树状DNA杂交技术在HCV检测中的应用 被引量：15

1

作者 赵秀丽 单祥年 +5 位作者 张建琼 李丽 史庭燕 万永奇 鲁晓萱 武景阳 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期27-30,共4页

目的　建立一种敏感性、特异性、重复性较好的 ,适于病原体群体筛查的检验方法。方法　通过RT PCR DDH ,RT nested PCR和HCVRNA DDH 3种方法检测HCV核酸 ,推断RT PCR DDH技术检测病毒核酸的特异性、敏感性和稳定性。结果　 4 7份ELISA检... 目的　建立一种敏感性、特异性、重复性较好的 ,适于病原体群体筛查的检验方法。方法　通过RT PCR DDH ,RT nested PCR和HCVRNA DDH 3种方法检测HCV核酸 ,推断RT PCR DDH技术检测病毒核酸的特异性、敏感性和稳定性。结果　 4 7份ELISA检测HCV抗体阳性血清标本 ,RT nested PCR检出阳性标本 33例 (70 .2 1% ) ,RT PCR DDH检出阳性标本 39例 (82 .98% )。结论　RT PCR DDH技术在逆转录病毒核酸检测的应用中具有较好的特异性、敏感性和稳定性 ,而且成本较低 ,操作安全简便 。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 基因组 3DNA信号放大 树状DNA杂交 逆转录巢式pcr

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丙型肝炎病毒感染的不同人群HCVRNA定量研究 被引量：10

2

作者 王平忠 聂青和 +1 位作者 张中伟 白宪光 《世界华人消化杂志》 CAS 2000年第11期1247-1250,共4页

目的了解丙型肝炎病毒感染的不同人群血清 HCV RNA 水平,比较定性和定量 PCR 结果,探讨 HCV RNA 含量与血清ALT 的相关性.方法采用荧光定量 PCR 和逆转录巢式定性 PCR 同时检测136例丙型肝炎病毒感染者血清 HCV RNA,并测定定量 PCR(+)... 目的了解丙型肝炎病毒感染的不同人群血清 HCV RNA 水平,比较定性和定量 PCR 结果,探讨 HCV RNA 含量与血清ALT 的相关性.方法采用荧光定量 PCR 和逆转录巢式定性 PCR 同时检测136例丙型肝炎病毒感染者血清 HCV RNA,并测定定量 PCR(+)者血清 ALT.用相关系数分析 HCV RNA 含量与血清ALT 的关系.结果定性 PCR 阳性率为80.88%,定量 PCR 阳性率为77.94%.两者相对符合率为94.12%.定量 PCR(+)血清(106例)HCV RNA 含量在10^(7.04)～10^(10.96) 拷贝·L^(-1).无症状献血员 HCV RNA 含量显著低于慢性丙型肝炎、肝硬变和肝细胞癌患者(P<0.05),肝细胞癌患者血清 ALT 水平显著低于慢性丙型肝炎(P<0.05).HCV RNA 滴度与血清 ALT 呈正相关(r=0.61,P<0.01).结论定性和定量检测结果有很好的一致性.病毒复制水平上升在肝损伤和肝病进展中可能起重要作用. 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 RNA 荧光定量pcr 逆转录巢式pcr

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云南某农村猪戊型肝炎病毒分子流行病学调查 被引量：7

3

作者 黄芬 禹文海 +2 位作者 马天武 井申荣 曾韦锟 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期274-277,共4页

目的了解云南农村散养猪群HEV感染情况,为HEV防控提供理论依据。方法利用逆转录巢式聚合酶链反应(RT-nested PCR)技术,对所采集云南猪群78份粪便样品进行HEV ORF2基因部分片段扩增,经琼脂糖凝胶电泳后对目的条带进行回收纯化及克隆测序... 目的了解云南农村散养猪群HEV感染情况,为HEV防控提供理论依据。方法利用逆转录巢式聚合酶链反应(RT-nested PCR)技术,对所采集云南猪群78份粪便样品进行HEV ORF2基因部分片段扩增,经琼脂糖凝胶电泳后对目的条带进行回收纯化及克隆测序。序列利用DNAStar和MEGA4.0软件进行同源性比较和系统进化树构建。结果 RT-nested PCR方法扩增出了350bp目的基因序列,该序列与GenBank中HEV各型的同源性在77.4%～97.4%之间,与基因4型同源性最高(97.4%),与3型同源性最低(77.4%)。系统进化树显示测定的序列与基因4型聚为一支,表明该序列属于基因4型。本次实验共检测了78份猪粪便样品,其中8份为阳性,阳性率为10.26%。结论云南农村人群存在感染HEV的风险,应该加以防控以免HEV暴发流行。 展开更多

关键词 猪戊型肝炎病毒 逆转录巢式pcr 分子流行病学 调查

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鞍山中心医院丙型肝炎病毒亚型的分布状态 被引量：1

4

作者 张艳红 解莹 +2 位作者 谢晨 刘文芝 魏越 《大连医科大学学报》 CAS 2015年第4期358-360,366,共4页

目的了解鞍山地区丙型肝炎病毒(HCV)基因分型的情况。方法采用型特异性引物逆转录巢式PCR法对鞍山地区抗HCV和HCV RNA均阳性的患者共189例进行基因分型。结果在189份抗HCV和HCV RNA均阳性血清中基因型分别检测出了1b和2a型,未发现混合... 目的了解鞍山地区丙型肝炎病毒(HCV)基因分型的情况。方法采用型特异性引物逆转录巢式PCR法对鞍山地区抗HCV和HCV RNA均阳性的患者共189例进行基因分型。结果在189份抗HCV和HCV RNA均阳性血清中基因型分别检测出了1b和2a型,未发现混合型感染,其中11份为阴性。结论鞍山地区基因型有1b型和2a型两种型,未发现其他亚型,1b型(53%)和2a型(47%)基本相等。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 基因型 亚型 型特异性引物 逆转录巢式pcr法

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云南大理猪戊型肝炎病毒分子流行病学调查

5

作者 彭福春 刘承波 +4 位作者 曹文涛 李云龙 龙飞燕 王珏 黄芬 《医学分子生物学杂志》 CAS 2017年第1期10-13,17,共5页

目的了解云南大理农村的猪群中戊型肝炎病毒（hepatitis Evirus，HEV）感染情况，为HEV的防控提供理论依据。方法利用逆转录巢式聚合酶链反应（RT-nested PCR）技术，对所采集大理41份猪粪便样品进行HEVORF2基因部分片段扩增，经琼脂糖... 目的了解云南大理农村的猪群中戊型肝炎病毒（hepatitis Evirus，HEV）感染情况，为HEV的防控提供理论依据。方法利用逆转录巢式聚合酶链反应（RT-nested PCR）技术，对所采集大理41份猪粪便样品进行HEVORF2基因部分片段扩增，经琼脂糖凝胶电泳后对目的条带进行回收纯化及克隆测序，序列利用DNAStar和MEGA4．0软件进行同源性比较和进化树构建。结果RT-nested PCR方法扩增出348bp目的基因序列，系统进化树显示该病毒属于基因4型h亚型HEV。此次实验共检测41份猪粪便样品，其中23份为阳性，阳性率为56．10％。结论大理猪群存在较高的HEV感染率，存在HEV跨种间感染人的风险,应该加强防控以免HEV爆发流行。 展开更多

关键词 猪戊型肝炎病毒 逆转录巢式pcr 进化分析

原文传递

云南大理褐家鼠戊型肝炎病毒分子流行病学调查

6

作者 彭福春 《亚洲兽医病例研究》 2020年第2期19-24,共6页

目的:了解云南省大理州捕获的褐家鼠中戊型肝炎病毒(Hepatitis E Virus, HEV)感染流行率。方法:采用逆转录巢式聚合酶链反应(RT-nested PCR)技术及组织病理学观察(H.E.),对大理州55份褐家鼠组织样品进行检测。结果:本次实验检测55份褐... 目的:了解云南省大理州捕获的褐家鼠中戊型肝炎病毒(Hepatitis E Virus, HEV)感染流行率。方法:采用逆转录巢式聚合酶链反应(RT-nested PCR)技术及组织病理学观察(H.E.),对大理州55份褐家鼠组织样品进行检测。结果:本次实验检测55份褐家鼠组织样品,其中肝脏中HEV阳性率为18.1% (10/55),肾脏中HEV阳性率为10.9% (6/55),且均无性别差异。组织病理学观察发现HEV感染会引起鼠组织损伤。结论:云南省大理州褐家鼠中存在戊型肝炎病毒感染,这将有利于中国戊型肝炎病毒的了解与防治。 展开更多

关键词 戊型肝炎病毒 逆转录巢式pcr 组织病理学

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非甲～戊型肝炎患者血清HCV RNA测定及基因型分析

7

作者 何忠平 王红梅 +1 位作者 庄辉 李朋 《临床输血与检验》 CAS 2003年第1期15-18,共4页

目的　探讨临床诊断为“非甲～戊型肝炎”患者中丙型肝炎病毒感染状况及基因型分析。方法　应用逆转录巢式 PCR(n PCR)法检测 HCV RNA,并对 HCV RNA核心区部分序列克隆测序分析。结果　 6 0例临床诊断为“非甲～戊型肝炎”患者中 ,应用 ... 目的　探讨临床诊断为“非甲～戊型肝炎”患者中丙型肝炎病毒感染状况及基因型分析。方法　应用逆转录巢式 PCR(n PCR)法检测 HCV RNA,并对 HCV RNA核心区部分序列克隆测序分析。结果　 6 0例临床诊断为“非甲～戊型肝炎”患者中 ,应用 n PCR法检测有 3例阳性 ,检出率为 5 %。3个 HCV北京分离株与 HCV 型核苷酸同源性为 94 %～ 96 %。基因进化树分析显示 3个北京分离株为 HCV 型。结论　临床诊断为“非甲～戊型肝炎”患者中 ,存在少数丙型肝炎病毒感染 ,其基因型以 HCV 展开更多

关键词 非甲~戊型肝炎 丙型肝炎病毒 逆转录巢式pcr法 基因测序 基因型 基因进化树分析法 病毒性肝炎

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与人类关系密切的7种动物对戊型肝炎病毒易感性的初步研究 被引量：20

8

作者 丁福 孟继鸿 +5 位作者 张兰芳 程险峰 张汇东 贺星亮 杨志国 许家璋 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第1期52-55,共4页

目的　用双抗原夹心法ELISA (DS -ELISA)和逆转录巢式PCR法 (RT -nPCR)研究与人类生活关系密切的猪、犬、山羊、鸡、鸭、鸽子和兔等 7种动物对戊型肝炎病毒 (HEV)的易感性。方法　用多基因型HEV重组蛋白建立检测HEV抗体的DS -ELISA ,并... 目的　用双抗原夹心法ELISA (DS -ELISA)和逆转录巢式PCR法 (RT -nPCR)研究与人类生活关系密切的猪、犬、山羊、鸡、鸭、鸽子和兔等 7种动物对戊型肝炎病毒 (HEV)的易感性。方法　用多基因型HEV重组蛋白建立检测HEV抗体的DS -ELISA ,并用于 5 91份猪、警犬、家犬、宠物犬、山羊、鸡、鸭、鸽子和兔等多种动物血清标本的HEV抗体检测 ;用HEV多基因型通用性引物RT -nPCR扩增 14 3份犬血清标本HEVRNA。结果　在猪、家犬和宠物犬血清标本中检测到HEV抗体 ,阳性率分别为 4 3 93%、15 19%和 4 6 5 % ,但在警犬、山羊、鸡、鸭、鸽子和兔血清标本中未检测到HEV抗体 ;14 3份犬血清标本用RT -nPCR未扩增出HEVRNA。结论　用多基因型HEV重组蛋白建立的双抗原夹心法ELISA适用于多种动物血清标本HEV抗体的检测 ;猪和犬对HEV易感 ,在HEV传播中可能起重要作用。 展开更多

关键词 戊型肝炎病毒 易感性 重组蛋自 双抗原夹心法ELISA 逆转录巢式pcr

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肝癌细胞中γ-谷氨酰转肽酶基因甲基化研究 被引量：6

9

作者 陆东东 张锡然 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2002年第1期4-5,共2页

目的:研究肝癌细胞中γ-谷氨酰转肽酶(GGT)甲基化的改变。方法:纯化人肝癌及癌旁组织中总GGT及RNA,观察总GGT、膜结合和可溶性GGT的表达,并以逆转录巢式PCR扩增GGT非编码区基因片段,分析M_3位点的甲基化状态。结果:肝癌、癌旁和远癌组总... 目的:研究肝癌细胞中γ-谷氨酰转肽酶(GGT)甲基化的改变。方法:纯化人肝癌及癌旁组织中总GGT及RNA,观察总GGT、膜结合和可溶性GGT的表达,并以逆转录巢式PCR扩增GGT非编码区基因片段,分析M_3位点的甲基化状态。结果:肝癌、癌旁和远癌组总RNA浓度呈明显的梯度升而趋势(P<0.05);癌组织总GGT、膜结合和可溶性GGT均高于癌周又远癌组织(P<0.05);在癌、癌旁及远癌组织中,特定基因片段的扩增检出率分别为100％、85％、75％,M_3位点低甲基化频率分别为75％、55％、50％。结论:肝癌组织中GGT呈异常表达与基因低甲基化状态有关。 展开更多

关键词 肝癌 GGT基因 甲基化 逆转录巢式pcr扩增法 诊断

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儿童急性淋巴细胞白血病常见融合基因的检测及意义 被引量：5

10

作者 朱晓华 高怡瑾 +1 位作者 杨毅 吴玥 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期644-647,659,共5页

目的建立逆转录-巢式PCR检测融合基因的方法,检测4种常见融合基因在儿童急性淋巴细胞白血病中阳性率,并对阳性患儿进行初步临床资料分析。方法对收治的92例初发的急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿,于化疗开始前抽取骨髓标本1.5～2.0 ml,采... 目的建立逆转录-巢式PCR检测融合基因的方法,检测4种常见融合基因在儿童急性淋巴细胞白血病中阳性率,并对阳性患儿进行初步临床资料分析。方法对收治的92例初发的急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿,于化疗开始前抽取骨髓标本1.5～2.0 ml,采用巢式RT-PCR方法检测最常见的4种融合基因:TEL/AML1、E2A/PBX1、m-BCR/ABL和AF4/MLL。结果92例ALL患儿中TEL/AML1阳性21例,阳性率22.8%,占B细胞性ALL的24.7%(20/81例);6例E2A/PBX1阳性(6.5%),在前B细胞性ALL中占20.0%(3/15例);2例AF4/MLL阳性(2.2%),在婴儿ALL中占33.3%(2/6例);仅检测到1例m-BCR/ABL阳性(1.1%)。结论巢式RT-PCR方法是检测融合基因有效、敏感的方法。TEL/AML1在儿童ALL中阳性率最高,尤其是在B细胞性ALL中,该融合基因阳性的患儿病情较轻。 展开更多

关键词 急性淋巴细胞白血病 融合基因 逆转录-巢式pcr

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PCR-荧光探针法在中国HCV常见基因型检测中的意义 被引量：3

11

作者 吴涛 梁华芳 +3 位作者 熊璐 王姣 郭晓磊 林锋 《中华临床感染病杂志》 2017年第1期37-42,共6页

目的 探讨聚合酶链反应（Polymerase chain reaction,PCR）-荧光探针法在检测丙型肝炎病毒（HCV）基因型中的应用价值.方法 随机选择2016年3月至6月来自全国各地的166例慢性HCV感染者血清样本,采用逆转录巢式PCR扩增HCV的Core-E1（CE1... 目的 探讨聚合酶链反应（Polymerase chain reaction,PCR）-荧光探针法在检测丙型肝炎病毒（HCV）基因型中的应用价值.方法 随机选择2016年3月至6月来自全国各地的166例慢性HCV感染者血清样本,采用逆转录巢式PCR扩增HCV的Core-E1（CE1）基因区域和测序、系统发育树分析确定基因亚型,并采用PCR-荧光探针法对HCV基因型进行检测.采用Kappa检验对两种方法测得的HCV分型结果进行比较.结果 巢式PCR测序法共分型166例,其中1 b型66例（39.8%）,2a型34例（20.5%）,3a型16例（9.6%）,3b型为27例（16.2%）,6a型23例（13.9%）;PCR-荧光探针法共分型166例,其中1 b型68例（41.0%）,2a型34例（20.5%）,3a型16例（9.6%）,3b型25例（15.0%）,6a型23例（13.9%）.PCR-荧光探针法分型中的2例1 b型,测序法分型为3b型,两种方法检测一致率为98.7%（164/166）,差异无统计学意义（χ2=0.0492,P〉0.05）. 展开更多

关键词 肝炎 丙型 基因型 聚合酶链反应 pcr-荧光探针法 逆转录巢式pcr 系统发育树

原文传递

FISH联合multiplex RT-PCR检测MLL基因重排的价值探讨 被引量：2

12

作者 何易 李旭东 +4 位作者 王东宁 肖若芝 王文文 胡元 林东军 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1388-1391,共4页

目的:采用荧光原位杂交(FISH)与逆转录多重巢式聚合酶链反应(multiplex RT-PCR)技术检测急性白血病中MLL基因重排的情况,分析两者联合应用的诊断价值。方法:对2008年1月～2011年5月在我院诊断为急性白血病的201例患者采用MLL双色断裂分... 目的:采用荧光原位杂交(FISH)与逆转录多重巢式聚合酶链反应(multiplex RT-PCR)技术检测急性白血病中MLL基因重排的情况,分析两者联合应用的诊断价值。方法:对2008年1月～2011年5月在我院诊断为急性白血病的201例患者采用MLL双色断裂分离重排探针进行FISH检测,同时用multiplex RT-PCR技术检测11种较常见的MLL融合基因,观察MLL基因异常的检出率。所有患者均进行常规染色体核型分析(CCA),观察11q23重排率作为对照。结果:共有19例患者出现11q23/MLL基因重排,在急性髓细胞白血病(AML)中的检出13例(10.2%),急性淋巴细胞白血病(ALL)的检出6例(8.2%)。FISH联合multiplex RT-PCR对MLL基因重排的检出率为9.45%,CCA对11q23异常的检出率为5.47%。5例正常核型的患者和3例未涉及11号染色体异常的患者中FISH检出了1例MLL倒位和3例扩增信号,multiplex RT-PCR检出了7例dup MLL(11q23)重排。结论:FISH联合multiplex RT-PCR能提高MLL基因重排检出率。 展开更多

关键词 荧光原位杂交 基因 MLL 细胞遗传学 逆转录多重巢式pcr

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猴泡沫病毒(SFV)RT-nestedPCR检测方法的建立及初步应用

13

作者 栗景蕊 付瑞 +1 位作者 李晓波 贺争鸣 《中国比较医学杂志》 CAS 2010年第1期46-51,I0003,共7页

目的建立实验猴群及相关生物制品猴泡沫病毒(SFV)的PCR检测方法。方法选择SFV-1、SFV-3、SFVCPZ前病毒序列的pol基因同源性较高的区域设计嵌套引物对SFV-1毒种进行RT-nestedPCR扩增并克隆测序,以确定其准确性,通过验证方法的特异性和敏... 目的建立实验猴群及相关生物制品猴泡沫病毒(SFV)的PCR检测方法。方法选择SFV-1、SFV-3、SFVCPZ前病毒序列的pol基因同源性较高的区域设计嵌套引物对SFV-1毒种进行RT-nestedPCR扩增并克隆测序,以确定其准确性,通过验证方法的特异性和敏感性,初步应用该方法对恒河猴外周血淋巴细胞(PBLs),常用猴肾传代细胞及猴源性生物制品进行检测。结果经RT-nestedPCR扩增出的片断与SFV-1 cDNA序列同源性达到99%,对10只恒河猴的检测结果为5只阳性,5只阴性,对常用猴肾传代细胞及脊髓灰质炎疫苗的检测结果均为阴性。结论所建立的SFV RT-nestedPCR检测方法能准确的检测出恒河猴SFV的感染情况,对控制实验猴群的质量具有重要意义。该方法可用于检测猴源性生物制品中SFV的污染情况,为保证生物制品应用的安全性提供一定依据。 展开更多

关键词 猴泡沫病毒 逆转录-巢式pcr 外周血淋巴细胞

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逆转录—巢式PCR法分析胃癌活检组织CD44拼接变异体

14

作者 肖白 刘宇宏 +3 位作者 刘敬忠 王世鑫 阎梅 周艳 《中国检验医学与临床》 2003年第2期52-55,共4页

目的 改进CD44基因异常表达检测方法，探讨该方法对胃癌早期诊断、转移监测的意义。方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)结合巢式PCR(Nested PCR)技术，检测了89例胃镜活检标本，其中70例胃癌、19例癌前病变(11例非典型性增生、8例肠... 目的 改进CD44基因异常表达检测方法，探讨该方法对胃癌早期诊断、转移监测的意义。方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)结合巢式PCR(Nested PCR)技术，检测了89例胃镜活检标本，其中70例胃癌、19例癌前病变(11例非典型性增生、8例肠上皮化生)及其相应的病变旁正常组织活检标本CD44v(CD44拼接变异体)以及CD44v8—10(CD44外显子8—10拼接变异体)的表达。并对巢式PCR产物测序验证其可靠性。结果 建立了逆转录巢式PCR检测胃镜活检标本CD44异常拼接变异体方法。对巢式PCR产物测序证实符合相应的CD44核苷酸序列，结果可靠且更为简便。全部标本均有CD44s(CD44标准型)的表达。胃癌组织CD44v表达阳性率88．6％(62／70)，其中CD44v8—10阳性率72．9％(51／70)。癌前病变组织CD44v表达阳性率为81．8％(非典型性增生9／11)和37．5％(肠上皮化生3／8)，CD44v8—10阳性率在非典型性增生为72．7％(8／11)。病变旁正常组织CD44v阳性率16．9％(15／89)，其中CD44v8-10阳性率13．5％(12／89)。胃癌和非典型性增生组显著高于正常组。本研究对35例在我院行手术治疗的CD44v阳性患者进行了追踪，有2例胃癌患者第1次胃镜检查为非典型性增生，CD44v强阳性表达。分别在第二、三个月后再次行胃镜检查确诊为胃癌。结论 RT—巢式PCR方法灵敏度高、特异性好，应用此法检测CD44v及CD44v8—10在胃癌及非典型性增生活检组织中呈现高表达，可作为胃癌诊断和判断预后的标志之一。 展开更多

关键词 逆转录-巢式pcr法 分析 胃癌 活检组织 CD44拼接变异体

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