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伪狂犬病病毒上海株(PRV-SH)gE^-/gI^-/GFP^+缺失株的构建 被引量：2
1
作者 姜焱 侯玉峰 陈溥言 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期15-20,共6页
在构建了含伪狂犬病病毒 (PseudorabiesVirus,PRV)上海株gI基因和gE基因克隆鉴定的基础上 ,采用酶切的方法构建了载体pgEI。然后用限制性内切酶BamHI和BstpI缺失掉gE基因 5’端 363bp,同时把绿色荧光蛋白 (GFP)基因表达盒插入到缺失部... 在构建了含伪狂犬病病毒 (PseudorabiesVirus,PRV)上海株gI基因和gE基因克隆鉴定的基础上 ,采用酶切的方法构建了载体pgEI。然后用限制性内切酶BamHI和BstpI缺失掉gE基因 5’端 363bp,同时把绿色荧光蛋白 (GFP)基因表达盒插入到缺失部分 ,并在下游引入一个多克隆位点 ,构建了缺失转移载体pgEI GFP。用DOTAP转染试剂盒将pgEI GFP转染了感染PRV SH的BHK 2 1细胞 ,待出现 80 %病变后收获病毒 ,并以蚀斑法得到纯化的缺失了gE gI重组病毒株。小鼠试验证实了缺失株的毒力有所下降。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒上海株 PRV-SH gE^-/gI^-/GFP^+缺失株 构建 转移载体质粒 绿色荧光蛋白(GFP)表达盒
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杆状病毒双基因表达载体转移质粒的构建 被引量：1
2
作者 王珣章 谢伟东 +3 位作者 龙綮新 苏德明 钟江 蒲蛰龙 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1992年第3期283-286,共4页
杆状病毒载体系统的建立和发展,是80年代真核基因表达研究领域的重大进展之一。为了弥补用传统的杆状病毒载体系统重组的病毒只能经注射感染幼虫的不足,我们构建了能将外源基因和多角体蛋白基因同时插入杆状病毒基因组中的转移载体质粒p... 杆状病毒载体系统的建立和发展,是80年代真核基因表达研究领域的重大进展之一。为了弥补用传统的杆状病毒载体系统重组的病毒只能经注射感染幼虫的不足,我们构建了能将外源基因和多角体蛋白基因同时插入杆状病毒基因组中的转移载体质粒pSXIVVI^+X3系列,建立起除能保留传统系统高效表达外源基因的特点外,还具有包含体,能以口服方式大规模感染粉纹夜蛾(Tricoplusia ni)幼虫的杆状病毒载体体系。本文报道以上述质粒为基础的杆状病毒双基因表达载体转移质粒的构建。 展开更多
关键词 杆状病毒 转移载体质粒 双基因载体
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含LacZ报告基因的传染性喉气管炎病毒TK基因转移载体质粒的构建 被引量：1
3
作者 吴红专 刘福安 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期262-266,共5页
在传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）北京Ｅ２株ＴＫ基因克隆、鉴定的基础上［１］，进一步构建转移载体质粒，为ＩＬＴＶＴＫ基因缺失毒株的构建作准备，先用ＰｓｔＩ将ｐＳＶｇａｌ线性化，再经ＥｃｏＲＩ不完全酶切，分离含ＳＶ４０... 在传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）北京Ｅ２株ＴＫ基因克隆、鉴定的基础上［１］，进一步构建转移载体质粒，为ＩＬＴＶＴＫ基因缺失毒株的构建作准备，先用ＰｓｔＩ将ｐＳＶｇａｌ线性化，再经ＥｃｏＲＩ不完全酶切，分离含ＳＶ４０立即早期启动子和增强子的４２Ｋｂ的ＬａｃＺ报告基因片段，并用Ｋｌｅｎｏｗ大片段补平，将克隆ＴＫ基因的载体ｐＴＫ用ＳｎａＢＩ处理，后用Ｔ４ＤＮＡ连接酶将以上两个片段平端连接成重组质粒，转化ＪＭ１０９，在Ｘｇａｌ、ＩＰＴＧ、Ａｍｐ、ＬＢ平板上筛选蓝色菌落，经琼脂糖凝胶电泳筛选到１２个阳性重组子，命名为ｐＰＴＫ，用ｐｓｔＩ和ＨｉｎｄＩＩ单酶切都得到了分子量为８１３Ｋｂ的质粒，进一步用狄高辛标记ＬａｃＺ基因片段作探针对ｐＰＴＫ进行打点杂交，结果均成阳性，证明了ＬａｃＺ基因已插入了ｐＴＫ，脂质体转染法也得到了蓝斑病毒，结果表明我们已成功构建了转移载体质粒ｐＰＴＫ。 展开更多
关键词 传染性 喉气管炎病毒 TK基因 转移载体质粒 ILTV
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