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重组蛋白的CHO细胞瞬时表达体系的研究进展 被引量：6
1
作者 韩阳 蔡洁行 +1 位作者 张朗 李谦 《药物生物技术》 CAS 2017年第3期243-248,共6页
单抗等治疗性重组蛋白具有巨大的商业价值和科研价值,而哺乳动物细胞瞬时表达体系能够快速生产毫克到克级别的重组蛋白,且生化特性(如翻译后的糖基化修饰类型等)均与人源相似,使该技术成为当前高校和企业研究的热点。该体系在工业界的... 单抗等治疗性重组蛋白具有巨大的商业价值和科研价值,而哺乳动物细胞瞬时表达体系能够快速生产毫克到克级别的重组蛋白,且生化特性(如翻译后的糖基化修饰类型等)均与人源相似,使该技术成为当前高校和企业研究的热点。该体系在工业界的广泛使用推动了其向高通量和大规模的发展,然而由于它存在着表达量低的天然缺陷,制约了其进一步发展。通过整理和研究最近一段时间发表的研究数据和研究观点,文章从宿主细胞的改造、表达载体的设计、转染方法的选择、补料策略4个角度综述近年来在工业界和学术界,CHO细胞(中国仓鼠卵巢细胞)重组蛋白瞬时表达体系的现状和最新突破,并展望其未来发展方向。 展开更多
关键词 哺乳动物细胞 CHO细胞 重组蛋白 瞬时表达 基因定点编辑 转座子载体 大体积电转 解除转录 抑制
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促冻杀虫基因工程菌的构建 被引量：7
2
作者 张新建 孙福在 +2 位作者 赵廷昌 丁爱云 唐朝荣 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期227-232,共6页
利用转座酶基因位于转座单位以外的微转座子载体,将冰核基因iceA置于转座单位里,构建了携带iceA的自杀性工程质粒pTnice1, 并进一步利用该质粒的接合转移特性和Tn5转座功能,将iceA整合到阴沟肠杆菌染色体DNA上,成功地构建了在无选择压... 利用转座酶基因位于转座单位以外的微转座子载体,将冰核基因iceA置于转座单位里,构建了携带iceA的自杀性工程质粒pTnice1, 并进一步利用该质粒的接合转移特性和Tn5转座功能,将iceA整合到阴沟肠杆菌染色体DNA上,成功地构建了在无选择压力下冰核基因仍稳定存在并有效表达冰核活性的促冻杀虫基因工程菌Enc1.2022ina。经应用试验证明,用该工程菌饲喂玉米螟幼虫,在饲菌后9 d内,虫体的过冷却点比不饲菌的对照提高10℃左右;在饲菌后第6天,于-5℃和-7℃低温下处理12 h,工程菌处理过的幼虫冻死率分别为85%和100%,而对照虫体的冻死率分别为0和5%。试验还证明,该工程菌可以在昆虫体内稳定定殖增生,在植物上附生定殖能力明显比野生型冰核细菌弱。因此,解决了阻碍冰核细菌促冻杀虫应用中的难题,为防治我国北方地区重要农林果树和仓储主要越冬害虫探索出了一条生防新途径。 展开更多
关键词 促冻杀虫基因工程菌 微转座子载体 冰核基因 生物防治 农业害虫 仓储害虫 越冬害虫 转基因
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家蚕精子介导转基因技术体系的优化 被引量：7
3
作者 张业顺 夏定国 +4 位作者 张国政 唐顺明 沈兴家 赵浩勤 郭锡杰 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期201-206,共6页
为了构建高效的家蚕转基因技术,对采用piggyBac转座载体的家蚕精子介导转基因的主要技术参数进行优化,结果表明外源DNA的稀释剂和注射方式对导入效率影响较大,G0代未整合的外源DNA在5龄期前基本被降解破坏。推荐的家蚕精子介导基因转移... 为了构建高效的家蚕转基因技术,对采用piggyBac转座载体的家蚕精子介导转基因的主要技术参数进行优化,结果表明外源DNA的稀释剂和注射方式对导入效率影响较大,G0代未整合的外源DNA在5龄期前基本被降解破坏。推荐的家蚕精子介导基因转移技术方案为:处女蛾交尾囊注射6～8μL以0.1×TE稀释的2 g/Lpig-gyBac转座子载体DNA后正常交配产卵,根据G0代5龄期及蛾期PCR检测标记基因为阳性的蛾区自交,G1代阳性个体自交以获得纯合后代。 展开更多
关键词 家蚕 精子介导转基因 交尾囊注射 转座子载体DNA PCR检测
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利用非转座子载体介导的转基因家蚕表达人胰岛素样生长因子Ⅰ 被引量：1
4
作者 胡莹莹 薛仁宇 +1 位作者 曹广力 贡成良 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期658-664,共7页
为了实现利用非转座子载体介导的转基因家蚕整体表达人胰岛素样生长因子Ⅰ(hIGF-Ⅰ),将hIGF-Ⅰ基因克隆进非转座子类型的昆虫细胞表达载体pIZT/V5-His,构建转基因载体pIZT/V5-His-hIGF-Ⅰ。利用精子介导法将该转基因载体导入家蚕卵,通... 为了实现利用非转座子载体介导的转基因家蚕整体表达人胰岛素样生长因子Ⅰ(hIGF-Ⅰ),将hIGF-Ⅰ基因克隆进非转座子类型的昆虫细胞表达载体pIZT/V5-His,构建转基因载体pIZT/V5-His-hIGF-Ⅰ。利用精子介导法将该转基因载体导入家蚕卵,通过绿色荧光筛选并结合PCR和Dot blotting检测鉴定,表明已成功获得hIGF-Ⅰ转基因家蚕。对培育至G2代的转基因家蚕5龄幼虫蛋白质样品进行Western blotting分析,结果显示hIGF-Ⅰ在转基因家蚕中获得表达,重组hIGF-Ⅰ的分子质量约12.5 kD;ELISA检测hIGF-Ⅰ在G2代转基因家蚕5龄幼虫全蚕以及后部丝腺、脂肪体冻干粉中的质量比分别为65、411、469 ng/g。试验结果再次证实通过非转座子载体pIZT/V5-His介导可以将外源基因导入家蚕基因组,并实现外源基因在转基因家蚕中整体表达。 展开更多
关键词 转基因家蚕 非转座子载体pIZT/V5-His 人胰岛素样生长因子Ⅰ 精子介导法
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非转座子载体介导的转基因家蚕表达hIL-28A 被引量：1
5
作者 崔琳琳 薛仁宇 +2 位作者 陆叶 曹广力 贡成良 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2011年第8期724-729,共6页
为了探讨非转座子载体介导转基因家蚕表达外源基因的可能性,将hIL-28A克隆进昆虫细胞表达载体pIZT/V5-His,构建了重组载体pIZT/V5-His-hIL-28A.利用精子介导法将该重组载体导入家蚕卵,通过绿色荧光筛选并结合PCR、DNA杂交等分子鉴定,证... 为了探讨非转座子载体介导转基因家蚕表达外源基因的可能性,将hIL-28A克隆进昆虫细胞表达载体pIZT/V5-His,构建了重组载体pIZT/V5-His-hIL-28A.利用精子介导法将该重组载体导入家蚕卵,通过绿色荧光筛选并结合PCR、DNA杂交等分子鉴定,证实成功获得了转基因家蚕.Western blotting结果显示,转基因家蚕表达重组hIL-28A的分子质量为25 ku,ELISA检测结果显示,hIL-28A在G3代转基因蚕、后部丝腺、脂肪组织冻干粉中的含量分别为0.198、0.320和0.238 ng/g.表明通过非转座子载体介导可以将外源基因导入家蚕基因组并实现外源基因的表达. 展开更多
关键词 非转座子载体pIZT/V5-His 转基因家蚕 hIL-28A 精子介导法
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