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转CaM基因工程菌的培养及重组钙调素的提纯 被引量：10
1
作者 白娟 刘洪涛 孙大业 《河北师范大学学报（自然科学版）》 CAS 1998年第3期389-391,共3页
研究了转植物CaM基因的大肠杆菌的培养以及从该工程菌中分离纯化CaM的方法，观察到在含氨节青霉素及执菌素的LB液体培养基中，在35℃培养至在600nm的光吸收为0．5～0．7后，收集菌体破碎，并经苯基琼脂糖疏水层析柱亲和层析，可得到高... 研究了转植物CaM基因的大肠杆菌的培养以及从该工程菌中分离纯化CaM的方法，观察到在含氨节青霉素及执菌素的LB液体培养基中，在35℃培养至在600nm的光吸收为0．5～0．7后，收集菌体破碎，并经苯基琼脂糖疏水层析柱亲和层析，可得到高纯度的CaM，其最高得率为每升菌液得到20mg的CaM． 展开更多
关键词 钙调素 纯化 重组钙调素 转基因工程菌 大肠杆菌
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转基因作物和工程菌对土壤微生物群落影响的浅析 被引量：6
2
作者 郑宇 李玥仁 +2 位作者 胡奇勇 李本金 胡习斌 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 2003年第S1期67-70,共4页
综述了近年来转基因作物和工程菌对土壤微生物群落影响的研究进展。对转基因作物外源基因(表达产物)释放的几种转移途径作了概述,对土壤微生物群落可能存在的影响进行简要的评述。指出这种影响是长期而复杂的,必须进行长期的研究,并对... 综述了近年来转基因作物和工程菌对土壤微生物群落影响的研究进展。对转基因作物外源基因(表达产物)释放的几种转移途径作了概述,对土壤微生物群落可能存在的影响进行简要的评述。指出这种影响是长期而复杂的,必须进行长期的研究,并对将来的工作提出几点建议。 展开更多
关键词 转基因作物 转基因工程菌 土壤微生物群落
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强化细胞外排提高工程菌类黄酮产量的策略
3
作者 马芳芳 刘冠闻 +2 位作者 庞冰 蒋春美 师俊玲 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期63-76,共14页
类黄酮的抑菌谱广、抗氧化活性高,在食品和生物医药领域应用广泛,市场需求量大,依赖于从植物中提取的现有生产技术存在诸多弊端,微生物发酵法生产类黄酮成为国际竞相发展的前沿技术。通过代谢途径改造和基因优化构建高产菌株是现有研究... 类黄酮的抑菌谱广、抗氧化活性高,在食品和生物医药领域应用广泛,市场需求量大,依赖于从植物中提取的现有生产技术存在诸多弊端,微生物发酵法生产类黄酮成为国际竞相发展的前沿技术。通过代谢途径改造和基因优化构建高产菌株是现有研究的主要策略,较少考虑类黄酮对生产菌的抑菌作用。考虑到生产菌生长受到抑制会限制发酵中类黄酮积累,本文在总结分析动物、植物、微生物中类黄酮外排机制与关键基因的基础上,结合相关基因在工程菌中成功表达的案例,提出将类黄酮外排机制和关键基因引入工程菌构建的策略,以期为类黄酮高产菌株的构建提供借鉴。 展开更多
关键词 类黄酮 类黄酮外排 衍生化 ABC转运蛋白 转基因工程菌
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干旱诱导基因GmNF-YA7克隆及植物表达载体构建 被引量：2
4
作者 殷书欣 计俊杰 +4 位作者 肖情 李铭杨 何佳琦 张军 翟莹 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期43-48,共6页
为了鉴定大豆核因子YA(Nuclear Factor YA,NF-YA)与非生物胁迫的关系,本研究检测大豆干旱胁迫下GmNF-YA7和GmNF-YA8的表达量情况,克隆GmNF-YA7基因并构建植物表达载体,同时获得其转基因工程菌株。qRT-PCR结果显示,GmNF-YA7和GmNF-YA8均... 为了鉴定大豆核因子YA(Nuclear Factor YA,NF-YA)与非生物胁迫的关系,本研究检测大豆干旱胁迫下GmNF-YA7和GmNF-YA8的表达量情况,克隆GmNF-YA7基因并构建植物表达载体,同时获得其转基因工程菌株。qRT-PCR结果显示,GmNF-YA7和GmNF-YA8均可以被干旱胁迫诱导表达,且GmNF-YA7对干旱胁迫的应答更明显。从大豆中克隆出GmNF-YA7基因,其位于大豆8号染色体上,编码含有336个氨基酸的蛋白质,预测分子量为37.06 kDa,pI6.11。GmNF-YA7蛋白氨基酸序列中含有1个CBF保守结构域。亚细胞定位预测结果显示,GmNF-YA7定位于细胞核中。蛋白系统进化分析表明GmNF-YA7蛋白与拟南芥AtNF-YA1蛋白的亲缘关系较近。利用限制性内切酶Nde I和Sal I将GmNF-YA7与植物表达载体pRI101连接并转化农杆菌EHA105,获得转基因工程菌株。 展开更多
关键词 大豆 GmNF-YA7 干旱响应 植物表达载体 转基因工程菌
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转基因工程菌的研究及其在农业中的应用
5
作者 赵莹 孙哲 +1 位作者 娄玉杰 张宏福 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第S1期295-300,共6页
转基因工程菌的构建是基因工程技术中的一个前言课题,它具有良好的产业化前景。其构建包括最佳表达载体的构建,适宜宿主细胞的选择、转化、筛选鉴定和遗传稳定性鉴定,获得质粒能稳定遗传的、高效表达的转基因工程菌等过程。就转基因工... 转基因工程菌的构建是基因工程技术中的一个前言课题,它具有良好的产业化前景。其构建包括最佳表达载体的构建,适宜宿主细胞的选择、转化、筛选鉴定和遗传稳定性鉴定,获得质粒能稳定遗传的、高效表达的转基因工程菌等过程。就转基因工程菌及其所用的载体的构建,大肠杆菌、乳酸杆菌、酵母菌和蓝藻菌等受体菌的选育,外源基因的高效表达及其在农业中的饲料用植酸酶基因工程菌,杀虫微生物农药和根瘤菌基因工程菌应用方面进行了概述,并指出了一些转基因工程菌应用的安全性及不够完善的地方。 展开更多
关键词 转基因工程菌 构建 受体菌 应用
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胞苷磷酸激酶基因的克隆与原核表达
6
作者 吴娟娟 殷冬梅 +1 位作者 翟旭光 沈勤 《现代医药卫生》 2011年第1期47-49,共3页
目的：克隆胞苷磷酸激酶（CMPK）基因,构建携带CMPK基因的原核表达载体,诱导表达具有活性的重组CMPK融合蛋白,获得转基因工程菌。方法：利用PCR法扩增大肠杆菌基因组DNA,纯化的PCR产物链接至pMD18-T载体上,得到重组质粒pMD18-T-CMPK,转... 目的：克隆胞苷磷酸激酶（CMPK）基因,构建携带CMPK基因的原核表达载体,诱导表达具有活性的重组CMPK融合蛋白,获得转基因工程菌。方法：利用PCR法扩增大肠杆菌基因组DNA,纯化的PCR产物链接至pMD18-T载体上,得到重组质粒pMD18-T-CMPK,转化E.coli BL21（DE3）感受态细胞,酶切鉴定;分别用BamH I和XhoI限制性内切酶双酶切重组质粒pMD18-T-CMPK和pET28a（＋）表达载体,连接后,转入E.coli BL21（DE3）感受态细胞,酶切鉴定。用终浓度1 mmol/L的IPTG诱导一定时间（3、6h）后,取E.coli上清液做电泳分析。结果：所获CMPK基因全长为786 bp,编码含有262个氨基酸的蛋白,当A值为0.6~0.8时重组质粒经IPTG诱导3h后,相对分子质量约30000处出现目的蛋白条带,随着时间的延长,蛋白表达量增加不明显。结论：成功地克隆CMPK基因,表达了大肠杆菌BL21（DE3）重组CMPK融合蛋白,为胞苷磷酸激酶进一步开发和应用奠定基础。 展开更多
关键词 克隆胞苷磷酸激酶(CMPK) 克隆 大肠杆菌 转基因工程菌
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导入额外拷贝dctA基因的根瘤菌工程菌株的构建
7
作者 蒙明明 于冰 +1 位作者 李珊珊 李海英 《黑龙江大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2012年第3期391-394,400,共5页
为进一步提高大豆根瘤菌的固氮能力,以费氏中华根瘤菌(Sinorhizobium fredii)15067基因组的DNA作为模板,采用PCR扩增技术,克隆四碳二羧酸转移酶结构基因dctA的全长序列;将其连入lac启动子下游,构建带有LuxAB基因标记的pTR-Plac-dctA重... 为进一步提高大豆根瘤菌的固氮能力,以费氏中华根瘤菌(Sinorhizobium fredii)15067基因组的DNA作为模板,采用PCR扩增技术,克隆四碳二羧酸转移酶结构基因dctA的全长序列;将其连入lac启动子下游,构建带有LuxAB基因标记的pTR-Plac-dctA重组表达载体。利用三亲本杂交技术将表达载体转入费氏中华根瘤菌中,构建大豆根瘤菌工程菌株。研究表明,转基因工程菌株侵染大豆幼苗后与出发菌相比,固氮酶活性有了显著提高,为提高大豆产量的研究提供一定参考。 展开更多
关键词 如以基因 转基因工程菌株 三亲本接合转移
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At7基因在植物内生芽孢杆菌A47中的表达及生物学功能测定 被引量：1
8
作者 潘丽娜 亓雪晨 +3 位作者 齐俊生 付学池 王琦 梅汝鸿 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第S1期211-,共1页
蜡样芽孢杆菌A47菌株(Bacillus cereus A47) 是从植物体内分离得到的对多种作物具有良好防病、促生、改善品质、提高抗逆性等功能的有益内生芽孢杆菌。田涛等人(2004)把来自质粒pAD4412 的启动子和gfpmut3a基因插入大肠杆菌-芽孢杆菌穿... 蜡样芽孢杆菌A47菌株(Bacillus cereus A47) 是从植物体内分离得到的对多种作物具有良好防病、促生、改善品质、提高抗逆性等功能的有益内生芽孢杆菌。田涛等人(2004)把来自质粒pAD4412 的启动子和gfpmut3a基因插入大肠杆菌-芽孢杆菌穿梭载体pBE2,构建了芽孢杆菌表达GFP的载体pGFP4412。在本研究中,用PCR的方法将信号肽序列连接到At7基因上,将该基因连同含有4412 启动子的载体pGFP4412连接,构建了重组载体 pSAt7-4412。用重组载体转化野生型生防芽孢杆菌A47菌株,获得转基因工程菌株。经过对工程菌株质粒遗传稳定性研究表明,重组质粒pSAt7- 展开更多
关键词 棉花黄萎菌 A47 At7 转基因工程菌 基因 芽抱杆菌 重组载体 植物
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三种转基因抗虫工程菌对棉铃虫的药效研究
9
作者 冉隆珣 《云南农业大学学报》 CAS CSCD 2003年第4期346-349,共4页
通过对由中国农业大学提供的PT45,PT61,WH-1这3种转基因抗虫工程菌发酵液对棉铃虫的药效研究,结果表明:PT45,PT61,WH-1三种菌种对棉铃虫幼虫具有较好的毒杀和忌避作用。其中PT45杀虫效果较好,WH-1的杀虫效果较差。3种菌对棉铃虫幼虫的... 通过对由中国农业大学提供的PT45,PT61,WH-1这3种转基因抗虫工程菌发酵液对棉铃虫的药效研究,结果表明:PT45,PT61,WH-1三种菌种对棉铃虫幼虫具有较好的毒杀和忌避作用。其中PT45杀虫效果较好,WH-1的杀虫效果较差。3种菌对棉铃虫幼虫的生长发育都有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 转基因抗虫工程菌 棉铃虫 药效试验 毒杀作用 忌避作用 棉花害虫
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