2.6%±1.2%(P<0.05);有Mg2+存在的情况下,重组PPO蛋白中β-折叠结构成分显著下降,α-螺旋结构成分稍有上升。有Cu2+存在的情况下,重组PPO蛋白中β-折叠结构成分显著下降为10.0%±1.6%,而α-螺旋结构成分则上升至35.3%±6.9%。【结论】结果说明不同金属离子对重组PPO蛋白的二级结构有显著影响。 展开更多
关键词 亚洲玉米螟 氧化酶 核表达 蛋白纯化 氧化酶 学性质
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长毛明对虾酚氧化酶原基因cDNA克隆及组织表达分析 被引量:2
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作者 韦光本 伍元植 +4 位作者 张依琳 吴凡 黄郁葱 蔡双虎 汤菊芬 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期4910-4918,共9页
酚氧化酶(phenoloxidase,PO)属于对虾免疫系统的核心酶,在机体抵抗微生物感染过程中起到重要的作用。本研究利用RT-PCR和RACE技术克隆长毛明对虾(Fenneropenaeus penicillatus)酚氧化酶原(prophenoloxidase,proPO)基因(F-proPO)。cDNA全... 酚氧化酶(phenoloxidase,PO)属于对虾免疫系统的核心酶,在机体抵抗微生物感染过程中起到重要的作用。本研究利用RT-PCR和RACE技术克隆长毛明对虾(Fenneropenaeus penicillatus)酚氧化酶原(prophenoloxidase,proPO)基因(F-proPO)。cDNA全长3003 bp,包含63 bp的5′-UTR、879 bp的3′-UTR和编码686个氨基酸的2061 bp的开放阅读框(ORF),预测分子量为78.05 kD,理论等电点(pI)为5.79;含有3个串联式血蓝蛋白结构功能域、2个保守的Cu2+结合位点和6个组氨酸残基;多重比对结果表明,F-proPO与中国明对虾proPO相似度最高(98%),与其他甲壳类动物proPO相似度为51%~93%。实时荧光定量PCR检测结果表明,该基因的表达具有组织特异性,在血淋巴中表达量最高。人工感染溶藻弧菌后,该基因在鳃、血淋巴、肠和性腺中表达水平显著上调;人工感染白斑综合征病毒后,该基因在脑、鳃、心、血淋巴和肠中表达水平显著上调。可见,长毛明对虾PO是参与机体免疫防御反应的一种重要分子。 展开更多
关键词 长毛明对虾 氧化酶 氧化酶 基因克隆 组织表达
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