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多药耐药鲍氏不动杆菌耐药性与转座子及插入序列遗传标记研究 被引量：113
1
作者 苏兆亮 糜祖煌 +5 位作者 孙光明 陈建国 郑东 刘嫣方 Sandoghchian Siamak 许化溪 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第20期3085-3087,共3页
目的探讨多耐药鲍氏不动杆菌耐药性与转座子、插入序列等遗传原件之间的关系。方法 K-B法进行药物敏感试验,PCR进行转座子、插入序列遗传标记检测,并测序。结果临床分离的鲍氏不动杆菌对12种常见抗菌药物耐药率分别为头孢噻肟78.9%、头... 目的探讨多耐药鲍氏不动杆菌耐药性与转座子、插入序列等遗传原件之间的关系。方法 K-B法进行药物敏感试验,PCR进行转座子、插入序列遗传标记检测,并测序。结果临床分离的鲍氏不动杆菌对12种常见抗菌药物耐药率分别为头孢噻肟78.9%、头孢他啶63.1%、头孢吡肟78.9%、头孢西丁100.0%、亚胺培南73.7%、美罗培南73.7%、氨苄西林/舒巴坦78.9%、阿莫西林/克拉维酸78.9%、阿米卡星52.6%、庆大霉素57.8%、环丙沙星78.9%、四环素78.9%;转座子tnp513和插入序列遗传标记ISaba1、IS26检出率分别为47.4%、78.9%、47.4%。结论多药耐药鲍氏不动杆菌的耐药性与转座子和插入序列遗传标记有一定的关系。 展开更多
关键词 多耐药鲍氏不动杆菌 转座子 插入序列
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水稻转座子突变体库的构建及突变类型的遗传分析 被引量：35
2
作者 朱正歌 肖晗 +5 位作者 傅亚萍 胡国成 于永红 斯华敏 张景六 孙宗修 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期288-292,共5页
利用根癌农杆菌介导的遗传转化法 ,把玉米转座子Ac片段 (合成转座酶 )和Ds因子 (转座序列 )分别导入粳稻品种中花 11,获得了 40 0多个转化株系。有 6 3个株系的转基因T0 代植株或T1 代植株出现了可见的形态变异 ,包括抗病、白苗、黄苗... 利用根癌农杆菌介导的遗传转化法 ,把玉米转座子Ac片段 (合成转座酶 )和Ds因子 (转座序列 )分别导入粳稻品种中花 11,获得了 40 0多个转化株系。有 6 3个株系的转基因T0 代植株或T1 代植株出现了可见的形态变异 ,包括抗病、白苗、黄苗、白条斑叶、有色秆、矮秆、匍匐茎、雄性不育、抽穗早、抽穗迟、多倍体等突变类型。对突变性状的形态及分子生物学分析 。 展开更多
关键词 转座子 突变体 聚合酶链式反应 SOUTHERN杂交 随机扩增多态DNA 水稻 遗传分析
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铜绿假单胞菌连续分离株耐药性与遗传学特征研究 被引量：44
3
作者 糜祖煌 钱小毛 +1 位作者 金辉 秦玲 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期767-770,共4页
目的了解铜绿假单胞菌(PAE)连续分离株耐药性与遗传学特征。方法采用PCR检测86株PAE连续分离株耐药基因和整合子、转座子。结果86株中oprD2基因缺失47株(55.0%)、β-内酰胺酶基因blaCARB阳性26株(30.2%)、blaVIM阳性12株(14.0%)、blaDH... 目的了解铜绿假单胞菌(PAE)连续分离株耐药性与遗传学特征。方法采用PCR检测86株PAE连续分离株耐药基因和整合子、转座子。结果86株中oprD2基因缺失47株(55.0%)、β-内酰胺酶基因blaCARB阳性26株(30.2%)、blaVIM阳性12株(14.0%)、blaDHA阳性3株(3.5%)、blaTEM阳性1株(1.1%);氨基糖苷类修饰酶基因ant(2″)-Ⅰ阳性24株(27.9%)、aac(6′)-Ⅱ阳性21株(24.4%)、aac(6′)-Ⅰb阳性13株(15.1%)、ant(3″)-Ⅰ阳性4株(4.7%),存在克隆传播现象。结论绍兴连续分离的PAEβ-内酰胺酶、氨基糖苷类修饰酶基因携带率高。PAE可导致克隆传播医院感染,并存在暴发性流行。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 耐药基因 整合子 转座子
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可移动遗传元件:耐药基因的载体 被引量：38
4
作者 翁幸鐾 糜祖煌 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期389-397,共9页
细菌通过各种可移动遗传元件(质粒、转座子、整合子、噬菌体、插入序列共同区等),以基因水平转移的方式从其它细菌获得外源性耐药基因,整合在自身基因组上而产生获得性耐药。本文主要阐述各种可移动遗传元件介导获得性耐药的机制,理解... 细菌通过各种可移动遗传元件(质粒、转座子、整合子、噬菌体、插入序列共同区等),以基因水平转移的方式从其它细菌获得外源性耐药基因,整合在自身基因组上而产生获得性耐药。本文主要阐述各种可移动遗传元件介导获得性耐药的机制,理解可移动遗传元件在耐药性发展和传播上的作用,是设计和执行干预方法来减少细菌感染威胁的前提条件。本文还介绍了一种新发现的可移动遗传元件:基因转移因子,它与细菌耐药基因水平转移的关系值得研究。 展开更多
关键词 获得性耐药 基因水平转移 质粒 转座子 整合子 噬菌体 插入序列共同区 基因转移因子
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植物基因组大小进化的研究进展 被引量：36
5
作者 陈建军 王瑛 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期464-470,共7页
不同的真核生物之间基因组大小差异很大,并与生物体复杂性不相关,在基因组中存在大量的非编码DNA序列是造成这种差异的主要原因,特别是转座子序列。文章综述了植物基因组大小差异以及引起这种差异的主要进化动力的最新研究进展。植物基... 不同的真核生物之间基因组大小差异很大,并与生物体复杂性不相关,在基因组中存在大量的非编码DNA序列是造成这种差异的主要原因,特别是转座子序列。文章综述了植物基因组大小差异以及引起这种差异的主要进化动力的最新研究进展。植物基因组多倍化和转座子积累是导致基因组增大的主要动力,而同源不平等重组和非正规重组则是驱动基因组DNA丢失的潜在动力,以制约基因组无限制地增大。文中还讨论了植物基因组大小进化方向,即总体趋势是朝着增大的方向进化,某些删除机制主要是削弱这种增大作用但不能逆转。 展开更多
关键词 基因组大小 进化动力 转座子 非编码DNA
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无选择标记转基因植物的培育 被引量：19
6
作者 陈松彪 李旭刚 +1 位作者 王锋 朱祯 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期1-7,共7页
植物转基因研究中通常都要使用选择标记基因来筛选转化细胞并获得转基因植株。但是当转基因植株育成后,选择标记基因就失去了存在的意义。为了消除由选择标记基因引起的安全性隐患,人们发展了一些培育无选择标记转基因植物的策略。这些... 植物转基因研究中通常都要使用选择标记基因来筛选转化细胞并获得转基因植株。但是当转基因植株育成后,选择标记基因就失去了存在的意义。为了消除由选择标记基因引起的安全性隐患,人们发展了一些培育无选择标记转基因植物的策略。这些策略主要包括共转化、位点特异性重组和转座子转座等。去除选择标记基因将促进公众对转基因作物的接受。评述了无选择标记转基因植物的研究进展。 展开更多
关键词 选择标记 转基因植物 转座子 位点特异性 植物转基因 共转化 细胞 转基因植株 培育 育成
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植物基因工程中的转座子标签 被引量：13
7
作者 杨琳 王金发 《生物技术》 CAS CSCD 2000年第1期22-27,共6页
关键词 植物基因工程 转座子 转座子标鉴 基因分离
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大肠埃希菌尿液分离株可移动遗传元件研究 被引量：28
8
作者 翁幸鐾 糜祖煌 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期607-610,共4页
目的调查大肠埃希菌尿液分离株中质粒、转座子和整合子等可移动遗传元件的存在情况。方法收集宁波市第一医院2008年10月～2009年3月患者尿液标本中分离的大肠埃希菌共28株,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析10种可移动遗传元件... 目的调查大肠埃希菌尿液分离株中质粒、转座子和整合子等可移动遗传元件的存在情况。方法收集宁波市第一医院2008年10月～2009年3月患者尿液标本中分离的大肠埃希菌共28株,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析10种可移动遗传元件:traA、trbC、tnpA、tnpU、tnp513、tnsA、merA、intⅠ1、intⅠ2、intⅠ3。结果28株大肠埃希菌共检出3种基因:traA、trbC、intⅠ1,其余7种基因未检出;各种基因阳性率以traA最高25株(89.3%),intⅠ1次之19株(67.9%),trbC8株(28.6%);所有28株(100.0%)至少检出1种基因,各菌株基因阳性数1～3种,5株ECO同时检出3种基因,13株同时检出2种基因,10株仅检出1种基因。结论同时检测10种可移动遗传元件是国内首次报道,traA和intⅠ1基因阳性率较高,而trbC基因阳性率较低;可移动遗传元件介导各种耐药基因使受体菌表现为多药耐药,检出trbC基因为国内首次报道。 展开更多
关键词 大肠埃希菌 尿液 质粒 转座子 整合子 可移动遗传元件 多药耐药
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植物基因克隆的策略和方法 被引量：13
9
作者 邓洪新 余懋群 《西南农业学报》 CSCD 2001年第3期78-82,共5页
植物基因克隆是当前植物学研究的前沿和热点。经过近 2 0年的发展 ,已经形成了一些克隆植物基因的方法 ,主要有功能克隆 ,PCR扩增 ,转座子或T DNA标签 ,定位克隆 ,差别杂交和减法杂交 ,mRNA差异显示和人工合成克隆。本文对这些技术的工... 植物基因克隆是当前植物学研究的前沿和热点。经过近 2 0年的发展 ,已经形成了一些克隆植物基因的方法 ,主要有功能克隆 ,PCR扩增 ,转座子或T DNA标签 ,定位克隆 ,差别杂交和减法杂交 ,mRNA差异显示和人工合成克隆。本文对这些技术的工作原理 。 展开更多
关键词 植物基因克隆 功能克隆 PCR扩增克隆 转座子 T-DNA标签 MRNA差异显示 减法杂交
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肺炎链球菌耐药基因ermB、mefA、tetM与转座子整合酶基因intTn的检测 被引量：19
10
作者 杨慧 杨永弘 +4 位作者 Elisabet Nielsen 俞桑洁 袁林 王咏红 沈叙庄 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期677-682,共6页
目的研究耐药基因ermB、mefA、tetM与转座子整合酶基因intTn在携带肺炎链球菌的北京儿童中分布特点。方法对185株呼吸道感染患儿鼻咽部分离的肺炎链球菌进行以下检测:Etest、琼脂稀释或纸片扩散法测定对大环内酯类、四环素、β内酰胺类... 目的研究耐药基因ermB、mefA、tetM与转座子整合酶基因intTn在携带肺炎链球菌的北京儿童中分布特点。方法对185株呼吸道感染患儿鼻咽部分离的肺炎链球菌进行以下检测:Etest、琼脂稀释或纸片扩散法测定对大环内酯类、四环素、β内酰胺类及头孢类等15种抗生素的药物敏感性。PCR检测大环内酯类耐药基因ermB和mefA,四环素耐药基因tetM以及转座子Tn1545的整合酶基因intTn。结果185株肺炎链球菌的药敏结果显示,对红霉素、克林霉素、四环素和复方磺胺甲基异唑的耐药率较高,分别为78.9%、76.2%、86.0%和78.7%,对阿莫西林克拉维酸、头孢克洛、头孢曲松和头孢呋辛耐药率较低,分别为2.2%、15.5%、2.8%和14.1%。所有红霉素耐药株均检出ermB和或mefA,其中79.5%为ermB阳性,17.8%为ermB和mefA同时阳性,2.7%为mefA阳性。tetM基因在分离株中的阳性率是87%,四环素耐药组的tetM基因携带率是96.9%,高于敏感组(26.9%)。四环素耐药株的红霉素耐药率(90.0%)亦高于敏感株组(11.5%)。87.6%的肺炎链球菌存在intTn基因,intTn基因阳性组的红霉素、四环素、氯霉素、复方磺胺甲基异唑和环丙沙星的耐药率较intTn基因阴性组高。分离株最常见的基因组合是intTn+tetM+ermB,占58.4%。结论北京地区呼吸道感染儿童鼻咽部肺炎链球菌耐大环内酯类抗生素的主要原因是ermB编码的23SrRNA甲基化酶致靶位改变。tetM基因编码蛋白质的核糖体保护作用,是肺炎链球菌四环素耐药的重要机制。接合性转座子Tn1545的存在与菌株的红霉素和四环素耐药关系密切,可能是肺炎链球菌多重耐药的重要机制之一。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 大环内酯类 四环素 转座子 TETM基因 PCR检测 ermB 耐药基因 酶基因 大环内酯类抗生素
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转座子在植物功能基因组学中的应用 被引量：9
11
作者 雷娟利 徐志豪 《浙江农业学报》 CSCD 2002年第5期291-296,共6页
转座子已经被广泛用于内源或异源植物插入突变的研究 ,用于基因的分离和克隆。随着不同植物基因组研究进程加快 ,需要通过反向遗传学来研究已知序列基因的功能 ,大规模的转座子突变已成为功能基因组学研究的一种很重要手段。本文综述了... 转座子已经被广泛用于内源或异源植物插入突变的研究 ,用于基因的分离和克隆。随着不同植物基因组研究进程加快 ,需要通过反向遗传学来研究已知序列基因的功能 ,大规模的转座子突变已成为功能基因组学研究的一种很重要手段。本文综述了一些广泛应用的转座子以及这些转座子如何成功应用于异源植物的插入突变 。 展开更多
关键词 基因标签 反向遗传学 转座子 植物育种 功能基因组学 插入突变 异源植物
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肠球菌转座子介导的耐药基因转移研究进展 被引量：19
12
作者 沈洪 许淑珍 马纪平 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期837-840,共4页
关键词 肠球菌 转座子 耐药
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干旱胁迫下高羊茅基因组甲基化分析 被引量：19
13
作者 唐晓梅 王艳 +5 位作者 马东伟 程海洋 杨宏 代娅 陶向 马欣荣 《草业学报》 CSCD 北大核心 2015年第4期164-173,共10页
DNA甲基化是真核细胞基因组重要的一种表观遗传调控。DNA甲基化影响基因表达,在植物逆境胁迫适应中起着重要作用。高羊茅是禾本科单子叶羊茅属植物,具有良好的耐寒、耐热性,大量用作运动场草坪和防护草坪,也可用做牧草。干旱是限制高羊... DNA甲基化是真核细胞基因组重要的一种表观遗传调控。DNA甲基化影响基因表达,在植物逆境胁迫适应中起着重要作用。高羊茅是禾本科单子叶羊茅属植物,具有良好的耐寒、耐热性,大量用作运动场草坪和防护草坪,也可用做牧草。干旱是限制高羊茅分布和产量的主要因素之一。本研究利用甲基化敏感扩增多态性技术(MSAP),比较了高羊茅在干旱胁迫15d后基因组胞嘧啶甲基化的变化。在干旱胁迫下,植株生长受到严重抑制。MSAP分析显示,10对选择性扩增引物,共扩增出475个CCGG位点,其中131个位点发生了甲基化或去甲基化变化,占27.58%。对照组和干旱处理组,总甲基化水平分别是43.16%和42.11%,显示干旱胁迫诱导高羊茅总的甲基化率下降了1.05%。对差异条带进行归类分析,并克隆、测序,获得13条不同变化类型的序列。序列同源分析显示,大多数序列是参与胁迫应答的基因片段。其中2个片段,Fa6和Fa7为干旱诱导下发生甲基化的位点,分别与小麦和大麦的一个逆转录转座子具有较高的同源性,在干旱胁迫下它们的甲基化程度增加,表明干旱诱导二者进一步甲基化。甲基化的转座子在维持基因组稳定性具有重要作用。综上,干旱胁迫诱导的甲基化的变化,可能参与高羊茅对环境的适应性调节。 展开更多
关键词 高羊茅 干旱胁迫 DNA 甲基化 转座子
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利用鳞翅目来源的转座子piggyBac建立高效稳定的转基因家蚕技术 被引量：13
14
作者 代红久 徐国江 +3 位作者 Thomas ean-luc 王铸钢 蒋容静 费俭 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第14期1470-1474,共5页
piggyBac转座子元件被成功应用于家蚕转基因.EGFP荧光蛋白基因作为筛选标志,受含有Pax-6结合位点的启动子控制,并能在家蚕的眼部组织中特异性表达.荧光筛选质粒和piggyBac转座子表达质粒被以混合物的形式显微注射到家蚕受精卵,获得出生... piggyBac转座子元件被成功应用于家蚕转基因.EGFP荧光蛋白基因作为筛选标志,受含有Pax-6结合位点的启动子控制,并能在家蚕的眼部组织中特异性表达.荧光筛选质粒和piggyBac转座子表达质粒被以混合物的形式显微注射到家蚕受精卵,获得出生的G0代蛾子700个,互相交配后,利用EGFP荧光筛选获得111个独立的转基因系.大部分转基因系在基因组上携有2个或多个插入拷贝,并且在整个项目过程中转基因的表型稳定遗传6代以上.对插入位点的序列鉴定发现,其插入位点两侧具有特异性TTAA序列,证实转基因的插入受到piggyBac转座子的调控.高效稳定的家蚕转基因技术的建立为家蚕后基因组的研究和蚕业工业的发展提供了基础. 展开更多
关键词 鳞翅目 转座子 PIGGYBAC 转基因技术 家蚕 荧光蛋白
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水稻转座子研究进展 被引量：13
15
作者 高东迎 何冰 孙立华 《植物学通报》 CSCD 北大核心 2007年第5期667-676,共10页
转座子是植物基因组的重要组成部分,对于研究植物基因组进化等具有重要意义。随着水稻全基因组测序计划的开展和完成,水稻转座子研究取得了极大进展,目前已经在水稻基因组中发现了几乎所有类型的转座子,约占水稻基因组的35%。在正常情况... 转座子是植物基因组的重要组成部分,对于研究植物基因组进化等具有重要意义。随着水稻全基因组测序计划的开展和完成,水稻转座子研究取得了极大进展,目前已经在水稻基因组中发现了几乎所有类型的转座子,约占水稻基因组的35%。在正常情况下,大多数水稻转座子不具有转座活性,但是在特定的条件下(如组织培养或辐射等),水稻基因组中沉默的转座子可以被激活,从而可能导致插入突变并影响基因的表达。在水稻中已鉴定出6个有活性的转座子,其中Tos17已被应用到水稻功能基因组研究中。转座子序列的新的分子标记转座子展示(transposon display,TD)现已被开发,并在水稻遗传作图和遗传分化研究中得到应用。 展开更多
关键词 基因表达 水稻 转座子 转座子展示
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大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌traA、tnp513基因研究 被引量：17
16
作者 糜家睿 黄支密 糜祖煌 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期304-307,共4页
目的为了解大肠埃希菌(ECO)、肺炎克雷伯菌(KPN)traA基因和tnp513基因携带状况。方法应用PCR检测ECO、KPN traA基因和tnp513基因。结果29株ECO traA基因阳性24株(82.8%),tnp513基因阳性24株(82.8%);25株KPN traA基因均阴性,tnp513基因阳... 目的为了解大肠埃希菌(ECO)、肺炎克雷伯菌(KPN)traA基因和tnp513基因携带状况。方法应用PCR检测ECO、KPN traA基因和tnp513基因。结果29株ECO traA基因阳性24株(82.8%),tnp513基因阳性24株(82.8%);25株KPN traA基因均阴性,tnp513基因阳性23株(92.0%)。结论ECO、KPN耐药性高可能与traAt、np513高携带率有关。 展开更多
关键词 大肠埃希菌 肺炎克雷伯菌 质粒 转座子
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通过染色体整合抗生素2,4-二乙酰基间苯三酚合成基因提高荧光假单胞菌生防能力 被引量：14
17
作者 周洪友 魏海雷 +3 位作者 刘西莉 王烨 张力群 唐文华 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第8期766-771,共6页
Pseudomonas fluorescens CPF-10和2P24分离自小麦全蚀病自然衰退土壤,两者都产生酚类抗生素2,4-二乙酰基间苯三酚(2,4-diacetylphloroglucinol,2,4-DAPG),对多种土传植物病害具有较好的防治能力.利用Tn5转座子携带2,4-DAPG合成基因簇... Pseudomonas fluorescens CPF-10和2P24分离自小麦全蚀病自然衰退土壤,两者都产生酚类抗生素2,4-二乙酰基间苯三酚(2,4-diacetylphloroglucinol,2,4-DAPG),对多种土传植物病害具有较好的防治能力.利用Tn5转座子携带2,4-DAPG合成基因簇分别整合到野生荧光假单胞菌P32(2,4-DAPG-),CPF-10和2P24的染色体上,HPLC结果表明2,4-DAPG阴性菌P32可以产生抗生素2,4-DAPG,2,4-DAPG阳性菌CPF-10和2P24的抗生素产量可显著提高.番茄青枯病菌、小麦全蚀病菌、棉花立枯病菌的平板抑菌实验和番茄青枯病、小麦全蚀病温室防病实验结果说明2,4-DAPG产量的提高对防治病害具有增效作用.工程菌与野生菌株在灭菌土中定殖能力没有显著差异,但在自然土中工程菌较野生菌的定殖能力显著提高.结果表明,提高抗生素2,4-DAPG的产量是提高荧光假单胞菌防治病害效果的有效途径之一. 展开更多
关键词 荧光假单胞菌 间苯三酚 二乙酰基 抗生素 染色体整合 合成基因 Pseudomonas 生防 小麦全蚀病菌 定殖能力 防治病害 番茄青枯病 防治能力 植物病害 HPLC 青枯病菌 抑菌实验 立枯病菌 野生菌株 增效作用 工程菌 转座子 Tn5
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多药耐药大肠埃希菌整合子、转座子遗传标志研究 被引量：17
18
作者 林宁 孙海平 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1361-1363,1370,共4页
目的了解大肠埃希菌(ECO)多药耐药株整合子、转座子遗传标志。方法聚合酶链反应(PCR)检测整合子遗传标志(qacE△1-sul1)、转座子遗传标志(merAt、npA、tnpU)。结果20株ECO中qacE△1-sul1基因阳性14株(阳性率70.0%);merA基因阳性3株(阳性... 目的了解大肠埃希菌(ECO)多药耐药株整合子、转座子遗传标志。方法聚合酶链反应(PCR)检测整合子遗传标志(qacE△1-sul1)、转座子遗传标志(merAt、npA、tnpU)。结果20株ECO中qacE△1-sul1基因阳性14株(阳性率70.0%);merA基因阳性3株(阳性率15.0%)。结论ECO多药耐药株整合子遗传标志(qacE△1-sul1)、转座子遗传标志(merA)携带率高。 展开更多
关键词 大肠埃希菌 整合子 转座子
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细菌转座子Tn5转座机理的研究进展 被引量：13
19
作者 唐江涛 何勇强 唐纪良 《广西农业生物科学》 CAS CSCD 2003年第4期316-321,共6页
细菌转座子Tn5属于IS4家族,两端具有两段倒置的IS50序列。右末端(IS50R)编码转座酶(Tnp)和一个阻遏转座蛋白(Inh);左末端(IS50L)存在一个赭石突变,不能编码有功能的转座酶。Tn5属于非复制型转座子,被广泛应用于发现新基因、分析基因功... 细菌转座子Tn5属于IS4家族,两端具有两段倒置的IS50序列。右末端(IS50R)编码转座酶(Tnp)和一个阻遏转座蛋白(Inh);左末端(IS50L)存在一个赭石突变,不能编码有功能的转座酶。Tn5属于非复制型转座子,被广泛应用于发现新基因、分析基因功能和构建突变体库。但是在相当长的一个时期里,人们对其转座机理、转座热点等问题并不完全清楚。随着在体外具有活性的转座酶TnpEK/LP(同时含有E54K和L372P两个突变点)的成功构建,以及对Tnp催化中心三维结构的深入研究,近几年对Tn5的转座机理才有了深刻了解。本文综述了Tn5的转座机制、Tnp结构、DDE模体和转座频率调控等研究的最新进展。 展开更多
关键词 转座子 细菌 转座机理 DDE模体 转座频率
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利用Tn5-1063转座诱变法分离苜蓿中华根瘤菌042BM noeB基因的研究 被引量：13
20
作者 杜秉海 李小红 +2 位作者 林榕姗 王磊 杨苏声 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期206-209,共4页
采用三亲本杂交方法将带有Tn5 10 6 3(含luxAB)的质粒pRL10 6 3a导入苜蓿中华根瘤菌 (Sinorhizobiummeliloti) 0 4 2BM ,进行转座子插入诱变 ,在含有氯霉素、卡那霉素的TY平板上筛选接合子。通过结瘤试验 ,从 10 0 0个突变株中 ,筛选... 采用三亲本杂交方法将带有Tn5 10 6 3(含luxAB)的质粒pRL10 6 3a导入苜蓿中华根瘤菌 (Sinorhizobiummeliloti) 0 4 2BM ,进行转座子插入诱变 ,在含有氯霉素、卡那霉素的TY平板上筛选接合子。通过结瘤试验 ,从 10 0 0个突变株中 ,筛选到 3个结瘤突变株 0 4 2BMR5、0 4 2BMR11和 0 4 2BRM2 9。它们都表现出发光酶活性 ,表明转座子正向插入到基因组中的某个启动子下游。Southern杂交结果证实 ,转座子均为单一位点插入。对 0 4 2BMR5突变株基因组进行反向PCR ,扩增位于Tn5 10 6 3两端的侧翼序列。测序结果表明 ,转座子插入到苜蓿中华根瘤菌的共生质粒pSymAnoeB基因内。根据基因组中noeB上游和下游序列扩增出 0 4 2BMnoeB ,其与苜蓿中华根瘤菌 10 2 1noeB的同源性为 98% ,而与NoeB蛋白的氨基酸序列相似性为 95 %。疏水性分析发现 ,NoeB是一个跨膜蛋白 ,在N末端有 4个跨膜区 ,其中包含 3个初级螺旋和 1个次级螺旋。 展开更多
关键词 根瘤菌 豆科植物 基因 共生作用 苜蓿 结瘤突变株 发光酶活性 转座子 氨基酸序列
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