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细粒棘球绦虫转醛醇酶基因的克隆、表达及其潜在免疫诊断价值的研究
被引量：
7
1
作者
辛奇
景涛
+5 位作者
宋晓霞
高海军
孙旭东
吕薇
Nabil Pervaiz
鲁俊
《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第4期333-338,共6页
目的对细粒棘球绦虫转醛醇酶(Echinococcus granulosus transaldolase,EgTAL)编码基因进行生物信息学分析、克隆和表达,并对其作为药物靶标及其潜在的免疫诊断价值进行初步评价。方法运用多种软件分析EgTAL的理化性质、保守功能域、同...
目的对细粒棘球绦虫转醛醇酶(Echinococcus granulosus transaldolase,EgTAL)编码基因进行生物信息学分析、克隆和表达,并对其作为药物靶标及其潜在的免疫诊断价值进行初步评价。方法运用多种软件分析EgTAL的理化性质、保守功能域、同源性和三级结构等。从重组质粒pBluescript ⅡSK Egtal中PCR扩增Egtal基因,克隆至pET30a,构建表达载体pET30a-Egtal,转化大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物,抗His标签镍亲和层析柱纯化重组蛋白EgTAL,与细粒棘球蚴病患者血清进行蛋白质印迹(Western blotting)分析。用20份已确诊的细粒棘球蚴病患者血清和20份健康者血清,ELISA法评价重组蛋白EgTAL的免疫诊断效果。分光光度法检测重组蛋白EgTAL的酶活性。结果 Egtal基因长981 bp,编码的蛋白含326个氨基酸,理论相对分子质量(M_r)为36 332,等电点为5.11,含TAL标识序列DATTNPSLI(31~39 aa)及酶活性催化部位,EgTAL与人TAL的同源性为62%。三级结构分子建模显示,EgTAL具有A和B两条完整的蛋白链。成功构建重组质粒pET30a-Egtal。SDS-PAGE和Western blotting分析结果显示,重组蛋白EgTAL在E.coli BL21(DE3)中获得高效表达,在M_r36 332处可见重组蛋白EgTAL条带,主要以可溶性形式存在,EgTAL可被细粒棘球蚴病患者血清识别。ELISA分析结果显示,20份细粒棘球蚴病患者血清和20份健康者血清的平均A_(450)值分别为1.189±0.384和0.325±0.078,其中17份细粒棘球蚴病患者血清检测结果为阳性。酶活性检测结果显示,纯化后的EgTAL具有高效酶活性,60μg EgTAL加入酶促反应体系催化反应30 min后,体系的吸光度(A_(340)值)由1.684±0.103降至0.139±0.009。结论克隆了细粒棘球绦虫Egtal基因,并在E.coli BL21(DE3)中表达出有酶催化活性和潜在免疫诊断价值的EgTAL重组蛋白。
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关键词
细粒棘球绦虫
转醛醇酶
基因
克隆表达
免疫诊断
药物靶点
原文传递
大肠杆菌K-12转醛醇酶基因talB的克隆及在运动发酵单胞菌CP4中的表达
2
作者
管于平
刘成
+2 位作者
邹少兰
吴经才
张敏华
《工业微生物》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期36-40,共5页
研究了E.coliK-12转醛醇酶基因(talB)在自身启动子和在Z.mobilisCP4eno基因启动子的启动下在E.coliDH5α和Z.mobilisCP4中的表达情况。首先克隆了E.coliK-12talB基因,并连接到穿梭载体pZB1上构建成pZB1-talB;然后利用PCR重叠延伸技术将E...
研究了E.coliK-12转醛醇酶基因(talB)在自身启动子和在Z.mobilisCP4eno基因启动子的启动下在E.coliDH5α和Z.mobilisCP4中的表达情况。首先克隆了E.coliK-12talB基因,并连接到穿梭载体pZB1上构建成pZB1-talB;然后利用PCR重叠延伸技术将E.coliK-12talB自身的启动子换成Z.mobilisCP4eno的启动子,构建得到pZB1-Peno-talB。将这两个质粒分别转化E.coliDH5α和Z.mobilisCP4。对转化子粗酶液进行的转醛醇酶酶活力测定结果表明,E.coli talB自身启动子和Z.mobilis eno启动子能以基本相同的效率启动talB基因在E.coli和Z.mobilis中的表达。
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关键词
转醛醇酶
基因
启动子
大肠杆菌
运动发酵单胞菌
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职称材料
题名
细粒棘球绦虫转醛醇酶基因的克隆、表达及其潜在免疫诊断价值的研究
被引量：
7
1
作者
辛奇
景涛
宋晓霞
高海军
孙旭东
吕薇
Nabil Pervaiz
鲁俊
机构
兰州大学基础医学院病原生物学研究所
出处
《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第4期333-338,共6页
基金
中央高校基本科研业务费专项资金(No.lzujbky-2015-165)
国家自然科学基金(No.81171632)~~
文摘
目的对细粒棘球绦虫转醛醇酶(Echinococcus granulosus transaldolase,EgTAL)编码基因进行生物信息学分析、克隆和表达,并对其作为药物靶标及其潜在的免疫诊断价值进行初步评价。方法运用多种软件分析EgTAL的理化性质、保守功能域、同源性和三级结构等。从重组质粒pBluescript ⅡSK Egtal中PCR扩增Egtal基因,克隆至pET30a,构建表达载体pET30a-Egtal,转化大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物,抗His标签镍亲和层析柱纯化重组蛋白EgTAL,与细粒棘球蚴病患者血清进行蛋白质印迹(Western blotting)分析。用20份已确诊的细粒棘球蚴病患者血清和20份健康者血清,ELISA法评价重组蛋白EgTAL的免疫诊断效果。分光光度法检测重组蛋白EgTAL的酶活性。结果 Egtal基因长981 bp,编码的蛋白含326个氨基酸,理论相对分子质量(M_r)为36 332,等电点为5.11,含TAL标识序列DATTNPSLI(31~39 aa)及酶活性催化部位,EgTAL与人TAL的同源性为62%。三级结构分子建模显示,EgTAL具有A和B两条完整的蛋白链。成功构建重组质粒pET30a-Egtal。SDS-PAGE和Western blotting分析结果显示,重组蛋白EgTAL在E.coli BL21(DE3)中获得高效表达,在M_r36 332处可见重组蛋白EgTAL条带,主要以可溶性形式存在,EgTAL可被细粒棘球蚴病患者血清识别。ELISA分析结果显示,20份细粒棘球蚴病患者血清和20份健康者血清的平均A_(450)值分别为1.189±0.384和0.325±0.078,其中17份细粒棘球蚴病患者血清检测结果为阳性。酶活性检测结果显示,纯化后的EgTAL具有高效酶活性,60μg EgTAL加入酶促反应体系催化反应30 min后,体系的吸光度(A_(340)值)由1.684±0.103降至0.139±0.009。结论克隆了细粒棘球绦虫Egtal基因,并在E.coli BL21(DE3)中表达出有酶催化活性和潜在免疫诊断价值的EgTAL重组蛋白。
关键词
细粒棘球绦虫
转醛醇酶
基因
克隆表达
免疫诊断
药物靶点
Keywords
Echinnococcus granulosus
Transaldolase gene
Cloning and expression
Immunodiagnosis
Drug target
分类号
R383.33 [医药卫生—医学寄生虫学]
原文传递
题名
大肠杆菌K-12转醛醇酶基因talB的克隆及在运动发酵单胞菌CP4中的表达
2
作者
管于平
刘成
邹少兰
吴经才
张敏华
机构
天津大学石化中心
出处
《工业微生物》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期36-40,共5页
文摘
研究了E.coliK-12转醛醇酶基因(talB)在自身启动子和在Z.mobilisCP4eno基因启动子的启动下在E.coliDH5α和Z.mobilisCP4中的表达情况。首先克隆了E.coliK-12talB基因,并连接到穿梭载体pZB1上构建成pZB1-talB;然后利用PCR重叠延伸技术将E.coliK-12talB自身的启动子换成Z.mobilisCP4eno的启动子,构建得到pZB1-Peno-talB。将这两个质粒分别转化E.coliDH5α和Z.mobilisCP4。对转化子粗酶液进行的转醛醇酶酶活力测定结果表明,E.coli talB自身启动子和Z.mobilis eno启动子能以基本相同的效率启动talB基因在E.coli和Z.mobilis中的表达。
关键词
转醛醇酶
基因
启动子
大肠杆菌
运动发酵单胞菌
Keywords
talB
promoter
Zymomonas rnobilis
Escherichia coli
分类号
TQ920.1 [轻工技术与工程—发酵工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
细粒棘球绦虫转醛醇酶基因的克隆、表达及其潜在免疫诊断价值的研究
辛奇
景涛
宋晓霞
高海军
孙旭东
吕薇
Nabil Pervaiz
鲁俊
《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017
7
原文传递
2
大肠杆菌K-12转醛醇酶基因talB的克隆及在运动发酵单胞菌CP4中的表达
管于平
刘成
邹少兰
吴经才
张敏华
《工业微生物》
CAS
CSCD
北大核心
2006
0
下载PDF
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