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黄芩苷的脑保护作用和对微管运动蛋白免疫活性的影响 被引量:16
1
作者 陈群 曾因明 王建国 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期117-118,共2页
关键词 脑缺血 延迟性神经元死亡 动蛋白 黄芩苷 蛋白激酶
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建兰花叶病毒运动蛋白基因克隆及序列分析 被引量:11
2
作者 刘志昕 吴豪 +1 位作者 潘俊松 郑学勤 《中国病毒学》 CSCD 2001年第1期51-54,共4页
从建兰花叶病毒 (CyMV)石斛兰分离物中提取病毒RNA ,用反转录———聚合酶链式反应 (RT PCR)方法获得约 5 0 0bp的运动蛋白基因片断 ,插入 pGEM T载体克隆并测序。序列分析表明 ,该基因片断由 474个核苷酸组成 ,和CyMV美国夏威夷分离物... 从建兰花叶病毒 (CyMV)石斛兰分离物中提取病毒RNA ,用反转录———聚合酶链式反应 (RT PCR)方法获得约 5 0 0bp的运动蛋白基因片断 ,插入 pGEM T载体克隆并测序。序列分析表明 ,该基因片断由 474个核苷酸组成 ,和CyMV美国夏威夷分离物、新加坡分离物相应基因核甘酸序列分别具有 97.8%同源性 ;根据核酸序列推导该片断含有 3个部分重叠的开放阅读框架 (ORF) ,分别编码 14kD、12kD和 展开更多
关键词 建兰花叶病毒 动蛋白 基因克隆 序列分析 兰花 病毒
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马铃薯X病毒25kD运动蛋白基因和外壳蛋白基因介导的抗病性研究 被引量:9
3
作者 刘晓玲 宋云枝 +3 位作者 刘红梅 温孚江 朱常香 白庆荣 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期827-832,共6页
以马铃薯X病毒(potatovirusX,PVX)的RNA为模板,应用反转录聚合酶链式反应(RT PCR)方法分别扩增出长度为681bp的非翻译马铃薯X病毒25kD运动蛋白基因(PVX p25)和长度为714bp的非翻译马铃薯X病毒外壳蛋白基因(PVX CP)。并分别构建植物表达... 以马铃薯X病毒(potatovirusX,PVX)的RNA为模板,应用反转录聚合酶链式反应(RT PCR)方法分别扩增出长度为681bp的非翻译马铃薯X病毒25kD运动蛋白基因(PVX p25)和长度为714bp的非翻译马铃薯X病毒外壳蛋白基因(PVX CP)。并分别构建植物表达载体pROKⅡp25和pROKⅡCP。利用农杆菌介导方法转化烟草NC89。经卡那霉素筛选、PCR检测,共获得转非翻译PVX p25的转基因植株78株,转非翻译PVX CP的转基因植株83株。抗病性试验表明,转非翻译PVX p25的78株中有31株对PVX的侵染表现高度抗病,抗性比例为39.7%;转非翻译PVX CP的83株中有11株对PVX的侵染表现高度抗病,抗性比例为13.3%。分子生物学检测和抗病性分析表明,抗病性均为RNA介导的病毒抗性。研究结果初步证明,转非翻译PVX p25可以更有效地获得抗PVX转基因植株。 展开更多
关键词 马铃薯X病毒 动蛋白 外壳蛋白 RNA介导的病毒抗性
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烟草花叶病毒和番茄花叶病毒在含N基因烟草上的症状差异是由运动蛋白基因决定的 被引量:9
4
作者 于翠 胡东维 +4 位作者 董家红 崔晓峰 吴俊杰 于嘉林 周雪平 《中国科学(C辑)》 CSCD 北大核心 2004年第3期210-215,共6页
烟草花叶病毒(TMV)和番茄花叶病毒(ToMV)是烟草花叶病毒属中关系最为密切的病毒,但它们在含N基因烟草上产生的枯斑大小有明显的差异.比较了TMV,ToMV及用ToMV运动蛋白基因(MP)精确置换TMVMP后获得的重组病毒T/OMP在不同寄主上的症状差异... 烟草花叶病毒(TMV)和番茄花叶病毒(ToMV)是烟草花叶病毒属中关系最为密切的病毒,但它们在含N基因烟草上产生的枯斑大小有明显的差异.比较了TMV,ToMV及用ToMV运动蛋白基因(MP)精确置换TMVMP后获得的重组病毒T/OMP在不同寄主上的症状差异,发现T/OMP在含N基因烟草上产生的枯斑大小与ToMV相似.分析比较TMV,ToMV和T/OMP外壳蛋白和MP在植物体内的积累水平,发现三者之间没有明显的差异,而TMV和T/OMP在原生质体中的复制水平也没有差异.比较TMV,ToMV和T/OMP接种后烟草体内防御相关酶(PAL,POD和PPO)的活性变化,结果T/OMP和TMV所诱导酶的变化趋势基本一致,而与ToMV有所差异,因此认为MP基因功能的差异决定了TMV和ToMV在N基因烟草上枯斑的大小. 展开更多
关键词 烟草花叶病毒 番茄花叶病毒 重组病毒 动蛋白 枯斑
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植物病毒胞间运动分子生物学研究进展 被引量:3
5
作者 郑文光 王晓武 高必达 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2003年第2期52-58,共7页
综述了运动蛋白的分类、病毒运动的两种形态、运动蛋白介导植物病毒细胞间运动的机制及其磷酸化调节 ,同时简要介绍了互补试验与删除试验在研究运动蛋白功能上的应用。
关键词 植物病毒 胞间 分子生物学 研究进展 动蛋白 胞间连丝 果胶甲酯酶
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黄瓜花叶病毒病防治策略研究进展 被引量:6
6
作者 李爱民 薛林宝 +1 位作者 张永泰 惠飞虎 《长江蔬菜》 2004年第3期38-42,共5页
针对黄瓜花叶病毒病防治现状,分析不同防治策略的优缺点,指出药剂防治、生物制剂、疫苗等由于污染环境、防效不明显等原因,在防治CMV上的应用受到越来越多的限制;常规育种由于缺少抗源及育种周期长,在抗CMV育种上成效较低。转基因技术... 针对黄瓜花叶病毒病防治现状,分析不同防治策略的优缺点,指出药剂防治、生物制剂、疫苗等由于污染环境、防效不明显等原因,在防治CMV上的应用受到越来越多的限制;常规育种由于缺少抗源及育种周期长,在抗CMV育种上成效较低。转基因技术由于基因资源丰富、育种周期短、抗性稳定、不污染环境等优点,在抗CMV研究上有较广泛的应用价值,获得了一批对CMV有较好抗性的转基因植株。运用植物细胞工程技术结合理化诱变因子诱变筛选抗CMV突变体,为创造抗CMV突变系提供了有益的尝试。 展开更多
关键词 黄瓜 花叶病毒病 防治策略 转基因技术 外壳蛋白 动蛋白
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黄瓜花叶病毒运动蛋白基因及其缺失突变体在大肠杆菌中的表达和表达产物的纯化 被引量:5
7
作者 张振臣 李大伟 +2 位作者 张力 于嘉林 刘仪 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期132-137,共6页
利用CMVFny 株系RNA3 全长cDNA 克隆, 构建了运动蛋白(MP) 基因5′端缺失突变体和3′端缺失突变体的原核表达载体。SDS- PAGE 分析表明, 经IPTG 诱导, MP 基因及其2 种缺失突变体均能在大肠杆菌... 利用CMVFny 株系RNA3 全长cDNA 克隆, 构建了运动蛋白(MP) 基因5′端缺失突变体和3′端缺失突变体的原核表达载体。SDS- PAGE 分析表明, 经IPTG 诱导, MP 基因及其2 种缺失突变体均能在大肠杆菌BL21(DE3) pLysS中高效表达。利用分离包含体的方法, 提纯了全长的及C 端缺失的MP。光密度扫描分析表明, 提纯产物的纯度达96 .6 % 。 展开更多
关键词 黄瓜花叶病毒 动蛋白 突变体 原核表达 基因
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植物抗病毒基因工程研究进展 被引量:5
8
作者 庞俊兰 《北京城市学院学报》 2002年第1期65-69,共5页
近年来 ,植物抗病毒基因工程研究进展迅速 ,本文就这方面的发展进行了综述 ,重点介绍了外壳蛋白基因。
关键词 关键词:外壳蛋白 复制酶 动蛋白
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香蕉束顶病毒中国漳州分离物DNA 4编码区功能研究 被引量:5
9
作者 孙德俊 孙卉 +3 位作者 魏红艳 樊小雪 蔡文启 田颖川 《自然科学进展》 北大核心 2002年第7期708-712,共5页
利用PCR方法克隆了香蕉束顶病毒中国漳州分离物(BBTV-ZZ)DNA 4编码区,序列分析结果表明该编码区由351个核苷酸组成,推测其编码是一个含116个氨基酸的蛋白质,利用植物双元载体pBin438构建了含有BBTV-ZZ DNA 4编码区的植物组成型表达载体p... 利用PCR方法克隆了香蕉束顶病毒中国漳州分离物(BBTV-ZZ)DNA 4编码区,序列分析结果表明该编码区由351个核苷酸组成,推测其编码是一个含116个氨基酸的蛋白质,利用植物双元载体pBin438构建了含有BBTV-ZZ DNA 4编码区的植物组成型表达载体pBBTV-4B,经农杆菌介导转化了三生烟(Nicotiana tabacum Xanthi nc),在防虫条件下,将运动缺陷型CMV-Fny突变株(CMV-Fny-△MP)人工接种到转基因植株下部叶片上,12d后,在转基因植株的非接种叶上显现出不同程度的系统侵染症状,间接异种动物双抗体夹心酶联免疫吸附方法(DAS-ELISA)检测结果显示在转基因植株的上部非接种叶中有CMV-Fny的积累,而非转基因对照植株组的上部非接种叶中始终没有显现系统侵染症状,DAS-ELISA检测也未见CMV-Fny的积累,这些实验结果表明转基因植株能够支持CMV-Fny-△Mp从细胞到细胞和长距离运动并形成系统侵染症状,由此推测BBTV-ZZ DNA 4编码的蛋白质可能具有运动蛋白功能。 展开更多
关键词 香蕉束顶病毒 中国漳州分离物 DNA4编码区 动蛋白 CMV-Fny-△Mp PCR方法 植物表达载体
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Prestin——外毛细胞运动蛋白 被引量:5
10
作者 陈伟 杨仕明 《中华耳鼻咽喉头颈外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期394-396,共3页
2000年Zheng等成功克隆了第一个外毛细胞运动蛋白基因,命名为“prestin”。近年来,关于prestin在外毛细胞的表达、定位以及prestin与外毛细胞电运动和耳蜗放大效应之间的关系成为研究热点。通过基因敲除动物模型,进一步证实了presti... 2000年Zheng等成功克隆了第一个外毛细胞运动蛋白基因,命名为“prestin”。近年来,关于prestin在外毛细胞的表达、定位以及prestin与外毛细胞电运动和耳蜗放大效应之间的关系成为研究热点。通过基因敲除动物模型,进一步证实了prestin是外毛细胞电运动及耳蜗放大效应所必需的运动蛋白。本文对近年有关prestin的研究综述如下。 展开更多
关键词 外毛细胞 动蛋白 PRESTIN PRESTIN 放大效应 蛋白基因 物模型 基因敲除
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烟草果胶甲基酯酶 (PME)基因的克隆及功能分析(英文) 被引量:4
11
作者 李春波 高锋 +2 位作者 钟永旺 魏春红 李毅 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第7期643-649,共7页
为了研究果胶甲基酯酶 (pectinmethyl esterase ,PME) (EC 3.1.1.11)与植物病毒运动蛋白之间的相互作用 ,应用RT PCR方法从烟草 (Nicotianabenthamiana)中克隆了PME基因 ,并测定了全序列 (GenBank登录号AY2 3896 8) .序列分析显示该基... 为了研究果胶甲基酯酶 (pectinmethyl esterase ,PME) (EC 3.1.1.11)与植物病毒运动蛋白之间的相互作用 ,应用RT PCR方法从烟草 (Nicotianabenthamiana)中克隆了PME基因 ,并测定了全序列 (GenBank登录号AY2 3896 8) .序列分析显示该基因由两个保守的结构域组成 (PMEI和pectinesterase) .DNA印迹结果表明 ,该基因在基因组中存在多个拷贝 ,蛋白质印迹表明 ,植物总蛋白中存在两种形式的PME蛋白 ,但RNA印迹结果显示 ,在烟草细胞中只检测到全长的PME转录产物 .酵母双杂交结果表明 ,PME与水稻矮缩病毒Pns11(具有非特异的核酸结合活性 )之间存在相互作用 ,而没有检测到PME与已知的运动蛋白Pns6之间的相互作用 ,推测Pns11蛋白可能参与了水稻矮缩病毒粒子的运动 . 展开更多
关键词 果胶甲基酯酶 基因 克隆 酵母双杂交 动蛋白 序列分析 烟草
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烟草花叶病毒运动蛋白的表达及特异性抗体制备 被引量:5
12
作者 张正坤 吴祖建 +2 位作者 沈建国 谢联辉 林奇英 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2008年第3期265-268,共4页
从烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)感染的发病烟草叶片中提取总RNA,通过RT-PCR扩增得到其运动蛋白基因,将扩增产物克隆到pMD18-T载体上.DNA序列分析表明,所得运动蛋白基因全长为807 bp,与已报道的TMV-U1株系核苷酸和氨基酸同源... 从烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)感染的发病烟草叶片中提取总RNA,通过RT-PCR扩增得到其运动蛋白基因,将扩增产物克隆到pMD18-T载体上.DNA序列分析表明,所得运动蛋白基因全长为807 bp,与已报道的TMV-U1株系核苷酸和氨基酸同源性均为100%.将目的基因亚克隆到原核表达载体pET-29a上,并转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导4 h后蛋白表达量达到最大,超声波显示所得融合蛋白以不可溶形式存在.SDS-PAGA检测蛋白表达情况,表达产物与目的蛋白大小一致,割胶免疫注射家兔得到抗体,ELISA测定效价为25600,Western-blot检测证明在烟草叶片被侵染早期MP得到表达,且抗体特异性良好. 展开更多
关键词 烟草花叶病毒 动蛋白 融合蛋白表达 抗体 Western-blot检测
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烟草花叶病毒运动蛋白cDNA的克隆及融合蛋白的表达 被引量:4
13
作者 李艳利 马中良 +2 位作者 林杰 田波 杨怀义 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期182-184,共3页
从烟草花叶病毒 (TMV)中提取总RNA ,通过反转录 PCR (RT PCR)扩增得到其运动蛋白 (MP)的基因 ,将扩增产物克隆到pMD 18T载体上。DNA序列分析表明 ,所得到的运动蛋白的基因全长为 80 7bp (GenBank接受号AY30 0 16 1) ,与已发表TMV序列 (... 从烟草花叶病毒 (TMV)中提取总RNA ,通过反转录 PCR (RT PCR)扩增得到其运动蛋白 (MP)的基因 ,将扩增产物克隆到pMD 18T载体上。DNA序列分析表明 ,所得到的运动蛋白的基因全长为 80 7bp (GenBank接受号AY30 0 16 1) ,与已发表TMV序列 (GenBank登陆号为NC- 0 0 136 7)和同属的番茄花叶病毒 (ToMV ,GenBank登陆号为NC- 0 0 2 6 92相比核苷酸的同源性分别为 98 0 %和 80 9% ,氨基酸的同源性分别为 99 1%和 80 0 %。将目的片段亚克隆到表达载体pET 30a上 ,并在大肠杆菌JM10 9中诱导表达 ,诱导 9h后 ,融合蛋白表达量最大。诱导后的工程菌超声后经SDS PAGE检测 ,融合蛋白以可溶形式存在。 展开更多
关键词 烟草花叶病毒 动蛋白 CDNA 克隆 融合蛋白 表达 TMV RT-PCR 核苷酸 同源性
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病毒载体介导的基因沉默体系对朱顶红褪绿环斑病毒NSm基因的沉默效应
14
作者 许云玉 李浩 +6 位作者 陈敏 贾志强 高雪 陈增敏 赵于丁 刘雅婷 李永忠 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期923-931,共9页
为探讨烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus,TRV)载体介导的基因沉默技术对朱顶红褪绿环斑病毒(Hippeastrum chlorotic ringspot virus,HCRV)运动蛋白基因NSm的沉默效应,以本氏烟Nicotiana tabacum为材料,构建靶向HCRV NSm序列的基因沉... 为探讨烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus,TRV)载体介导的基因沉默技术对朱顶红褪绿环斑病毒(Hippeastrum chlorotic ringspot virus,HCRV)运动蛋白基因NSm的沉默效应,以本氏烟Nicotiana tabacum为材料,构建靶向HCRV NSm序列的基因沉默表达载体pTRV2-NSm,经农杆菌Agrobacterium介导侵染烟苗,检测其侵染效率,人工接种HCRV到沉默表达载体处理过的烟苗,通过观察发病症状、统计病情并应用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)技术检测TRV介导的基因沉默体系对HCRV侵染的沉默效应。结果表明,pTRV2-NSm沉默表达载体对本氏烟植株的侵染率达到95.00%,并且对本氏烟的生长无明显影响;与对照相比,经沉默载体处理的烟草植株接种HCRV后发病率显著降低,在接种后14 d发病率下降了90个百分点,病毒积累量明显下降,随着时间延长pTRV2-NSm对病毒的抑制效果持续升高,在接种后14 d对病毒病的防治效果最高,达93.13%;qRT-PCR检测发现基因沉默表达载体在21 d内能持续有效表达。表明本研究构建的基因沉默体系能有效沉默HCRV NSm的表达,同时降低HCRV在烟草上的发病率和积累量。 展开更多
关键词 朱顶红褪绿环斑病毒 基因沉默 动蛋白 病毒积累量 侵染效率
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病毒在植物体内的运转 被引量:4
15
作者 肖火根 周国辉 范怀忠 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期282-287,共6页
关键词 植物病毒 细胞间转 动蛋白
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玉米黄花叶病毒运动蛋白的原核表达纯化与抗血清制备
16
作者 马秋萌 刘玉姿 +3 位作者 吴迪 李洪蕊 王颖 韩成贵 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期343-349,共7页
为实现对玉米黄花叶病毒(maize yellow mosaic virus,MaYMV)的血清学检测,丰富该病毒的检测方法,将编码MaYMV运动蛋白(movement protein,MP)的基因连接到原核表达载体pDBHis-MBP上,将构建成功的原核表达质粒转化到大肠杆菌Escherichia c... 为实现对玉米黄花叶病毒(maize yellow mosaic virus,MaYMV)的血清学检测,丰富该病毒的检测方法,将编码MaYMV运动蛋白(movement protein,MP)的基因连接到原核表达载体pDBHis-MBP上,将构建成功的原核表达质粒转化到大肠杆菌Escherichia coli中诱导表达融合蛋白,将纯化后的融合蛋白对新西兰大白兔Oryctolagus cuniculus进行免疫并制备MaYMV MP多克隆抗血清,并采用Western blot对抗血清的效价、灵敏度和特异性进行检测。结果显示,利用成功构建的原核表达载体经诱导表达获得分子量大小约为62 kD的融合蛋白,纯化后对新西兰大白兔进行免疫获得MaYMV MP抗血清,该抗血清的效价为1∶128000,灵敏度为1∶32,且该抗血清能够特异性地检测到本氏烟Nicotiana benthamiana中瞬时表达的MaYMV MP,而不与马铃薯卷叶病毒属Polerovirus及黄症病毒属Luteovirus的其他病毒发生血清学交叉反应,证明该抗血清具有良好的特异性。表明本研究制备的MaYMV MP抗血清能特异性地检测到MaYMV MP,可用于对田间样品的MaYMV血清学检测。 展开更多
关键词 玉米黄花叶病毒 血清制备 原核表达 瞬时表达 动蛋白
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转基因小麦抗大麦黄矮病毒研究进展 被引量:2
17
作者 李永丽 史洪中 +1 位作者 陈利军 周洲 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2006年第21期5451-5453,共3页
转基因技术为培育抗黄矮病小麦提供了一条有力的途径,综述国内外在小麦抗BYDV的转基因研究进展。探讨目前主要基于BYDV自身的外壳蛋白基因、复制酶基因、运动蛋白基因以及蚜虫传毒相关蛋白基因进行的抗BYDV小麦转基因研究现状和成果,并... 转基因技术为培育抗黄矮病小麦提供了一条有力的途径,综述国内外在小麦抗BYDV的转基因研究进展。探讨目前主要基于BYDV自身的外壳蛋白基因、复制酶基因、运动蛋白基因以及蚜虫传毒相关蛋白基因进行的抗BYDV小麦转基因研究现状和成果,并对未来培育抗黄矮病小麦研究进行展望。 展开更多
关键词 转基因小麦 大麦黄矮病毒 外壳蛋白 复制酶 动蛋白 传毒蛋白
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抗PRSV转基因番木瓜研究进展 被引量:3
18
作者 高艳梅 翟金玲 +1 位作者 徐远峰 黄惜 《安徽农学通报》 2009年第3期36-38,45,共4页
番木瓜花叶环斑病毒(PRSV)严重影响着热带亚热带的重要水果番木瓜的生产,在物理和化学防治措施效果不佳的情况下,利用病原获得抗性防治PRSV的方法给番木瓜的生产带来一线生机。综述了近年来转基因番木瓜中所采用的PRSV病毒的几个基因及... 番木瓜花叶环斑病毒(PRSV)严重影响着热带亚热带的重要水果番木瓜的生产,在物理和化学防治措施效果不佳的情况下,利用病原获得抗性防治PRSV的方法给番木瓜的生产带来一线生机。综述了近年来转基因番木瓜中所采用的PRSV病毒的几个基因及其优缺点。 展开更多
关键词 番木瓜环斑病毒 外壳蛋白 复制酶 动蛋白 核酶
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哺乳动物耳蜗外毛细胞电运动的分子基础 被引量:2
19
作者 郭运凯 谢鼎华 杨新明 《中华耳科学杂志》 CSCD 2005年第2期140-143,共4页
关键词 耳蜗外毛细胞 分子基础 哺乳 1985年 OHC 研究课题 动蛋白 电刺激 膜电位 听力学 放大器
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马铃薯X病毒运动蛋白基因的原核表达、抗血清制备及应用 被引量:3
20
作者 刘秀君 张献军 +2 位作者 刘兰伟 孙燕霞 刘红梅 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期307-310,共4页
构建马铃薯X病毒运动蛋白(P25)原核表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中诱导表达融合蛋白,所表达的P25蛋白经SDS-PAGE电泳纯化后免疫小鼠,抗血清效价为1∶4000,抗血清与PVX有特异性反应(P/N>2),且具有较强的反应特异性,而与PVY、... 构建马铃薯X病毒运动蛋白(P25)原核表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中诱导表达融合蛋白,所表达的P25蛋白经SDS-PAGE电泳纯化后免疫小鼠,抗血清效价为1∶4000,抗血清与PVX有特异性反应(P/N>2),且具有较强的反应特异性,而与PVY、TMV均不发生反应。该方法制备的抗血清可用于ELISA检测PVX感病植株及Western blot检测转基因植株。 展开更多
关键词 马铃薯X病毒 动蛋白 原核表达 抗血清 转基因烟草
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