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增强型金黄色葡萄球菌肠毒素C2突变体及其超抗原活性 被引量：5
1
作者 张国俊 徐明恺 +4 位作者 孙健 李洪义 杨宏丽 张惠文 张成刚 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期803-813,共11页
金黄色葡萄球菌肠毒素C2(Staphylococcal enterotoxin C2,SEC2)作为一种超级抗原蛋白,极微量即可有效激活机体免疫系统,这一特性可应用于对肿瘤和感染性疾病的辅助治疗。为了增强SEC2的超抗原活性,应用over-lap PCR方法将SEC2中的102～... 金黄色葡萄球菌肠毒素C2(Staphylococcal enterotoxin C2,SEC2)作为一种超级抗原蛋白,极微量即可有效激活机体免疫系统,这一特性可应用于对肿瘤和感染性疾病的辅助治疗。为了增强SEC2的超抗原活性,应用over-lap PCR方法将SEC2中的102～106位GKVTG氨基酸残基分别突变为WWH、WWT和WWP,获得3种突变体ST-1、ST-2和ST-3。三种突变体刺激小鼠淋巴细胞增殖活性和肿瘤细胞生长抑制活性与野生型SEC2相比均有显著提高。ST-1和ST-3的致热活性与野生型SEC2相当,而ST-2的致热活性明显高于野生型SEC2。此外,三种突变体体外刺激淋巴细胞分泌IL-2、IFN-γ和TNF-α的水平也显著提高,这可能是导致突变体具有较高肿瘤细胞生长抑制活性的原因。进一步实验发现,三种突变体刺激下,小鼠脾淋巴细胞mVβ8.2基因的转录水平较野生型SEC2显著增加,暗示突变体对TCR mVβ8.2分子亲和力的提高,可能是其超抗原活性增强的主要原因。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌肠毒素C2 超抗原活性 T细胞受体(T CELL receptor TCR) 致热活性 细胞因子
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活性增强的SEC2截短突变蛋白的构建及其生物活性研究 被引量：1
2
作者 张国俊 邹谨 +2 位作者 徐明恺 周隽逸 张惠文 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期31-35,共5页
目的:分析金黄色葡萄球菌肠毒素C2的截短蛋白SEC14-239中7和9位氨基酸对其超抗原和抗肿瘤活性的影响。方法:利用基因工程方法将SEC14-239中7和9位Thr和Gly分别替换为Leu和Glu后,获得截短突变蛋白SEC14-239M。体外细胞学实验对其超抗原... 目的:分析金黄色葡萄球菌肠毒素C2的截短蛋白SEC14-239中7和9位氨基酸对其超抗原和抗肿瘤活性的影响。方法:利用基因工程方法将SEC14-239中7和9位Thr和Gly分别替换为Leu和Glu后,获得截短突变蛋白SEC14-239M。体外细胞学实验对其超抗原活性和抗肿瘤活性进行分析。结果:突变蛋白SEC14-239M体外刺激小鼠T细胞增值活性较SEC14-239显著增强(P<0.05),与未截短的SEC2相当(P>0.05)。在相同剂量条件下,SEC14-239M诱导的抗肿瘤活性尽管低于SEC2(P<0.01),但要显著高于SEC14-239(P<0.05)。结论:截短蛋白SEC14-239的第7和9位氨基酸突变后能显著增强其超抗原活性和抗肿瘤活性,但二者增强程度有差异。这一结果说明以定点突变改造SEC2截短体的活性是可行的,同时也暗示超抗原的T细胞增殖和诱导肿瘤细胞抑制并不完全关联。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌肠毒素C2 截短突变蛋白 超抗原活性 抑瘤活性
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肠毒素C2蛋白C,N末端对其活性的影响 被引量：1
3
作者 周隽逸 李旭 +1 位作者 张怡轩 徐明恺 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期34-38,共5页
目的:分析金黄色葡萄球菌肠毒素C2(SEC2)中N,C末端对其超抗原活性和可溶性表达能力的影响。方法:应用基因工程技术对SEC2的N,C末端进行部分删除,获得三种突变蛋白,并对其进行体外超抗原活性和可溶性表达能力的比较。结果:对SEC2的N,C末... 目的:分析金黄色葡萄球菌肠毒素C2(SEC2)中N,C末端对其超抗原活性和可溶性表达能力的影响。方法:应用基因工程技术对SEC2的N,C末端进行部分删除,获得三种突变蛋白,并对其进行体外超抗原活性和可溶性表达能力的比较。结果:对SEC2的N,C末端的删除都在一定程度上影响其超抗原活性和可溶性表达能力,其中,N末端的两个删除突变体的超抗原活性分别降低40%和48%,而删除C末端则使其可溶性表达水平下降到野生型的20%左右。结论:SEC2蛋白分子的N末端对其超抗原活性起主要作用,C末端对其可溶性表达具有显著影响,而完整的SEC2分子对于其发挥最大生物学活性是必要的。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌肠毒素C2 删除突变体 超抗原活性 可溶性表达
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金黄色葡萄球菌类肠毒素W的超抗原活性位点预测与克隆表达
4
作者 杨玉花 库鑫 +9 位作者 宫雅楠 孟凡亮 卜东波 郭亚慧 魏销玥 龙丽瑾 范佳铭 张茂俊 张建中 闫笑梅 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期629-635,共7页
目的预测金黄色葡萄球菌类肠毒素W(SElW)与T细胞受体(TCR)的对接和超抗原活性位点,并对SElW进行克隆表达和纯化。方法利用AlphaFold对SElW蛋白单体进行三维结构预测,借助SAVES在线服务器使用ERRAT、拉氏图和Verify_3D等软件对蛋白模型... 目的预测金黄色葡萄球菌类肠毒素W(SElW)与T细胞受体(TCR)的对接和超抗原活性位点,并对SElW进行克隆表达和纯化。方法利用AlphaFold对SElW蛋白单体进行三维结构预测,借助SAVES在线服务器使用ERRAT、拉氏图和Verify_3D等软件对蛋白模型进行评估。用ZDOCK服务器模拟SElW与TCR的对接构象,并对SElW与其他肠毒素的氨基酸序列进行比对。设计引物扩增selw基因,将该片段重组于pMD18-T载体中并进行测序;经限制性内切酶BamHⅠ和HindⅢ双酶切后将目的片段重组于表达质粒pET-28a(+)中,重组质粒鉴定后用IPTG诱导表达;用亲和层析法对表达于上清中的SElW蛋白进行纯化,用BCA法对蛋白进行定量。结果三维结构预测结果显示,SElW蛋白由氨基末端和羧基末端两个结构域组成,其中氨基末端结构域由3个α-螺旋和6个β-片层组成,羧基末端结构域由2个α-螺旋和7个反向平行的β-片层组成。SElW蛋白模型的整体质量因素得分为98.08,其中93.24%的氨基酸Verify_3D得分≥0.2,且无氨基酸位于不允许区。模拟对接预测选择评分最高的对接构象(评分值为1521.328)作为分析对象,采用PyMOL软件分析SElW与TCR之间形成的19个氢键。结合序列比对和既往研究结果,本研究预测发现了SElW蛋白的5个重要超抗原活性位点,分别是Y18、N19、W55、C88和C98。通过克隆表达和蛋白纯化,获得了高纯度的可溶性重组蛋白SElW。结论研究预测了SElW蛋白中5个可能的超抗原活性位点,成功构建并表达了SElW蛋白,为进一步探索SElW免疫识别机制奠定了基础。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌肠毒素 分子对接 超抗原活性位点 克隆表达
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