本实验采用分步提取和膜分离结合的方法从椰肉中提取椰子谷蛋白-1,测定其氨基酸组成,利用SDS-PAGE和柱层析技术分析其分子量分布和亚基组成,利用DSC技术分析其耐热性,然后对谷蛋白-1的乳化性和起泡性进行了分析。结果表明:椰子谷蛋白-1...本实验采用分步提取和膜分离结合的方法从椰肉中提取椰子谷蛋白-1,测定其氨基酸组成,利用SDS-PAGE和柱层析技术分析其分子量分布和亚基组成,利用DSC技术分析其耐热性,然后对谷蛋白-1的乳化性和起泡性进行了分析。结果表明:椰子谷蛋白-1中含有16种氨基酸,天冬氨酸和精氨酸的含量很高,SDS-PAGE表明,椰子谷蛋白-1含有5个亚基,分子量分布在19.6~50.6 k Da之间。DSC扫描结果表明,椰子谷蛋白-1具有较好的热稳定性。功能特性实验表明,椰子谷蛋白-1有良好的乳化稳定性(85.17%±1.41%)和泡沫稳定性(89.15%±5.75%),均优于大豆分离蛋白。该结果表明椰子谷蛋白-1具有开发为乳化稳定剂和泡沫稳定剂的潜力。展开更多
【目的】水稻谷蛋白启动子GluB1(GluB1promoter,pGluB1)常用于外源基因在种子中特异性高效表达的研究,也是研究种子储藏蛋白基因表达调控机制的模型。前人研究表明,pGluB1只在水稻胚乳中表达,而在根、茎、叶片、叶鞘、颖壳等组织中均无...【目的】水稻谷蛋白启动子GluB1(GluB1promoter,pGluB1)常用于外源基因在种子中特异性高效表达的研究,也是研究种子储藏蛋白基因表达调控机制的模型。前人研究表明,pGluB1只在水稻胚乳中表达,而在根、茎、叶片、叶鞘、颖壳等组织中均无表达活性。研究的目的是为了克服种子特异表达启动子筛选周期长的缺点。【方法】将由pGluB1驱动的霍乱毒素B亚单位和重组胰岛素原组成的融合基因(a fusion gene of the cholera toxin B subunit and human proinsulin, CTBIN)表达载体pCAMBIA1302-pGluB1sig-CTBIN-NOS经农杆菌介导法转化水稻成熟胚愈伤组织。通过RT-PCR和蛋白质印迹杂交试验检测融合基因CTBIN在水稻愈伤组织中的转录和翻译表达。【结果】获得的7个转基因愈伤克隆中,有6个克隆的融合基因CTBIN在转录水平上表达。选取其中4个克隆进一步进行蛋白质印迹杂交试验检测证实融合基因CTBIN均在翻译水平上表达,而且从分子量大小推断融合蛋白包含的谷蛋白GluB1的N-端信号肽序列(24个氨基酸残基)在所测的愈伤组织细胞中均被成功切除。【结论】水稻种子特异性启动子pGluB1在愈伤组织中具有驱动外源基因表达活性,种子蛋白体亚细胞定位信号肽序列可在愈伤组织细胞中被切除。这为在愈伤组织细胞中快速检测种子特异表达启动子活性和探索愈伤组织中蛋白质的亚细胞分拣机制奠定了基础。展开更多
文摘本实验采用分步提取和膜分离结合的方法从椰肉中提取椰子谷蛋白-1,测定其氨基酸组成,利用SDS-PAGE和柱层析技术分析其分子量分布和亚基组成,利用DSC技术分析其耐热性,然后对谷蛋白-1的乳化性和起泡性进行了分析。结果表明:椰子谷蛋白-1中含有16种氨基酸,天冬氨酸和精氨酸的含量很高,SDS-PAGE表明,椰子谷蛋白-1含有5个亚基,分子量分布在19.6~50.6 k Da之间。DSC扫描结果表明,椰子谷蛋白-1具有较好的热稳定性。功能特性实验表明,椰子谷蛋白-1有良好的乳化稳定性(85.17%±1.41%)和泡沫稳定性(89.15%±5.75%),均优于大豆分离蛋白。该结果表明椰子谷蛋白-1具有开发为乳化稳定剂和泡沫稳定剂的潜力。
文摘【目的】水稻谷蛋白启动子GluB1(GluB1promoter,pGluB1)常用于外源基因在种子中特异性高效表达的研究,也是研究种子储藏蛋白基因表达调控机制的模型。前人研究表明,pGluB1只在水稻胚乳中表达,而在根、茎、叶片、叶鞘、颖壳等组织中均无表达活性。研究的目的是为了克服种子特异表达启动子筛选周期长的缺点。【方法】将由pGluB1驱动的霍乱毒素B亚单位和重组胰岛素原组成的融合基因(a fusion gene of the cholera toxin B subunit and human proinsulin, CTBIN)表达载体pCAMBIA1302-pGluB1sig-CTBIN-NOS经农杆菌介导法转化水稻成熟胚愈伤组织。通过RT-PCR和蛋白质印迹杂交试验检测融合基因CTBIN在水稻愈伤组织中的转录和翻译表达。【结果】获得的7个转基因愈伤克隆中,有6个克隆的融合基因CTBIN在转录水平上表达。选取其中4个克隆进一步进行蛋白质印迹杂交试验检测证实融合基因CTBIN均在翻译水平上表达,而且从分子量大小推断融合蛋白包含的谷蛋白GluB1的N-端信号肽序列(24个氨基酸残基)在所测的愈伤组织细胞中均被成功切除。【结论】水稻种子特异性启动子pGluB1在愈伤组织中具有驱动外源基因表达活性,种子蛋白体亚细胞定位信号肽序列可在愈伤组织细胞中被切除。这为在愈伤组织细胞中快速检测种子特异表达启动子活性和探索愈伤组织中蛋白质的亚细胞分拣机制奠定了基础。
