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逆转录病毒介导的牛生长激素基因转染NIH3T3细胞和人胚肺成纤维细胞
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作者 宋诗铎 郑东钧 +5 位作者 祁伟 隋志芳 李为 方晖 何屏 魏殿军 《天津医药》 CAS 北大核心 2002年第2期94-97,共4页
目的:以牛生长激素(bGH)为模型,建立逆转录病毒载体转移系统,体外转染鼠成纤维细胞株NIH3T3和人胚肺成纤维细胞2BS,以获得bGH表达。方法:将PCR扩增的bGH基因片段插入逆转录病毒载体pSXLG-MDR相应酶切位点,获得的重组逆转录病毒质粒。应... 目的:以牛生长激素(bGH)为模型,建立逆转录病毒载体转移系统,体外转染鼠成纤维细胞株NIH3T3和人胚肺成纤维细胞2BS,以获得bGH表达。方法:将PCR扩增的bGH基因片段插入逆转录病毒载体pSXLG-MDR相应酶切位点,获得的重组逆转录病毒质粒。应用脂质体方法转染重组质粒进入包装细胞PA317,筛选长春新碱抗性克隆株,收集上清液感染NIH3T3细胞和人胚肺成纤维细胞2BS,筛选携带bGH基因的成纤维细胞的克隆株3T3/bGH和2BS/bGH。结果:RT-PCR分析表明基因转染组的3T3/bGH细胞和2BS/bGH细胞在相当于680bp处有一清晰的条带,而空质粒对照组无相应条带出现。RIA分析表明转染基因细胞的培养液及胞浆蛋白有bGH蛋白表达,而作为对照的3T3/mdr细胞和NIH/3T3细胞均无此蛋白表达。结论:应用逆转录病毒IRBS载体系统转染bGH基因进入成纤维细胞,该系统易筛选,转染效率较高。 展开更多
关键词 逆转录病毒载体转移系统 生长激素 成纤维细胞 基因转染 NIH3T3细胞 基因治疗
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