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免疫分选软骨前体细胞并诱导永生化的研究 被引量:14
1
作者 郭风劲 陈安民 黄仕龙 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期226-228,共3页
目的建立永生化大鼠软骨前体细胞株,为细胞移植和转基因治疗提供稳定的细胞来源。方法利用免疫磁珠技术分离纯化具有特异性表面标志成纤维生长因子受体-3(FGFR-3)的软骨前体细胞,用基因转染技术将含有猿肾病毒40大T抗原基因(SV40Ta... 目的建立永生化大鼠软骨前体细胞株,为细胞移植和转基因治疗提供稳定的细胞来源。方法利用免疫磁珠技术分离纯化具有特异性表面标志成纤维生长因子受体-3(FGFR-3)的软骨前体细胞,用基因转染技术将含有猿肾病毒40大T抗原基因(SV40Tag)的重组质粒pEGFP-IRES2-SV40Tag转染原代培养的新生大鼠软骨前体细胞,经G418筛选,抗性克隆扩大培养。应用FGFR-3、Ⅱ型胶原和X型胶原抗体进行细胞鉴定,检测其分化能力,观察细胞的形态及其生长状况,绘制生长曲线。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Southern blot和免疫细胞化学法鉴定SV40Tas在转染细胞中的表达。结果获得1个阳性细胞克隆,免疫细胞化学证实为FGFR-3阳性的具有较强增值能力和多分化潜能的软骨前体细胞。经Southern印迹杂交证实,SV40Tag已稳定转染入软骨前体细胞,表达mRNA及其蛋白。贴壁培养的永生化软骨前体细胞株(IPSC),群体倍增时间为23.62h,传代、冻存和复苏对细胞形态及生长无明显影响。结论SV40Tag导入可诱导软骨前体细胞永生化,为软骨前体细胞的实验研究及其介导的细胞移植治疗提供了稳定的细胞来源。 展开更多
关键词 软骨前体细胞 永生化 猿肾病毒40
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软骨前体细胞及微小RNA-140在骨关节炎软骨损伤修复中的作用 被引量:10
2
作者 斯海波 梁明玮 +1 位作者 程惊秋 沈彬 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期650-656,共7页
目的总结软骨前体细胞(cartilage progenitor cells,CPCs)及微小RNA-140(microRNA-140,miR-140)在骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨损伤修复中的作用及应用前景。方法查阅国内外近年有关CPCs、miR-140及OA软骨损伤修复的相关研究,归纳... 目的总结软骨前体细胞(cartilage progenitor cells,CPCs)及微小RNA-140(microRNA-140,miR-140)在骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨损伤修复中的作用及应用前景。方法查阅国内外近年有关CPCs、miR-140及OA软骨损伤修复的相关研究,归纳总结后进行综述。结果 CPCs具有良好的自我增殖性、干细胞表面抗原表达特性及多向分化潜能等特点,其成软骨分化能力优于其他组织来源MSCs。CPCs与OA发生发展密切相关,但其在OA软骨损伤部位自主活化及成软骨分化能力方面并不能达到软骨完全修复的要求。miR-140具有软骨特异性,参与OA发病机制,具有抑制Notch信号通路、诱导活化CPCs并增强其增殖及成软骨分化的能力,从而促进OA软骨损伤修复的潜能。关节腔局部给药是目前治疗OA的主要方式之一,关节腔注射miR-140虽然对大鼠软骨退变具有显著抑制作用,但也存在非靶向聚集、生物利用度低及清除快等问题,基于关节软骨特性构建具有良好安全性、软骨靶向性且能高效递送miR-140的载体材料具有良好应用前景。此外,CPCs主要分散在软骨表层,而OA软骨损伤也开始于该层,因此强调OA早期干预至关重要。结论 miR-140具有诱导活化CPCs、促进OA早期软骨损伤修复的潜能,进一步探索miR-140在OA发生机制中的作用及研发基于miR-140的新的OA治疗策略具有重要临床意义。 展开更多
关键词 骨关节炎 软骨前体细胞 微小RNA-140 软骨损伤修复
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工程化生长转化因子β3促进软骨前体细胞向软骨分化的实验研究 被引量:4
3
作者 郑东 杨述华 +3 位作者 冯勇 唐欣 梅荣成 徐亮 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期558-561,572,F0002,共6页
目的:构建LAP(latency associated peptide in TGF-beta,LAP)为潜伏作用,MMP(matrix metalloproteinase,MMP)酶切位点为导向作用,TGF-β3活性部分为治疗作用的具有靶向治疗功能的工程化TGF-β3蛋白,并转染软骨膜来源的软骨前体细胞(chon... 目的:构建LAP(latency associated peptide in TGF-beta,LAP)为潜伏作用,MMP(matrix metalloproteinase,MMP)酶切位点为导向作用,TGF-β3活性部分为治疗作用的具有靶向治疗功能的工程化TGF-β3蛋白,并转染软骨膜来源的软骨前体细胞(chondrogenic progenitor cells,CPCs),检验其特异性的靶向治疗作用。方法:将人工合成的编码MMP酶切位点氨基酸的正反义DNA序列经基因重组定向克隆插入真核表达载体pIRES-EGFP中,之后将大鼠的TGF-β3的LAP段和TGF-β3的活性片断(mature TGF-β3,mTGF-β3),分别插入到MMP的上游和下游,获pIRES-EGFP-LAP-MMP-mTGF-β3重组质粒。然后将其转染入软骨膜来源的CPCs,将转染后的CPCs在有MMP-1和无MMP-1的条件下进行球团培养,并分别检测胶原Ⅱ(COLⅡ),Aggrecan(Agc)和TIMP的表达。结果:经过测序和酶切鉴定,成功构建了pIRES-EGFP-LAP-MMP-mTGF-β3质粒,转染CPCs后,只有MMP酶存在的条件下才能有效的促进CPCs向软骨分化和软骨基质的合成。结论:通过基因工程构建的工程化TGF-β3具有靶向性促进软骨前体细胞修复软骨的应用前景。 展开更多
关键词 工程化蛋白 软骨前体细胞 基因克隆 生长转化因子β3 软骨分化 软骨修复
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基于Citespace软骨前体细胞修复软骨相关文献的可视化分析 被引量:5
4
作者 何其泽 孟林 +1 位作者 王杰 翁晨祎 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2022年第29期4723-4728,共6页
背景:软骨修复一直是骨科医生面临的巨大挑战,同时也一直是研究的热点,近年来研究发现关节软骨中存在一类具有干细胞特征的软骨前体细胞,为软骨损伤修复研究提供了新的切入点。目的:通过对软骨前体细胞的相关文献进行发文趋势分析、作... 背景:软骨修复一直是骨科医生面临的巨大挑战,同时也一直是研究的热点,近年来研究发现关节软骨中存在一类具有干细胞特征的软骨前体细胞,为软骨损伤修复研究提供了新的切入点。目的:通过对软骨前体细胞的相关文献进行发文趋势分析、作者合作网络分析、机构合作网络分析,对关键词进行共现分析、聚类分析,探索该领域近20年的发展状况、研究热点及难点,为软骨修复相关的科研以及临床工作提供新的思路和方向。方法:以Web of Science中1999-2021收录的核心合集数据库为文献来源,应用Citespace 5.8.R1进行文献可视化分析,并绘制相关可视化图谱。结果与结论:①共纳入文献829篇,分析结果显示:该领域每年的发文量基本稳定在30-50篇,略有下降趋势,发文量最多的作者为CHUANJU LIU,机构为Harvard Univ,高频关键词有20个,形成12个有意义的聚类。②间充质干细胞、软骨细胞、破骨细胞、骨髓基质细胞、基质细胞等是当前研究热点;软骨前体细胞目前的研究关注度不高,未来仍有巨大的发掘空间,目前大部分研究都是基于应用组织工程材料结合细胞对软骨缺损修复。③关注软骨细胞以及软骨前体细胞来源、外泌体的应用、组织-支架相互作用和支架降解、识别和运用新的刺激、理解结构的成熟、生物力学和功能、改进植入、固定和康复方法仍然是软骨修复研究的前沿热点。 展开更多
关键词 软骨 修复 关节 细胞 软骨前体细胞 Citespace软件 文献计量学 可视化分析
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大鼠软骨非全层损伤模型的建立及活化细胞与整合素β_1表达关系的研究 被引量:3
5
作者 张凯彬 石晶 +4 位作者 李杨 蒋逸秋 丁朋 杨晓霏 桂鉴超 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期432-439,共8页
目的探讨大鼠软骨非全层损伤模型的制备及术后细胞变化及细胞活化与整合素β_1表达的关系。方法 10周龄SD雄性大鼠45只,体质量300~400 g,随机分为手术组、假手术组和对照组,每组15只。手术组采用划痕法制造软骨非全层损伤模型;假手术组... 目的探讨大鼠软骨非全层损伤模型的制备及术后细胞变化及细胞活化与整合素β_1表达的关系。方法 10周龄SD雄性大鼠45只,体质量300~400 g,随机分为手术组、假手术组和对照组,每组15只。手术组采用划痕法制造软骨非全层损伤模型;假手术组打开膝关节囊后直接缝合;对照组不行手术。术后1、7、14 d各组分别处死5只大鼠,取材行大体观察;并行HE、番红O组织学染色,评估并比较各组HE染色改良组织学评分及番红O染色灰度值;行Brd U、CD105免疫荧光染色和CD105/整合素β_1双标记染色,采用标准双盲法计数并比较各组各时间点CD105阳性细胞数。结果大体观察示手术组划痕周围软骨欠光滑,非透明,有软骨软化、纤维化改变,且随造模时间延长逐渐加重;假手术组和对照组软骨呈白色透明状,无软化、纤维化改变。HE染色示手术组在划痕周围细胞数增多,大小不等,排列分布不均;假手术组和对照组细胞大小均一,染色均匀,排列有序。手术组术后各时间点HE染色改良组织学评分均显著高于假手术组及对照组(P〈0.05),各组组内各时间点间比较差异均无统计学意义(P〉0.05)。番红O染色示手术组各时间点染色欠均匀,划痕周围区域着色较浅;假手术组和对照组各时间点染色均匀,无失染。术后各时间点各组间比较以及各组内各时间点间比较番红O染色灰度值,差异均无统计学意义(P〉0.05)。Brd U免疫荧光染色示手术组划痕周围细胞排列紊乱,分布不均;假手术组和对照组细胞排列分布均匀,无聚集现象。CD105免疫荧光染色示手术组划痕周围有较多阳性细胞聚集,细胞大小不一、分布不均;假手术组和对照组软骨层见少数阳性细胞,分布均匀。手术组术后各时间点CD105阳性细胞数均显著多于假手术组和对照组(P〈0.05);手术组内随时间延长CD105阳性细胞数逐渐增多,各时间点间比较差� 展开更多
关键词 软骨非全层损伤 软骨前体细胞 CD105 BRDU 整合素Β1 大鼠
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软骨前体细胞的分离鉴定及IL-1β对其成软骨分化的影响 被引量:2
6
作者 周建新 杨晓斐 +3 位作者 李阳 丁朋 蒋逸秋 桂鉴超 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期863-869,共7页
目的对正常软骨中的软骨前体细胞进行分离、鉴定,并对不同浓度IL-1β对软骨前体细胞的成软骨分化影响进行研究。方法取正常成年新西兰大白兔的软骨细胞,通过纤连蛋白粘连分离出软骨前体细胞,采用流式细胞仪对其细胞表型进行鉴定,倒置相... 目的对正常软骨中的软骨前体细胞进行分离、鉴定,并对不同浓度IL-1β对软骨前体细胞的成软骨分化影响进行研究。方法取正常成年新西兰大白兔的软骨细胞,通过纤连蛋白粘连分离出软骨前体细胞,采用流式细胞仪对其细胞表型进行鉴定,倒置相差显微镜观察其克隆增殖,并行成骨、成脂、成软骨三系分化观察。培养软骨前体细胞团并分为4组,分别加入普通H-DMEM培养基(A组)、成软骨诱导分化培养基(B组)、成软骨诱导分化培养基+0.1 ng/mL IL-1β(C组)、成软骨诱导分化培养基+1.0 ng/mL IL-1β(D组),培养3周行组织学、生物化学、实时荧光定量PCR等检测,观察IL-1β的影响。结果在正常软骨细胞中存在软骨前体细胞,经鉴定有干细胞表型阳性表达,有与干细胞相似的克隆增殖能力及分化能力。HE染色示,C、D组中细胞团块较B组明显减小,细胞呈肥大样改变。番红O、Ⅱ型胶原及Ⅹ型胶原染色示,B组较A组染色深,C、D组均浅于B组,D组浅于C组。生物化学成分测定示,C、D组的总胶原、糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAG)相对含量及GAG/DNA比值均显著低于B组,D组显著低于C组,差异均有统计学意义(P<0.05);C、D组DNA相对含量均显著高于B组(P<0.05),但C、D组间差异无统计学意义(P>0.05)。实时荧光定量PCR检测示,C、D组Ⅱ型胶原、Ⅹ型胶原、Sox-9 mRNA相对表达量均显著低于B组,D组显著低于C组,差异均有统计学意义(P<0.05);而C、D组Runx-2和MMP-13mRNA相对表达量均显著高于B组,D组显著高于C组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论在正常软骨组织中存在一种有干细胞特性的软骨前体细胞,其有克隆和潜在分化的能力。IL-1β对软骨前体细胞成软骨分化有抑制作用,并有促进成骨分化的可能。 展开更多
关键词 软骨前体细胞 炎性因子 IL-1Β 诱导分化 软骨修复
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白藜芦醇促进软骨细胞肥大化的作用机制研究 被引量:1
7
作者 唐翔宇 曹震 +1 位作者 董世武 武继民 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1392-1397,共6页
目的探讨白藜芦醇(resveratrol,RES)对软骨前体细胞ATDC5肥大化的影响及其可能机制。方法通过CCK-8法研究不同浓度RES对ATDC5细胞活性的影响。建立软骨肥大化诱导体系,根据活性实验的安全浓度,设立对照组(0μmol/L)和RES组(1μmol/L)。q... 目的探讨白藜芦醇(resveratrol,RES)对软骨前体细胞ATDC5肥大化的影响及其可能机制。方法通过CCK-8法研究不同浓度RES对ATDC5细胞活性的影响。建立软骨肥大化诱导体系,根据活性实验的安全浓度,设立对照组(0μmol/L)和RES组(1μmol/L)。qRT-PCR和Western blot法确定肥大化相关因子RUNX2、MMP13和COLX表达变化;甲苯胺蓝和免疫组化分析细胞外基质粘多糖及COLX、RUNX2表达;利用qRT-PCR检测软骨细胞肥大化经典通路WNT、IHH和FGF中相关因子的表达变化。结果 RES安全使用浓度为1μmol/L;与对照组相比,在肥大化诱导14 d后,RES组ATDC5细胞肥大化水平明显提升;RES组肥大化相关基因表达量在3、7、14 d时明显增加;WNT和IHH途径中促肥大化因子β-catenin和GLI2的表达水平在RES组较对照组升高,而GLI3表达水平下降。FGF途径中PI3K的表达水平较对照组没有变化。结论 RES通过激活β-catenin及GLI2,抑制GLI3,促进RUNX2表达,实现促进ATDC5肥大化的目的。 展开更多
关键词 软骨前体细胞 白藜芦醇 肥大化 软骨内成骨
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核素扫描在软骨前体细胞诱导活化的骨性关节炎超早期诊断中的作用研究
8
作者 谭俊元 江磊 +2 位作者 王玉武 朱文峰 董红华 《医学食疗与健康》 2020年第24期154-155,共2页
目的:探究核素扫描在软骨前体细胞诱导活化的骨性关节炎超早期诊断中的作用。方法:选择32只SPF级雌性SD大鼠,实验共分两组,一组建立大鼠ACL切断骨关节炎模型,另一组为正常大鼠。于0、3、7、14、21天进行整合素α5β1分子显像、血清CTX-... 目的:探究核素扫描在软骨前体细胞诱导活化的骨性关节炎超早期诊断中的作用。方法:选择32只SPF级雌性SD大鼠,实验共分两组,一组建立大鼠ACL切断骨关节炎模型,另一组为正常大鼠。于0、3、7、14、21天进行整合素α5β1分子显像、血清CTX-Ⅱ测定和MRI检查。结果:清CTX-Ⅱ水平在未出现明显病理变化时即已开始增高,且随时间不断升高,并与病灶区软骨中CTX-Ⅱ表达一致,可作为OA早期诊断和病情评估的参考指标。以软骨前体细胞为种子细胞的部分对比试验表明,PRP对软骨前体细胞的增殖及分化都起到了积极的作用。结论:核素扫描在软骨前体细胞诱导活化的骨性关节炎超早期诊断中,具有十分重要的临床应用价值。 展开更多
关键词 核素扫描 软骨前体细胞 骨性关节炎 诊断
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骨软骨前体细胞分离鉴定及转化生长因子β3对其成软骨分化的影响 被引量:4
9
作者 左伟 程文俊 +3 位作者 焦竞 黄玉成 肖飞 王俊文 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2018年第12期1829-1834,共6页
背景:关节软骨中存在着前软骨干细胞,可能成为软骨组织工程潜在的种子细胞,转化生长因子β3对前软骨干细胞的增殖及成软骨分化具有正向调节作用。目的:分析转化生长因子β3对骨软骨前体细胞成软骨的分化作用。方法:分离筛选出晚期骨关... 背景:关节软骨中存在着前软骨干细胞,可能成为软骨组织工程潜在的种子细胞,转化生长因子β3对前软骨干细胞的增殖及成软骨分化具有正向调节作用。目的:分析转化生长因子β3对骨软骨前体细胞成软骨的分化作用。方法:分离筛选出晚期骨关节炎患者软骨组织CD146^+软骨细胞并鉴定。培养CD146^+软骨细胞团块分为4组:为普通培养基组,转化生长因子β3-诱导组,转化生长因子β3+诱导组(含2.5μg/L重组人转化生长因子β3)和转化生长因子β3++诱导组(含10μg/L重组人转化生长因子β3)。培养4周后行组织块Ⅱ型胶原、Aggrecan免疫组织化学及相关基因实时荧光定量PCR检测。结果与结论:(1)成软骨诱导培养时,转化生长因子β3++诱导组所形成软骨块>转化生长因子β3+诱导组>转化生长因子β3-诱导组;(2)免疫组织化学结果显示,转化生长因子β3++诱导组Ⅱ型胶原和Aggrecan的表达明显高于转化生长因子β3+诱导组(P<0.05),转化生长因子β3+诱导组表达明显高于转化生长因子β3-诱导组(P<0.05);(3)实时荧光定量PCR检测显示,转化生长因子β3++诱导组Ⅱ型胶原和Aggrecan m RNA的表达明显强于转化生长因子β3+诱导组(P<0.05),转化生长因子β3+诱导组2指标表达明显强于转化生长因子β3-诱导组(P<0.05);转化生长因子β3++诱导组和转化生长因子β3+诱导组性别决定区Y框蛋白-9的表达均明显强于转化生长因子β3-诱导组(P<0.05);(4)结果表明,晚期骨关节炎患者残余关节软骨中存在着具有干细胞特性的骨软骨前体细胞;转化生长因子β3具有较强促骨软骨前体细胞成软骨分化的能力,其有可能成为软骨组织工程中理想的细胞因子。 展开更多
关键词 软骨前体细胞 转化生长因子Β3 软骨组织工程 软骨分化 骨关节炎 组织构建 骨关节炎 软骨细胞 组织工程
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骨软骨前体细胞与骨髓间充质干细胞相关特性的比较研究
10
作者 左伟 祁师亮 +2 位作者 韩乐奇 程文俊 王俊文 《中华实验外科杂志》 CAS 2024年第10期2285-2288,共4页
目的:从晚期骨关节炎患者关节软骨和骨髓组织中分离出CD146+骨软骨前体细胞(CD146+OCPs)和骨髓间充质干细胞(BMSCs),检测并比较CD146+OCPs与BMSCs的相关特性。方法:收集5例在武汉市第四医院行人工全膝关节置换术的晚期骨关节炎患者术中... 目的:从晚期骨关节炎患者关节软骨和骨髓组织中分离出CD146+骨软骨前体细胞(CD146+OCPs)和骨髓间充质干细胞(BMSCs),检测并比较CD146+OCPs与BMSCs的相关特性。方法:收集5例在武汉市第四医院行人工全膝关节置换术的晚期骨关节炎患者术中废弃的软骨组织和骨髓,分离培养出CD146+OCPs与BMSCs,培养3代后,分别用流式细胞仪检测其表面抗原表达,比较其克隆形成及成软骨、成骨、成脂分化能力。运用独立样本t检验进行组间比较,计数资料则采用χ^(2)检验。结果:CD146+OCPs高表达CD29、CD44、CD73及CD90等表面抗原分子,而几乎不表达CD34、CD45及CD133等抗原分子,这与BMSCs表面抗原表达谱相似;CD146+OCPs克隆效率为(20.8±3.8)%,BMSCs克隆效率为(19.3±3.1)%,两组差异无统计学意义(t=0.749,P>0.05)。与BMSCs比较,CD146+OCPs成骨分化能力较强,而成脂分化能力较弱,成软骨分化能力并无统计学意义。结论:CD146+OCPs与BMSCs形态功能类似。 展开更多
关键词 骨关节炎 软骨前体细胞 骨髓间充质干细胞 CD146
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软骨干/前体细胞生物学行为研究进展
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作者 何睿俊 崔敏 +1 位作者 王佰川 邵增务 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期116-120,共5页
近年来细胞治疗的相关研究表明,干细胞可以为关节软骨的修复与再生提供新的治疗策略。再生医学研究有赖于合适的种子细胞,满足时序调控的生长因子以及合适的生物支架材料。软骨干/前体细胞(CSPCs)存在于人类等多种哺乳动物关节软骨中... 近年来细胞治疗的相关研究表明,干细胞可以为关节软骨的修复与再生提供新的治疗策略。再生医学研究有赖于合适的种子细胞,满足时序调控的生长因子以及合适的生物支架材料。软骨干/前体细胞(CSPCs)存在于人类等多种哺乳动物关节软骨中,参与了骨关节炎(OA)的发生与进展,在关节软骨的修复与再生方面显示出巨大潜能。 展开更多
关键词 软骨干/前体细胞 再生医学 软骨修复 研究进展
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