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质粒介导的超广谱β 内酰胺酶的耐药性问题及检测 被引量：261
1
作者 倪语星 《中华医学检验杂志》 CSCD 1999年第5期316-317,共2页
关键词 Β-内酰胺酶 耐药性 ESBLS 质粒
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重症监护室获得性感染与传播机制研究 被引量：168
2
作者 李革 卢仙娥 +3 位作者 邓济苏 王从容 曹何 余显书 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 2000年第6期404-406,共3页
目的　有效地预防和控制重症监护病室 (CIU)获得性感染的发生。方法　对某教学医院 7个 ICU中住ICU时间 48h以上的 2 83例患者进行前瞻性研究 ;并用质粒图谱及质粒限制性内切酶图谱等分子生物学方法对有流行病学相关性的感染及环境分离... 目的　有效地预防和控制重症监护病室 (CIU)获得性感染的发生。方法　对某教学医院 7个 ICU中住ICU时间 48h以上的 2 83例患者进行前瞻性研究 ;并用质粒图谱及质粒限制性内切酶图谱等分子生物学方法对有流行病学相关性的感染及环境分离株进行分析。结果　 ICU获得性感染 83例 ,感染率 2 9.33% ;感染优势菌为铜绿假单胞菌 2 7.72 %、鲍曼不动杆菌 18.81%、金黄色葡萄球菌 10 .89%、大肠埃希菌 6 .93%和真菌 11.88%。结论　患者之间交叉感染是 ICU获得性感染的主要传播机制 ;污染的氧气管、气管插管、呼吸机雾化器、导尿管、床旁柜。 展开更多
关键词 重症监护室 医院感染 传播机制 质粒
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细菌质粒介导的喹诺酮类抗菌药物耐药机制研究进展 被引量：151
3
作者 王贺 徐英春 陈民钧 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期618-620,共3页
关键词 喹诺酮类 耐药 质粒 QNR Qnr蛋白
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致病性大肠杆菌的耐药性监测 被引量：97
4
作者 雷连成 江文正 +1 位作者 韩文瑜 陈伟 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2001年第1期12-13,共2页
关键词 大肠杆菌 病原菌 抗菌药物 耐药性 监测 染色体 质粒 纸片法
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华南地区质粒介导超广谱β-内酰胺酶的基因分型研究 被引量：98
5
作者 陆坚 唐英春 +5 位作者 吴本权 张扣兴 张天托 毕筱刚 朱家馨 谈淑卿 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期638-643,共6页
目的　了解华南地区质粒介导超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)的发生率及基因型特征。方法　收集 2 0 0 1年 4月～ 9月革兰阴性菌临床分离无重复株共 1184株 ,采用NCCLS表型筛选和确认试验进行ESBLs产酶株的识别 ,E test法检测各亚型ESBLs的M... 目的　了解华南地区质粒介导超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)的发生率及基因型特征。方法　收集 2 0 0 1年 4月～ 9月革兰阴性菌临床分离无重复株共 1184株 ,采用NCCLS表型筛选和确认试验进行ESBLs产酶株的识别 ,E test法检测各亚型ESBLs的MICs值 ,质粒接合及电转化实验、耐药质粒提取及酶切指纹分析、等电聚焦电泳、PCR通用引物扩增TEM、SHV、CTX M、VEB、PER、SFO基因及其克隆测序进行ESBLs基因分型和质粒定位。结果　革兰阴性菌ESBLs的检出率为 14 .6 % (173 1184 ) ;获得产ESBLs接合子 6 7株、电转化子 11株 ,其中产CTX M 14型ESBLs为 33.3% (2 6 78)、CTX M 3为 2 3.1% (18 78)、CTX M 9为 14 .1% (11 78)、CTX M 5为 6 .4 % (5 78)、CTX M 13为 2 .6 % (2 78)、SHV 5为 7.7% (6 78)、SHV 12为 5 .1% (4 78)及SHV 2a为 2 .6 % (2 78) ,未定型为 5 .1% (4 78) ;2 9.5 %(2 3 78)野生株伴产广谱酶TEM 1或SHV 1型 ;各型ESBLs基因约定位在 35～ 190kb大小的可接合性低拷贝数天然质粒上 ;CTX M型ESBLs以对头孢噻肟高水平耐药为特征。结论　华南地区质粒介导的ESBLs以CTX M型衍生酶为主 。 展开更多
关键词 华南地区 质粒 超广谱Β-内酰胺酶 基因型 抗生素 耐药性 序列分析
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产质粒介导AmpC酶和ESBLs细菌的耐药性及β-内酰胺酶基因型研究 被引量：80
6
作者 张永标 张扣兴 +4 位作者 唐英春 陆坚 宋玮 朱家馨 谈淑卿 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期577-582,共6页
目的　了解我院同时产质粒介导AmpC酶和超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)肺炎克雷伯菌与大肠埃希菌的耐药性及其 β 内酰胺酶的基因型特征。方法　 110株临床分离无重复肺炎克雷伯菌与大肠埃希菌耐药株 ,采用酶提取物三维实验检测AmpC酶 ,美... 目的　了解我院同时产质粒介导AmpC酶和超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)肺炎克雷伯菌与大肠埃希菌的耐药性及其 β 内酰胺酶的基因型特征。方法　 110株临床分离无重复肺炎克雷伯菌与大肠埃希菌耐药株 ,采用酶提取物三维实验检测AmpC酶 ,美国临床实验室标准委员会 (NCCLS)表型筛选和确认实验检测ESBLs ;琼脂二倍稀释法测定抗生素对同时产AmpC酶和ESBLs菌株的最低抑菌浓度 (MICs) ;等电聚焦实验测定 β 内酰胺酶等电点 (pIs) ;质粒接合实验定位耐药基因 ;PCR通用引物扩增AmpC酶与ESBLs基因及其序列测定以确定其基因亚型。结果　同时产AmpC酶和ESBLs菌株在肺炎克雷伯菌与大肠埃希菌中的检出率分别为 7.7% (5 6 5 )、8.9% (4 4 5 )。该类产酶菌株产 2～ 3种pI5 .4～ 9.0 β 内酰胺酶 ,对第三代头孢菌素、氨曲南、头孢美唑和含酶抑制剂复合制剂的敏感性极低 ,但对亚胺培南均敏感。 9株质粒中均检出AmpC酶基因DHA 1亚型 ,其中 1株同时检出ACT 1亚型 ;ESBLs基因亚型分别为CTX M 14、CTX M 3、CTX M 9,各有 4、3、2株 ;有 3株还携带广谱酶TEM 1基因。结论　我院存在同时产质粒介导DHA 1、ACT 1型AmpC酶和CTX M型ESBLs肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌流行株 ,药敏检测结果显示对大多数新型广谱 β 展开更多
关键词 质粒 AMPC酶 ESBLs细菌 耐药性 Β-内酰胺酶 基因型
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应用农杆菌Ti质粒系统将外源基因转入籼稻细胞研究 被引量：34
7
作者 李宝健 欧阳学智 许耀 《中国科学（B辑）》 CSCD 北大核心 1990年第2期144-149,共6页
本文证明经复合酚类化合物预处理的菌株与籼稻培养细胞在普通培养液。特别是在复合诱导培养液(培养过番茄下胚轴切段、胡萝卜细胞及农杆菌的培养滤液)中共培养时,均可发现有较多的细菌附着于水稻细胞表面,并且菌体周围有纤维丝的形成。... 本文证明经复合酚类化合物预处理的菌株与籼稻培养细胞在普通培养液。特别是在复合诱导培养液(培养过番茄下胚轴切段、胡萝卜细胞及农杆菌的培养滤液)中共培养时,均可发现有较多的细菌附着于水稻细胞表面,并且菌体周围有纤维丝的形成。在复合处理组中,位于pGV3850::1103neo嵌合质粒T-DNA上的NPT Ⅱ基因及NOS基因在籼稻培养细胞中获得了转移与表达。Southern blot分析证明了外源基因整合到受体细胞的基因组中。 展开更多
关键词 籼稻 水稻 细胞 转化 农杆菌 质粒
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Ti质粒介导的B、t、k-δ内毒素蛋白基因转化大豆的初步研究 被引量：49
8
作者 徐香玲 高晶 +1 位作者 刘伟华 李集临 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期6-11,共6页
以Ｔｉ质粒为介导，将ｐＫＴ５４Ｂ７Ｃ５质粒上的Ｂ、ｔ、ｋ－δ内毒素蛋白基因导入东北大豆“黑农３７”、“黑农３９”等品种。采用多种外植体和感染方法，从胚轴和子叶节诱导出丛生芽与再生植株。经卡那霉素筛选和冠瘿碱检测，初步... 以Ｔｉ质粒为介导，将ｐＫＴ５４Ｂ７Ｃ５质粒上的Ｂ、ｔ、ｋ－δ内毒素蛋白基因导入东北大豆“黑农３７”、“黑农３９”等品种。采用多种外植体和感染方法，从胚轴和子叶节诱导出丛生芽与再生植株。经卡那霉素筛选和冠瘿碱检测，初步证明外源基因导入大豆基因组中。共获得８１株再生植株，其中成活３０株，仅３株结７个荚，得到７粒种子。ＰＣＲ检测和ＤＮＡ分子杂交，鉴定这７株再生植株呈阳性反应，证明外源基因已导入并整合到大豆的基因组中。７粒种子均已萌发。 展开更多
关键词 大豆 质粒 内毒素蛋白基因 再生植株
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发现一株产KPC-2型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌 被引量：60
9
作者 张幸国 杜小幸 +4 位作者 张嵘 魏泽庆 俞云松 陈亚岗 李兰娟 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期824-826,共3页
目的研究1株亚胺培南耐药肺炎克雷伯菌的耐药机理。方法采用浓度梯度法(Etest)测定细菌对各抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)。通过等电点分析(IEF)、质粒抽提、接合试验、转化试验、聚合酶链反应(PCR)扩增及耐药基因克隆测序分析细菌编码的... 目的研究1株亚胺培南耐药肺炎克雷伯菌的耐药机理。方法采用浓度梯度法(Etest)测定细菌对各抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)。通过等电点分析(IEF)、质粒抽提、接合试验、转化试验、聚合酶链反应(PCR)扩增及耐药基因克隆测序分析细菌编码的β内酰胺酶。结果临床分离的肺炎克雷伯菌等电点显示3条β内酰胺酶条带,分别为5.4、6.7和8.2。PCR 扩增测序临床分离菌含 TEM-1(pI,5.4)、SHV-12(pI,8.2)和 KPC-2(pI,6.7)β内酰胺酶编码基因。转化菌只有一条β内酰胺酶条带,为6.7。从转化菌质粒(60000bp)上获得1500bp 的克隆片段,测序证实其为KPC-2编码基因。结论亚胺培南耐药肺炎克雷伯菌的质粒上携带水解碳青霉烯类抗生素的 A 类2f组 KPC-2酶的编码基因。 展开更多
关键词 克雷伯菌 肺炎 质粒 酶类
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多重耐药肺炎克雷伯菌分子流行病学及β内酰胺酶基因型研究 被引量：54
10
作者 魏泽庆 陈亚岗 +2 位作者 俞云松 陈云波 马亦林 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期329-332,共4页
目的　了解重症监护病房 (ICU)分离的多重耐药肺炎克雷伯菌的同源性及其质粒介导的 β内酰胺酶基因型。 方法　对 6株临床分离的肺炎克雷伯菌进行浓度梯度法药敏试验、接合试验、β内酰胺酶等电聚焦电泳 (IEF)、脉冲场凝胶电泳 (PFGE)... 目的　了解重症监护病房 (ICU)分离的多重耐药肺炎克雷伯菌的同源性及其质粒介导的 β内酰胺酶基因型。 方法　对 6株临床分离的肺炎克雷伯菌进行浓度梯度法药敏试验、接合试验、β内酰胺酶等电聚焦电泳 (IEF)、脉冲场凝胶电泳 (PFGE)及聚合酶链反应 (PCR)产物克隆测序。 结果　 6株临床分离的肺炎克雷伯菌对多种抗菌药物耐药 ,其耐药表型、PFGE的条带及位置一致。 6株细菌的接合子均有等电点 (pIs) 5 .4 ,7.7,8.0 ,8.2和 8.4的条带 ,pI7.7的条带能被氯唑西林抑制 ,其他条带则能被克拉维酸抑制。PCR扩增接合子TEM、SHV和CTX M 1基因呈阳性反应 ,克隆测序分别为TEM 1、SHV 1 2和一新型 β内酰胺酶CTX M 2 2。 结论　 6株多重耐药肺炎克雷伯菌的质粒携带多个耐药基因并在ICU中引起一次小的医院感染流行。 展开更多
关键词 分子流行病学 克雷伯氏菌 肺炎 Β内酰胺酶 基因 质粒 耐药性
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鸡源大肠杆菌耐药性分析及中药对大肠杆菌耐药性消除作用的研究 被引量：57
11
作者 宁官保 牛艺儒 +11 位作者 张鼎 李宏全 马海利 高荣琨 郝卫芳 高文伟 赵宇军 高诗敏 李桂兰 李建慧 闫芳 田文霞 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1018-1025,共8页
研究鸡源大肠杆菌耐药性及中药对大肠杆菌耐药性消除作用。选择22种抗生素采用Kirby-Bauer法对山西省部分地区分离的20株致病性鸡源大肠杆菌进行耐药性检测,对分离菌株进行质粒分析和耐药质粒转化试验,并分析多种中药对大肠杆菌耐药性... 研究鸡源大肠杆菌耐药性及中药对大肠杆菌耐药性消除作用。选择22种抗生素采用Kirby-Bauer法对山西省部分地区分离的20株致病性鸡源大肠杆菌进行耐药性检测,对分离菌株进行质粒分析和耐药质粒转化试验,并分析多种中药对大肠杆菌耐药性的消除作用。结果显示,20株试验菌对测试抗生素均存在不同程度的耐药性,其中5耐及5耐以上的菌株占分离菌株的90%,试验菌对青霉素耐药率最高(90%),其次为恩诺沙星(85%),而对黏杆菌素和呋喃妥因的耐药性最低;分离出12种质粒谱型,同一地区、同一鸡场菌株的质粒图谱相同或相似,不同地区菌株的质粒图谱不同,仅有部分相同或相近的流行质粒共存;对其中5株菌株进行耐药质粒的转化试验,发现同一质粒可编码1个至数个耐药性基因,不同质粒可以携带相同的耐药性基因;中药单剂或合剂对大肠杆菌的耐药性有一定的消除作用,其中黄芩的消除效果最好,中药处理后部分菌株质粒图谱无变化,只有黄连和双黄连造成2条质粒带丢失;对中药提取物作用后的消除子进行药敏试验,结果发现大肠杆菌对环丙沙星等多种抗生素恢复了敏感性。研究结果提示联合使用中药治疗鸡源大肠杆菌病有显著效果。 展开更多
关键词 鸡 大肠杆菌 耐药 质粒 中药
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大肠埃希菌中质粒AmpC型β内酰胺酶基因型的检测 被引量：45
12
作者 陈轶兰 王辉 +1 位作者 吴伟元 陈民钧 《中国抗感染化疗杂志》 2002年第3期158-161,共4页
目的 :研究大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中AmpC型 β内酰胺酶的基因型。 方法 :收集对头孢西丁不敏感的 4 2株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌 ,用酶提取物三维试验检测AmpC酶 ;用等电聚焦电泳、接合试验、聚合酶链反应 (PCR)确定AmpC型酶的表型... 目的 :研究大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中AmpC型 β内酰胺酶的基因型。 方法 :收集对头孢西丁不敏感的 4 2株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌 ,用酶提取物三维试验检测AmpC酶 ;用等电聚焦电泳、接合试验、聚合酶链反应 (PCR)确定AmpC型酶的表型和基因型。结果 :16株菌高产AmpC酶 ,其中 11株同时产超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs) ;这 16株菌对亚胺培南敏感 ,5株只产AmpC酶的菌对头孢吡肟敏感 ;等电聚焦电泳发现这 16株菌产生 2～ 5种酶 ,且都有一个能为氯唑西林抑制的、等电点>7.8的酶带 ;1株大肠埃希菌通过接合试验可将头孢西丁耐药性传递给受体菌 ;PCR扩增和测序证实其为质粒介导的ACT 1型AmpC酶。 结论 :2 0 0 0年我院分离的对头孢西丁不敏感的 4 2株革兰阴性杆菌中证实有 15株大肠埃希菌和 1株肺炎克雷伯菌产AmpC酶 ,并在国内首次发现 1株大肠埃希菌产ACT 1型质粒AmpC酶。 展开更多
关键词 大肠埃希菌 质粒 AmpC型β内酰胺酶 基因型
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碳青霉烯类耐药的肠杆菌科细菌耐药机制研究 被引量：54
13
作者 汪玥 孙自镛 +6 位作者 陈中举 王斌 田磊 朱旭慧 李丽 张蓓 朱琴 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期339-344,共6页
目的探讨碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌（CRE）的耐药机制，建立获得性碳青霉烯酶流行监测体系。方法收集华中科技大学同济医学院附属同济医院2007年1月至2010年6月临床分离非重复肠杆菌科细菌5604株，其中美罗培南抑菌环直径≤21mm的肠... 目的探讨碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌（CRE）的耐药机制，建立获得性碳青霉烯酶流行监测体系。方法收集华中科技大学同济医学院附属同济医院2007年1月至2010年6月临床分离非重复肠杆菌科细菌5604株，其中美罗培南抑菌环直径≤21mm的肠杆菌科细菌100株。药物敏感性试验筛选出碳青霉烯类耐药菌株，采用聚合酶链反应（PCR）对碳青霉烯酶基因和基因附属结构进行分析；采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）和Southern印迹杂交方法分析耐药菌质粒；采用多位点序列分型（MLST）方法对菌株进行分型及分析同源性；采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯凝胶电泳（SDS．PAGE）方法对菌株的外膜孔道蛋白进行分析。结果共检出CRE11株，其中克雷伯菌属细菌7株。抗菌药物敏感性试验显示所有菌株对大多数抗菌药物耐药，最低抑菌浓度美罗培南8—64mg／L，亚胺培南4—64mg／L，厄他培南4～64mg／L，对氨基糖苷类和氟喹诺酮类抗菌药物的敏感性则变化较大。PCR检出IMP-4阳性菌株6株，KPC-2阳性菌株3株，其中1株ST476型肺炎克雷伯菌同时携带blaIMP-4和blaKPG-2。对基因附属结构进行分析，结果显示blakpc-2基因位于由Tn3转座子和Tn4401部分片段构成转座子上。PFGE显示大多数CRE含有3个或3个以上质粒。MLST分型发现2株肺炎克雷伯菌同属于ST476型。SDS—PAGE提示1株产酸克雷伯菌（Kox656）存在外膜孔道蛋白（OmpK35和OmpK36）双缺失。结论本院CRE主要是肺炎克雷伯菌，产生碳青霉烯酶是细菌耐药的主要原因，IMP-4是其主要酶型。碳青霉烯酶基因的出现和传播对治疗和感染控制造成巨大威胁，应重视医院细菌耐药性特点及耐药菌感染的临床流行病学资料，从而为临床合理用药提供参考。 展开更多
关键词 肠杆菌科细菌 质粒 细菌外膜蛋白质类
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产超广谱β-内酰胺酶和质粒介导的AmpC酶肺炎克雷伯菌耐药性及基因型研究 被引量：47
14
作者 王琴 姚智 +4 位作者 杨萍 胡静仪 郭海峰 张立 宋琳娜 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期256-260,共5页
目的 了解我院临床分离的肺炎克雷伯菌耐药性及超广谱β-内酰胺酶和质粒介导的AmpC酶基因型。 方法采用Microscan微生物鉴定仪、微量肉汤稀释法,测定临床分离的肺炎克雷伯菌对21种抗菌药物的敏感 性;采用聚合酶链反应(PCR)及测序技术分... 目的 了解我院临床分离的肺炎克雷伯菌耐药性及超广谱β-内酰胺酶和质粒介导的AmpC酶基因型。 方法采用Microscan微生物鉴定仪、微量肉汤稀释法,测定临床分离的肺炎克雷伯菌对21种抗菌药物的敏感 性;采用聚合酶链反应(PCR)及测序技术分析超广谱β-内酰胺酶和质粒介导的AmpC酶基因型。结果 肺炎克 雷伯菌对亚胺培南全部敏感,对环丙沙星、哌拉西林／他唑巴坦、头孢他啶、头孢西丁、头孢哌酮／舒巴坦、阿莫西 林／舒巴坦、阿米卡星、头孢噻肟和头孢哌酮的耐药率分别为36.6％、38.3％、56.7％、63.4％、81.7％、86.7％、 96.6％、98.3％和98.3％,对其他药物的耐药率为100％;60株肺炎克雷伯菌全部扩增出TEM基因,有25株细 菌检出CTX-M-Ⅰ群基因,有54株细菌扩增出DHA基因,而PER和MIR(ACT-1)全部为阴性;且有21株肺炎 克雷伯菌同时携带CTX-M-Ⅰ群、DHA和TEM基因。结论我院临床分离的肺炎克雷伯菌为多重耐药菌,同时 存在CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶和DHA-1型质粒介导的AmpC酶,尚未发现PER型超广谱β-内酰胺酶和 MIR型质粒介导的AmpC酶。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 超广谱Β-内酰胺酶 质粒 AMPC酶
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沙门氏菌的研究进展 被引量：42
15
作者 贺奋义 《中国畜牧兽医》 CAS 2006年第11期91-95,共5页
作者就沙门氏菌的毒力岛、质粒、致病机制和流行病学方面的研究作了简明扼要的概述,对沙门氏菌的防治研究具有重要的参考价值。
关键词 沙门氏菌 毒力岛 质粒 致病机制 流行病学
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乳杆菌电转化条件的研究 被引量：36
16
作者 贾士芳 王荫榆 +1 位作者 郭兴华 还连栋 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期429-433,共5页
用ｐＧＫ１２、ｐＭＧ３６Ｃ等质粒电转化不同的乳杆菌。研究了影响转化效率的多种因素。受体细胞经２０μｇ／ｍｌ氨苄青霉素处理１ｈ，可以提高转化效率２００倍。同时，发现电击后的细胞必需在高渗培养基中才能存活，电击后２～３ｈ... 用ｐＧＫ１２、ｐＭＧ３６Ｃ等质粒电转化不同的乳杆菌。研究了影响转化效率的多种因素。受体细胞经２０μｇ／ｍｌ氨苄青霉素处理１ｈ，可以提高转化效率２００倍。同时，发现电击后的细胞必需在高渗培养基中才能存活，电击后２～３ｈ的复苏表达期和用亚抑制抗生素浓度选择转化子，这些对电转化成功以及提高转化效率都是十分关键的。在改进电转化方法中，各种参数为电场强度８７５ｋＶ／ｃｍ，电阻１００Ω或２００Ω，电容２５μＦ和２×磷酸缓冲液。 展开更多
关键词 乳杆菌 质粒 电转化
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肠杆菌科细菌中质粒介导的KPC-2型碳青霉烯酶的检测 被引量：39
17
作者 张嵘 蔡加昌 +1 位作者 周宏伟 陈功祥 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1134-1141,共8页
目的研究重症监护病房（ICU）出现的碳青霉烯耐药的黏质沙雷菌、肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌等肠杆菌科细菌的分子流行病学及耐药机制。方法2006年4月-2007年2月，从我院2个ICU病房分离到对碳青霉烯耐药或敏感性降低的21株黏质沙雷菌、10... 目的研究重症监护病房（ICU）出现的碳青霉烯耐药的黏质沙雷菌、肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌等肠杆菌科细菌的分子流行病学及耐药机制。方法2006年4月-2007年2月，从我院2个ICU病房分离到对碳青霉烯耐药或敏感性降低的21株黏质沙雷菌、10株肺炎克雷伯菌和1株大肠埃希菌。用脉冲场凝胶电泳（PFGE）和肠杆菌基因间重复性一致序列-PCR（ERIC-PCR）分析这些菌株的分子流行病学。用接合试验、质粒消除试验、质粒图谱分析、等电聚焦电泳（IEF）、特异性PCR扩增和序列分析以及外膜蛋白分析等技术研究细菌对碳青霉烯耐药的分子机制。结果21株黏质沙雷菌为同一克隆株；10株肺炎克雷伯菌亲缘关系相近。亚胺培南和美罗培南对黏质沙雷菌、肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的MIC为2-8μg／ml，肺炎克雷伯菌K10为128和256μg／ml。所有菌株接合试验均获得成功，亚胺培南和美罗培南对接合子的MIC由原来的≤0．125μg／ml上升到1-2μg／ml。IEF、PCR扩增和序列分析证实黏质沙雷菌产KPC-2型碳青霉烯酶[等电点（pI）为6．7]和pI为6．5的β内酰胺酶；肺炎克雷伯菌产TEM-1（p15．4）、KPC-2、CTX-M-14（p17．9）和p1为7．3的β内酰胺酶；大肠埃希菌产KPC-2、CTX-M-15（pI9．0）和pI为7．3的β内酰胺酶；所有接合子均只产KPC-2一种β内酰胺酶。所有接合子质粒DNA的EcoRⅠ、HindⅢ和BcuⅠ限制性酶切图谱完全相同。外膜蛋白的十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺电泳和基因序列分析发现肺炎克雷伯菌K10由于OmpK36基因中存在插入序列ISEcp1而导致OmpK36膜孔蛋白的缺失。结论我院ICU病房出现大量碳青霉烯耐药的黏质沙雷菌、肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌；KPC-2是引起这些细菌对碳青霉烯耐药或敏感性降低的主要原因；KPC-2合并膜孔蛋白缺失可导致肺炎克雷伯菌对碳青霉烯高水平耐药；同一种编码blaKPC-2的质 展开更多
关键词 肠杆菌科 质粒 细菌蛋白质类 Β内酰胺酶类 卡巴配能类 抗药性 细菌
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扩展青霉碱性脂肪酶基因在毕赤酵母中的高效表达 被引量：24
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作者 袁彩 林琳 +1 位作者 施巧琴 吴松刚 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期231-235,共5页
将编码扩展青霉碱性脂肪酶 (PEL)的cDNA克隆到酵母整合型质粒pPIC3.5K ,电转化His4缺陷型巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)GS115 ,通过橄榄油 MM平板及PCR方法筛选和鉴定重组子。重组子发酵液经SDS PAGE分析、橄榄油检验板鉴定 ,表明扩... 将编码扩展青霉碱性脂肪酶 (PEL)的cDNA克隆到酵母整合型质粒pPIC3.5K ,电转化His4缺陷型巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)GS115 ,通过橄榄油 MM平板及PCR方法筛选和鉴定重组子。重组子发酵液经SDS PAGE分析、橄榄油检验板鉴定 ,表明扩展青霉碱性脂肪酶基因在巴斯德毕赤酵母中获得了高效表达。表达蛋白分泌至培养基中 ,分子量约 2 8kD ,与扩展青霉碱性脂肪酶大小一致 ,占分泌蛋白的 95 %。橄榄油检验板检验表明该表达蛋白可分解橄榄油 ,通过优化该表达菌的发酵条件 ,以橄榄油为底物进行酶活测定 ,其发酵液酶活可达 2 6 0u mL。 展开更多
关键词 扩展青霉碱性脂肪酶 巴斯德毕赤酵母 基因表达 质粒
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革兰阴性杆菌中质粒ampC基因的检测与分析 被引量：33
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作者 蒋燕群 曹娜 +2 位作者 陈泰尧 汤瑾 倪语星 《上海医学检验杂志》 北大核心 2003年第6期328-330,共3页
目的　运用多重聚合酶链反应 (PCR)检测革兰阴性杆菌的质粒ampC基因。 方法　通过热裂解获得DNA模板 ,用 6组引物进行多重PCR扩增 ,用琼脂糖凝胶电泳区分PCR产物。结果　 2 0 0株临床分离的革兰阴性杆菌中有 6株为质粒ampC基因阳性。 ... 目的　运用多重聚合酶链反应 (PCR)检测革兰阴性杆菌的质粒ampC基因。 方法　通过热裂解获得DNA模板 ,用 6组引物进行多重PCR扩增 ,用琼脂糖凝胶电泳区分PCR产物。结果　 2 0 0株临床分离的革兰阴性杆菌中有 6株为质粒ampC基因阳性。 结论　用多重PCR技术能简单、快速地检测革兰阴性杆菌质粒ampC基因 ,且特异性高。 展开更多
关键词 革兰阴性杆菌 质粒 AMPC基因 检测 分析 多重聚合酶链反应
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可移动遗传元件:耐药基因的载体 被引量：38
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作者 翁幸鐾 糜祖煌 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期389-397,共9页
细菌通过各种可移动遗传元件(质粒、转座子、整合子、噬菌体、插入序列共同区等),以基因水平转移的方式从其它细菌获得外源性耐药基因,整合在自身基因组上而产生获得性耐药。本文主要阐述各种可移动遗传元件介导获得性耐药的机制,理解... 细菌通过各种可移动遗传元件(质粒、转座子、整合子、噬菌体、插入序列共同区等),以基因水平转移的方式从其它细菌获得外源性耐药基因,整合在自身基因组上而产生获得性耐药。本文主要阐述各种可移动遗传元件介导获得性耐药的机制,理解可移动遗传元件在耐药性发展和传播上的作用,是设计和执行干预方法来减少细菌感染威胁的前提条件。本文还介绍了一种新发现的可移动遗传元件:基因转移因子,它与细菌耐药基因水平转移的关系值得研究。 展开更多
关键词 获得性耐药 基因水平转移 质粒 转座子 整合子 噬菌体 插入序列共同区 基因转移因子
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