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透膜肽修饰的载流感泰得PLGA纳米粒的制备与评价 被引量:1
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作者 徐清波 丁晓然 +3 位作者 杜丽娜 鲁丹丹 金义光 王升启 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期518-522,共5页
目的制备与评价包载反义核酸药物-流感泰得的透膜肽修饰的聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(D,Llactic-co-glycolic acid),PLGA]纳米粒。方法通过固相多肽合成法合成透膜肽(trans-activating transcriptional activator,TAT),使用高效液相色... 目的制备与评价包载反义核酸药物-流感泰得的透膜肽修饰的聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(D,Llactic-co-glycolic acid),PLGA]纳米粒。方法通过固相多肽合成法合成透膜肽(trans-activating transcriptional activator,TAT),使用高效液相色谱及质谱仪检测其纯度及相对分子质量。用TAT修饰PLGA后,采用双重乳化挥发溶剂法制备包载流感泰得的新型纳米粒,并对纳米粒进行理化分析和体外缓释效果评价,主要指标有:粒径、分散系数、Zeta电位、表面形态、载药量及体外释放。Cell Count Kit-8(CCK-8)实验评价TAT-PLGA纳米粒的细胞毒性。结果合成的TAT纯度为95.6%,相对分子质量为1495.8,TAT修饰PLGA后所制备的纳米粒粒径为(159.5±2.1)nm,Zeta电位为-(1.87±0.6)mV,载药量为(5.75±0.17)μg/mg。在扫描电子显微镜下观察纳米粒形态为圆形,表面光滑,粒径分布均匀。体外释放实验结果显示TAT修饰的PLGA纳米粒包封的流感泰得具有缓释作用。细胞毒性实验结果显示,TAT修饰的PLGA纳米粒对细胞体外生长无不良影响,细胞相容性良好。结论通过固相多肽合成法成功合成了TAT,并成功使用双重乳化溶剂挥发法制备了TAT修饰的PLGA纳米粒,在流感预防与治疗方面具有潜在应用前景。 展开更多
关键词 纳米粒 聚乳酸-羟基乙酸 反义寡核苷酸 缓释
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Modification of oligonucleotides by isonucleosides incorporation and peptides conjugation
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作者 黄野 王晓锋 +1 位作者 杨振军 张礼和 《Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences》 CAS 2012年第6期499-508,共10页
Synthetic oligonucleotides including antisense oligonucleotides and siRNA have shown promising therapeutic potential.However,to realize the therapeutic potential of synthetic oligonucleotides,many obstacles have to be... Synthetic oligonucleotides including antisense oligonucleotides and siRNA have shown promising therapeutic potential.However,to realize the therapeutic potential of synthetic oligonucleotides,many obstacles have to be overcome,such as their poor biological stability,non-specific activity and inadequate cell membrane permeability.In this paper,the achievements by Lihe Zhang's group in the study of isonucleotide modified oligonucleotides and oligonucleotides conjugated with cell penetrating peptides are summarized. 展开更多
关键词 Synthetic oligonucleotide Isonucleoside Cell penetrating peptide SIRNA
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TAT透膜肽介导VP3蛋白诱导HepG_2细胞凋亡效应的研究 被引量:1
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作者 王小波 孙军 +5 位作者 彭冬君 闫莹 邹珺 陈娟 宗义强 屈伸 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2006年第3期181-185,共5页
目的探讨TAT透膜肽介导VP3融合蛋白穿透生物膜及诱导HepG2细胞凋亡的效应,为临床应用生物大分子药物治疗肿瘤提供实验基础。方法常规构建TAT-VP3、TAT-GFP及TAT-GFP-VP3的3种融合蛋白的pET28 a原核表达载体,IPTG诱导融合蛋白表达,经镍... 目的探讨TAT透膜肽介导VP3融合蛋白穿透生物膜及诱导HepG2细胞凋亡的效应,为临床应用生物大分子药物治疗肿瘤提供实验基础。方法常规构建TAT-VP3、TAT-GFP及TAT-GFP-VP3的3种融合蛋白的pET28 a原核表达载体,IPTG诱导融合蛋白表达,经镍金属鳌合层析柱纯化获得融合蛋白。通过蛋白转导实验观察其穿透生物膜的效应,利用DAPI染色及TUNEL法观察其诱导HepG2细胞凋亡的效应。结果融合蛋白TAT-GFP及TAT-GFP-VP3可进入体外培养的HepG2细胞,在荧光下可见绿色荧光,融合蛋白TAT-VP3及TAT-GFP-VP3可诱导体外培养的细胞凋亡。结论在VP3的N端加上TAT透膜肽形成的融合蛋白可有效穿透细胞膜,TAT-VP3融合蛋白能诱导HepG2细胞凋亡。 展开更多
关键词 TAT VP3融合蛋白 细胞凋亡
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大肠杆菌中透膜小肽抑制α-Synuclein聚集的研究 被引量:1
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作者 张亨 徐锐 +2 位作者 王俊卿 熊平 汪浩勇 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期26-29,共4页
目的:在大肠杆菌中研究透膜小肽抑制α-Synuclein(Α53T,S129Α,WT)的异常聚集。方法:基于α-Syn核心区的疏水区域设计了5种包含7个精氨酸的多聚精氨酸多肽膜透过传输系统的小肽R7P1~R7P5;构建融合蛋白α-Syn-GFP,其中α-Syn基因融合于... 目的:在大肠杆菌中研究透膜小肽抑制α-Synuclein(Α53T,S129Α,WT)的异常聚集。方法:基于α-Syn核心区的疏水区域设计了5种包含7个精氨酸的多聚精氨酸多肽膜透过传输系统的小肽R7P1~R7P5;构建融合蛋白α-Syn-GFP,其中α-Syn基因融合于GFP上游,透膜小肽以双顺反子方式与α-Syn-GFP共表达;以文献报道的可抑制α-Syn异常聚集的小肽ASI1D(MRRGGAVVTG(R)6)为对照,通过监测整体细胞荧光强度研究透膜小肽影响α-Syn(Α53T,S129Α,WT)的异常聚集的情况。结果:5种小肽能不同程度的抑制α-Syn(Α53T,S129Α,WT)的异常聚集;和对照Pc相比,R7P4抑制α-Syn(A53T)异常聚集的效果提高了55%,R7P3抑制α-Syn(S129A)异常聚集的效果提高了64%,R7P4抑制α-Syn(WT)异常聚集的效果提高了39%。结论:在大肠杆菌中,透膜小肽可以有效地抑制α-Syn(Α53T,S129Α,WT)的异常聚集。 展开更多
关键词 Α-SYNUCLEIN 聚集抑制 帕金森症
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小肽在原核和真核细胞中抑制α-synuclein异常折叠的研究
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作者 王俊卿 付烈 +2 位作者 周稳 熊平 汪浩勇 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期29-33,共5页
目的:研究在大肠杆菌中能够有效抑制α-synuclein异常折叠的小肽,在人神经母细胞瘤SH-SY5Y中的抑制作用。方法:基于a-Syn疏水区域设计的5种透膜小肽在大肠杆菌中能够有效抑制α-synuclein异常折叠;构建真核表达质粒CMV-SynGFP-IRES-Pn... 目的:研究在大肠杆菌中能够有效抑制α-synuclein异常折叠的小肽,在人神经母细胞瘤SH-SY5Y中的抑制作用。方法:基于a-Syn疏水区域设计的5种透膜小肽在大肠杆菌中能够有效抑制α-synuclein异常折叠;构建真核表达质粒CMV-SynGFP-IRES-Pn并转入SH-SY5Y细胞,通过测定细胞荧光强度分析小肽抑制α-synuclein异常折叠情况,由此评价大肠杆菌筛选系统确定的小肽在真核SH-SY5Y细胞中的有效性。结果:在大肠杆菌中能有效抑制α-Syn(129A)异常折叠的三种小肽R7P1、R7P3、R7P4,在SH-SY5Y中的作用效果也十分明显,分别比对照肽ASI1D提高了114%、98%和98%。对于α-Syn(53T),R7P1和R7P2在SH-SY5Y中分别比对照提高了90%和44%;然而在两种细胞中,5种透膜小肽对野生型α-Syn(WT)的作用与对照相比差距不明显。 展开更多
关键词 Α-SYNUCLEIN SH—SY5Y 相对荧光强度 帕金森病
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Cell penetrating peptides and their applications in siRNA delivery
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作者 王晓锋 刘洋 +2 位作者 王卓 杨振军 张礼和 《Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences》 CAS 2009年第2期99-105,共7页
Given its ability to knock down essentially any gene of interest, siRNA has been one of the promising candidates for gene therapy. However, like other nucleic-acid-based drugs, its poor cellular uptake poses a major c... Given its ability to knock down essentially any gene of interest, siRNA has been one of the promising candidates for gene therapy. However, like other nucleic-acid-based drugs, its poor cellular uptake poses a major challenge. Here we briefly summarize the use of cell penetrating peptides (CPPs) as a novel and promising approach for siRNA delivery. The main advantages of CPPs are their low toxicity and high efficiency. 展开更多
关键词 SIRNA Cell penetrating peptides (CPPs) Delivery
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