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pBIFC-VN173-CXCR4和pBIFC-VC155-NT21MP真核表达质粒的构建及其在活细胞内的作用 被引量:2
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作者 高艳军 杨清玲 +1 位作者 陈昌杰 丁勇兴 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期519-526,共8页
目的:构建pBIFC-VN173-CXCR4和pBIFC-VC155-NT21MP真核表达质粒,利用双分子荧光互补(BiFC)技术,在活细胞内直接观察趋化因子受体4(chemokine receptor 4、CXCR4和CD184)与CXCR4抑制性多肽的相互作用。方法:应用化学合成法获得巨噬细胞... 目的:构建pBIFC-VN173-CXCR4和pBIFC-VC155-NT21MP真核表达质粒,利用双分子荧光互补(BiFC)技术,在活细胞内直接观察趋化因子受体4(chemokine receptor 4、CXCR4和CD184)与CXCR4抑制性多肽的相互作用。方法:应用化学合成法获得巨噬细胞炎症蛋白Ⅱ(viralmacrophage inflammatory protein-Ⅱ,vMIP-Ⅱ)N端21肽(N-terminal 21-mer peptide,NT21MP)编码的基因序列,克隆至经Kpn I和EcoRⅠ酶切的pBiFC-VC155中,筛选含有目标基因的正确克隆。利用RT-PCR扩增人乳腺癌细胞株SKBR3的CXCR4全长基因后,T-A亚克隆至经Kpn I和EcoRⅠ酶切的pBiFC-VN173载体中。然后,经酶切鉴定及DNA测序分析2个基因是否正确连接至真核表达载体中。应用脂质体转染的方法共转染pBiFC-VC155-NT21MP和pBiFC-VC155-CXCR4至细胞株COS-7中,在荧光显微镜下观察NT21MP与CXCR4在胞内的相互作用。结果:经DNA测序及同源性对比,证实pBiFC-VC155-NT21MP和pBiFC-VN173-CXCR4重组载体构建成功;基因片段与NCBI基因库vMIP-Ⅱ和CXCR4基因CDS序列同源性达99.9%。BiFC法观察NT21MP与CXCR4在细胞内结合出现的荧光信号,该信号分布细胞内。结论:本实验成功构建了应用BiFC技术的真核表达载体,并且在活细胞内检测到NT21MP与CXCR4的互相结合。 展开更多
关键词 受体 趋化因子/遗传学 趋化因子CXCL2 质粒 重组蛋白质类/遗传学 遗传载体 转染 遗传互补测验
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SLC基因修饰对肿瘤细胞疫苗免疫效果的初步研究
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作者 马飞 孙文欣 +3 位作者 林晨 张叔人 郭素娟 徐兵河 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2008年第5期321-324,共4页
目的:构建次级淋巴组织趋化因子(secondary lymphoid-tissue chemokine,SLC)基因修饰的趋化型恶性黑色素瘤疫苗,并初步研究其免疫效果。方法:SLC基因转染小鼠黑色素瘤细胞B16,并用适当条件的丝裂霉素处理,制备趋化型肿瘤细胞疫苗。在体... 目的:构建次级淋巴组织趋化因子(secondary lymphoid-tissue chemokine,SLC)基因修饰的趋化型恶性黑色素瘤疫苗,并初步研究其免疫效果。方法:SLC基因转染小鼠黑色素瘤细胞B16,并用适当条件的丝裂霉素处理,制备趋化型肿瘤细胞疫苗。在体外,利用趋化小室法检测趋化型疫苗培养上清对小鼠脾淋巴细胞的趋化活性。在体内,用趋化型疫苗免疫小鼠,检测脾淋巴细胞的CTL活性,并观察疫苗免疫对B16移植瘤生长的影响。结果:筛选获得了SLC基因转染的小鼠黑色素瘤B16细胞,以100μg/mL丝裂霉素处理1.5h,制备趋化型肿瘤细胞疫苗。趋化型疫苗在体外培养48h后,其培养上清对淋巴细胞具有明显的趋化活性。与野生型疫苗相比,用趋化型疫苗免疫后,小鼠脾淋巴细胞的CTL活性更强,小鼠免疫后再次接种B16细胞,肿瘤的生长受到更明显的抑制。结论:成功构建了SLC基因修饰的趋化型黑色素瘤疫苗,并在体内外初步检测到该疫苗对抗肿瘤免疫的影响和对移植瘤生长的抑制,该疫苗有可能被应用于恶性黑色素瘤的免疫治疗。 展开更多
关键词 肿瘤/免疫 癌症疫苗/免疫 趋化因子类/遗传学 基因表达 肿瘤细胞 培养的
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MCP-1基因多态性与卵巢上皮癌易感性的关系研究
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作者 阮洋 陶科 +3 位作者 张冉 张克强 杨惠军 李启星 《中国医师杂志》 CAS 2014年第10期1342-1345,共4页
目的 通过对单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)基因A-2518G单核苷酸多态性的检测,探讨中国湖南地区汉族人群中MCP-1基因多态性与卵巢上皮癌易感性的关系.方法 采用病例-对照研究方法,选择临床确诊的130例标本,其中包括卵巢上皮癌组织92例,为... 目的 通过对单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)基因A-2518G单核苷酸多态性的检测,探讨中国湖南地区汉族人群中MCP-1基因多态性与卵巢上皮癌易感性的关系.方法 采用病例-对照研究方法,选择临床确诊的130例标本,其中包括卵巢上皮癌组织92例,为病例组;正常卵巢组织38例,为对照组.应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测卵巢上皮组织中的MCP-1基因A-2518G单核苷酸多态性.结果 在病例组和对照组中MCP-1基因A-2518G单核苷酸多态性均存在AA、AG和GG三种基因型.与对照组相比,病例组中AA(17.40% vs 15.79%)、AG(44.56% vs 52.63%)和GG(38.04% vs 31.58%)基因型频率分布差异均无统计学意义(P>0.05).对多个相关因素进行Logistic回归分析显示,尚不能认为MCP-1基因A-2518G单核苷酸多态性与卵巢上皮癌的发病有相关性(P>0.05).结论 在中国湖南地区汉族人群中,尚不能认为MCP-1基因A-2518G单核苷酸多态性与卵巢上皮癌的发病有关. 展开更多
关键词 趋化因子CCL2/遗传学 多态现象 遗传 多态性 限制性片段长度 聚合酶链反应 卵巢肿瘤/遗传学 病例对照研究
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