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谷胱甘肽S-转移酶Zeta类基因在酿酒酵母中的表达
被引量：
2
1
作者
贾向东
陈喜文
+1 位作者
陈德富
陈洁
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第5期551-556,共6页
谷胱甘肽S-转移酶Zeta类（GSTZ）是一种重要的多功能酶，与细胞生化代谢、环境净化等密切相关。将拟南芥、甘蓝型油菜品系陕2B与垦C1的GSTZ基因克隆到大肠杆菌-酿酒酵母穿梭表达载体pYES2的多克隆位点，筛选到重组子后，提取重组质粒并...
谷胱甘肽S-转移酶Zeta类（GSTZ）是一种重要的多功能酶，与细胞生化代谢、环境净化等密切相关。将拟南芥、甘蓝型油菜品系陕2B与垦C1的GSTZ基因克隆到大肠杆菌-酿酒酵母穿梭表达载体pYES2的多克隆位点，筛选到重组子后，提取重组质粒并将其转入酿酒酵母营养缺陷型菌株INVSc1细胞中，经SC-U培养基选择得到重组酵母Y2At、Y2BnB和Y2BnC。重组酵母在含棉子糖和半乳糖的诱导培养基中，表达出了具有二氯乙酸脱氯活力的谷胱甘肽S-转移酶Zeta类，且主要以可溶状态存在于酵母细胞中。不同碳源比较发现，使用半乳糖为唯一碳源时，与棉子糖和半乳糖共同使用相比，酵母生长虽受到轻微影响，但表达的GSTZ比活力几乎不受任何影响。0～96h诱导时间的优化实验表明，36h诱导下呈现最高比活力。同时也对不同GSTZ的Km值进行了比较。
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关键词
谷胱甘肽s-转移酶
zeta
类
酿酒酵母
二氯乙酸脱氯(DCA-DO)活力
下载PDF
职称材料
拟南芥谷胱甘肽S-转移酶Zeta类进化酶的获得及其特性分析
被引量：
1
2
作者
陶苏丹
陈喜文
+2 位作者
刘佳
贾向东
陈德富
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2008年第2期208-216,共9页
拟南芥谷胱甘肽S-转移酶Zeta类(AtGSTZ)是一种与细胞代谢和环境净化密切相关的多功能酶.应用易错PCR和多轮DNA洗牌技术构建了AtGSTZ随机突变文库,再利用pH指示剂颜色改变法对突变文库进行筛选,获得了9个二氯乙酸脱氯活性提高的突变子.其...
拟南芥谷胱甘肽S-转移酶Zeta类(AtGSTZ)是一种与细胞代谢和环境净化密切相关的多功能酶.应用易错PCR和多轮DNA洗牌技术构建了AtGSTZ随机突变文库,再利用pH指示剂颜色改变法对突变文库进行筛选,获得了9个二氯乙酸脱氯活性提高的突变子.其中,NN23含25个氨基酸突变,比活力提高120%,NN20含24个氨基酸突变,比活力提高102%,EC1含2个氨基酸突变,比活力提高47%,其他6个为单点突变,比活力分别提高9%～60%.酶学分析显示,所有进化酶对底物二氯乙酸的催化效率和对谷胱甘肽的亲和力以及个别进化酶的复性能力都得到不同程度的提高,但热稳定性均没有明显改善.同时,对一系列与AtGSTZ空间折叠及催化活性相关位点进行了讨论.
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关键词
进化子
二氯乙酸脱氯(DCA-DC)活性
热稳定性
复性能力
拟南芥
谷胱甘肽s-转移酶
zeta
类
下载PDF
职称材料
题名
谷胱甘肽S-转移酶Zeta类基因在酿酒酵母中的表达
被引量：
2
1
作者
贾向东
陈喜文
陈德富
陈洁
机构
南开大学生命科学学院生物活性材料教育部重点实验室
湖南怀化市铁路第一中学
出处
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第5期551-556,共6页
基金
国家教育部留学回国科研启动基金(编号:2003-406)
南开大学科技创新基金(编号:ZB0001)~~
文摘
谷胱甘肽S-转移酶Zeta类（GSTZ）是一种重要的多功能酶，与细胞生化代谢、环境净化等密切相关。将拟南芥、甘蓝型油菜品系陕2B与垦C1的GSTZ基因克隆到大肠杆菌-酿酒酵母穿梭表达载体pYES2的多克隆位点，筛选到重组子后，提取重组质粒并将其转入酿酒酵母营养缺陷型菌株INVSc1细胞中，经SC-U培养基选择得到重组酵母Y2At、Y2BnB和Y2BnC。重组酵母在含棉子糖和半乳糖的诱导培养基中，表达出了具有二氯乙酸脱氯活力的谷胱甘肽S-转移酶Zeta类，且主要以可溶状态存在于酵母细胞中。不同碳源比较发现，使用半乳糖为唯一碳源时，与棉子糖和半乳糖共同使用相比，酵母生长虽受到轻微影响，但表达的GSTZ比活力几乎不受任何影响。0～96h诱导时间的优化实验表明，36h诱导下呈现最高比活力。同时也对不同GSTZ的Km值进行了比较。
关键词
谷胱甘肽s-转移酶
zeta
类
酿酒酵母
二氯乙酸脱氯(DCA-DO)活力
Keywords
glutathione S-transferase
zeta
class
Saccharomyces cerevisiae
dichloroacetic acid dechlorinating （DCA-DC）
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
拟南芥谷胱甘肽S-转移酶Zeta类进化酶的获得及其特性分析
被引量：
1
2
作者
陶苏丹
陈喜文
刘佳
贾向东
陈德富
机构
南开大学生命科学学院
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2008年第2期208-216,共9页
基金
国家自然科学基金资助项目(30671183)~~
文摘
拟南芥谷胱甘肽S-转移酶Zeta类(AtGSTZ)是一种与细胞代谢和环境净化密切相关的多功能酶.应用易错PCR和多轮DNA洗牌技术构建了AtGSTZ随机突变文库,再利用pH指示剂颜色改变法对突变文库进行筛选,获得了9个二氯乙酸脱氯活性提高的突变子.其中,NN23含25个氨基酸突变,比活力提高120%,NN20含24个氨基酸突变,比活力提高102%,EC1含2个氨基酸突变,比活力提高47%,其他6个为单点突变,比活力分别提高9%～60%.酶学分析显示,所有进化酶对底物二氯乙酸的催化效率和对谷胱甘肽的亲和力以及个别进化酶的复性能力都得到不同程度的提高,但热稳定性均没有明显改善.同时,对一系列与AtGSTZ空间折叠及催化活性相关位点进行了讨论.
关键词
进化子
二氯乙酸脱氯(DCA-DC)活性
热稳定性
复性能力
拟南芥
谷胱甘肽s-转移酶
zeta
类
Keywords
evolved mutants, dichloroacetic acid dechlorination （DCA-DC） activity, thermostability, renaturability, A rabidopsis thaliana glutathione S-transferases
zeta
class （AtGSTZ）
分类号
Q555 [生物学—生物化学]
Q75
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
谷胱甘肽S-转移酶Zeta类基因在酿酒酵母中的表达
贾向东
陈喜文
陈德富
陈洁
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2006
2
下载PDF
职称材料
2
拟南芥谷胱甘肽S-转移酶Zeta类进化酶的获得及其特性分析
陶苏丹
陈喜文
刘佳
贾向东
陈德富
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2008
1
下载PDF
职称材料
已选择
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