期刊文献+
共找到2篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
不依赖基因序列和连接反应克隆(SLIC)方法的改进 被引量:6
1
作者 王广珺 何川 张义正 《四川大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期893-898,共6页
SLIC(Sequence and Ligation Independent Cloning)是一种不依赖于基因序列和连接反应的高效基因克隆新方法.为了进一步提高该方法的重组效率,将T4连接酶缓冲液改换成退火缓冲液,并使用相应的退火程序,可使重组效率提高至少10倍.此外,... SLIC(Sequence and Ligation Independent Cloning)是一种不依赖于基因序列和连接反应的高效基因克隆新方法.为了进一步提高该方法的重组效率,将T4连接酶缓冲液改换成退火缓冲液,并使用相应的退火程序,可使重组效率提高至少10倍.此外,参加重组的若干DNA片段在同一反应体系中用T4 DNA聚合酶处理,再使用相同的方法退火,其重组效率仍然可以提高至少10倍.因此,利用本研究所建立的SLIC改进方法,不仅可以提高重组效率,而且还可以用于多DNA片段的高效重组,减少研究者的时间和节约实验成本. 展开更多
关键词 SLIC 退火缓冲液 退火程序 DNA重组
原文传递
基于退火缓冲液的SLiCE无缝克隆方法的改良 被引量:3
2
作者 杨东成 蔡松 +2 位作者 赵筱 王金华 王永泽 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期214-222,共9页
旨在建立一种在采用低感受态细胞转化的条件下完成Seamless ligation cloning extract(SLiCE)无缝克隆的方法。通过在SLiCE反应中引入变性和复性步骤来提高无缝克隆的效率。结果显示,当DNA片段经过SLiCE处理后再进行变性和复性处理,其... 旨在建立一种在采用低感受态细胞转化的条件下完成Seamless ligation cloning extract(SLiCE)无缝克隆的方法。通过在SLiCE反应中引入变性和复性步骤来提高无缝克隆的效率。结果显示,当DNA片段经过SLiCE处理后再进行变性和复性处理,其产生的克隆子比对照多7倍左右,经过菌落PCR验证SLiCE无缝克隆的重组效率高达100%,在此条件下,采用1.7×10^6 CFU/μg转化效率的感受态细胞转化SLiCE反应产物,不仅能够得到重组成功的克隆子,且经验证重组效率仍高达100%。采用引入变性和复性步骤的SLiCE方法,使用常用的CaCl2方法制备的普通感受态细胞,就能得到阳性克隆子,实现无缝克隆,表明本方法能提升SLiCE技术的克隆效率和实用性。 展开更多
关键词 SLICE 无缝克隆 退火缓冲液
下载PDF
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部